斑點酶聯免疫分析儀校準用模擬斑點標準物質*

/ .上海市計量測試技術研究院；.中國計量科學研究院；.艾迪創格（北京）科技有限公司；.德國艾迪（AID)公司

0 引言

斑點酶聯免疫技術（Enzyme-linkedimmunospot,ELISPOT）在單細胞水平檢測分泌抗體的細胞或分泌細胞因子的細胞情況下，統計斑點形成細胞的數目（即斑點計數）。斑點計數是ELISPOT數據處理最重要的一步，斑點酶聯免疫分析儀可以對ELISPOT板上各孔斑點圖像進行全自動采集、計數及分析，從而評價機體的細胞免疫或體液免疫功能，廣泛應用于疫苗研究、藥物篩選、感染性疾病診斷與研究及腫瘤免疫研究等免疫學相關領域[1-4]。值得一提的是，在疫苗的臨床評價中，斑點酶聯免疫分析儀已經被強制性用于ELISPOT中[5]，能夠有效避免偏差，增加客觀性、重復性及計數速度。但是，目前國內外尚無通行的斑點酶聯免疫分析儀校準方法。

由于細胞保存條件苛刻，穩定性差，不便攜帶，不適合做斑點酶聯免疫分析儀校準用標準物質。本文根據斑點酶聯免疫分析儀的技術參數，結合酶聯斑點的培養生長特性，研制了模擬斑點標準物質，量值準確可靠，便于存放和攜帶，均勻性和穩定性良好，為斑點酶聯免疫分析儀的校準工作提供實驗基礎。

1 實驗部分

1.1 主要儀器

晶元光罩影像式坐標測量儀[七海測量技術（深圳）有限公司]，通過計量機構的校準保證儀器測量的溯源性，每次使用前，用校準過的標準板進行確認，確保儀器處在正常工作狀態。

1.2 模擬斑點標準物質的制備

1.2.1 圖案設計

根據斑點酶聯免疫分析儀的技術參數，采用AutoCAD設計模擬斑點標準物質圖形，將模擬斑點最終成像在塑料膜片上，見圖1：（1）膜片尺寸及孔位與標準96孔板一致；……