卵黃抗體的特性及其應(yīng)用研究

盛雅潔 肖春蘭 趙麗娟 周正宇

摘? 要：卵黃抗體具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，生產(chǎn)制備過程簡單、經(jīng)濟(jì)，產(chǎn)量高，適合大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)勢。在動(dòng)物疾病防治、醫(yī)藥衛(wèi)生等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用，隨著研究的不斷深入，卵黃抗體的應(yīng)用前景會(huì)更加廣闊。

關(guān)鍵詞：卵黃抗體;優(yōu)勢;應(yīng)用

中圖分類號(hào)：S852.4? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2020）7-0056-03

卵黃抗體是一種存在于卵黃中的免疫球蛋白，目前研究較多的是雞卵黃抗體。當(dāng)禽類機(jī)體受到外來抗原刺激后，法氏囊內(nèi)的B細(xì)胞分化成為漿細(xì)胞，分泌特異性抗體進(jìn)入血液循環(huán)，當(dāng)血液流經(jīng)卵巢時(shí)，特異性抗體在卵黃中逐漸蓄積，形成卵黃抗體[1]。

1? 卵黃抗體的生物學(xué)特性及理化性質(zhì)

卵黃抗體是經(jīng)血清中免疫球蛋白轉(zhuǎn)移至卵黃中積累的，因此其分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與哺乳動(dòng)物的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)相似，但是又存在一些差異[2]。卵黃抗體大部分分子結(jié)構(gòu)與哺乳動(dòng)物的免疫球蛋白IgG類似，均包括2條輕鏈和2條重鏈，中間由二硫鍵連接。與IgG一樣，F(xiàn)c片段是卵黃抗體的抗原結(jié)合部位，但是卵黃抗體的Fc片段上有2條糖側(cè)鏈，而IgG只有一條。并且卵黃抗體與IgG在Fc片段上的氨基酸組成也具有較大的差異，卵黃抗體不能夠與蛋白A或蛋白G結(jié)合，不能與人類風(fēng)濕因子結(jié)合，也不能激活補(bǔ)體，因而應(yīng)用于哺乳動(dòng)物后很少引起過敏反應(yīng)[3]。

卵黃抗體具有較強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性，變性溫度在70℃以上，能耐巴氏殺菌，在常溫或低溫冷藏條件下，抗體的活性能夠保留幾個(gè)月甚至幾年的時(shí)間。同時(shí)，也有較強(qiáng)的耐酸堿的能力，其穩(wěn)定的pH范圍很大，具有抗胃蛋白酶和胰蛋白酶降解的能力，這為口服被動(dòng)免疫治療提供了條件[4]。

2? 卵黃抗體優(yōu)勢

與產(chǎn)生于哺乳動(dòng)物血清中抗體相比，卵黃抗體具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：①制備簡單、無需采血、只需收集免疫蛋雞所產(chǎn)下的雞蛋即可，避免了常規(guī)的采血行為，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無傷害，符合動(dòng)物福利要求;②產(chǎn)量大，使用少量的免疫原免疫蛋雞即可獲得大量特異性的卵黃抗體;③抗體制備過程簡單，不需要特殊的儀器設(shè)備，成本低，一般實(shí)驗(yàn)室均可滿足;④不激活哺乳動(dòng)物的補(bǔ)體系統(tǒng)，不與類風(fēng)濕因子或Fc受體結(jié)合，避免在免疫檢測過程中產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果。

3? 卵黃抗體的提取

卵黃中的主要成分為蛋白質(zhì)和脂肪，其中大部分蛋白質(zhì)與脂肪相結(jié)合以脂蛋白的形式存在，而水溶性蛋白只有α活性蛋白、β活性蛋白以及γ活性蛋白，γ活性蛋白即卵黃抗體，因此，分離純化卵黃抗體需要去除卵黃中的脂蛋白及脂質(zhì)，再從水溶性成分中提取。卵黃抗體的分離純化方法較多，選擇何種提取及分離純化方法，需綜合考慮以下幾個(gè)方面：終產(chǎn)品的用途、純化時(shí)間、純化成本、抗體數(shù)量以及抗體活性保留要求等。目前卵黃抗體的主要提取方法包括水稀釋法、鹽析法、聚乙二醇沉淀法、硫酸葡聚糖沉淀法等[5]。

3.1? 水稀釋法? 是在中性pH和低濃度的離子環(huán)境析出卵黃中的脂蛋白，從而分離出IgY。此法具有簡便、產(chǎn)量高、經(jīng)濟(jì)成本低等特點(diǎn)。

3.2? 鹽析法? 是指溶液中加入無機(jī)鹽而使原溶液中的某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過程，鹽析破壞蛋白質(zhì)周圍的水膜，暴露疏水基團(tuán)，蛋白質(zhì)的溶解性隨著鹽濃度的不斷增加而下降并析出。鹽析法的優(yōu)點(diǎn)為對(duì)設(shè)備和條件要求低、操作簡便，但是分離能力不高。

3.3? 聚乙二醇沉淀法? 屬于有機(jī)物沉淀法。由于聚乙二醇溶解時(shí)具有散熱低，形成沉淀平衡時(shí)間短等特點(diǎn)，常用于蛋白質(zhì)的提取。

3.4? 硫酸葡聚糖沉淀法? 是將卵黃液用Tris緩沖液稀釋后，加入定量葡聚糖和氯化鈣，室溫作用30min后，離心除去沉淀，經(jīng)過飽和硫酸鈉鹽析后，可以獲得80%左右的IgY。

4? 卵黃抗體的應(yīng)用

4.1? 作為飼料添加劑? 卵黃抗體具有較強(qiáng)的免疫功能，在飼料中添加含有針對(duì)腸道病原菌的卵黃抗體可以為動(dòng)物提供被動(dòng)保護(hù)作用，抑制腸道中病原菌的粘附增殖、中和毒素，能夠調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、有效降低病原菌對(duì)動(dòng)物的損害，此外還有一定的營養(yǎng)補(bǔ)充作用，能夠促進(jìn)動(dòng)物生長[6]。在仔豬飼料中加入卵黃抗體，能夠?yàn)樽胸i提供被動(dòng)免疫保護(hù)作用，可以預(yù)防細(xì)菌性和病毒性腹瀉，還能促進(jìn)仔豬的生長發(fā)育。在牛飼料中加入卵黃抗體，可以預(yù)防犢牛腹瀉和奶牛乳房炎。在禽飼料中加入卵黃抗體的主要目的是防治禽細(xì)菌、病毒和寄生蟲性疾病。

4.2? 預(yù)防及治療口腔、咽喉疾病? 齲齒的主要致病菌為變形鏈球菌，在齲齒的發(fā)生過程中該細(xì)菌首先粘附于牙齒表面參與牙菌斑的形成，然后通過代謝糖類物質(zhì)產(chǎn)生有機(jī)酸引起牙齒硬組織的脫落，最終導(dǎo)致齲齒的發(fā)生，通過特異性卵黃抗體可以作用于變形鏈球菌，影響其粘附性可以有效預(yù)防細(xì)菌對(duì)牙齒的傷害[7]。

4.3? 作為食品添加劑? 卵黃抗體已逐漸應(yīng)用于食品工業(yè)，目前卵黃抗體主要用于嬰幼兒和老年人的食品中，以提高這些免疫弱勢群體對(duì)疾病的抵抗能力。將卵黃抗體添加到食品中，可以間接阻止食品在加工和運(yùn)輸過程中受到病原微生物的污染，保護(hù)人體健康。此外，在食品中加入卵黃抗體后對(duì)幽門螺旋桿菌的生長有明顯的抑制作用，可以用來預(yù)防或者治療胃炎、胃潰瘍及十二指腸潰瘍等疾病。

4.4? 免疫分析檢測應(yīng)用? 二十世紀(jì)80年代以來，由于商品試劑的廣泛應(yīng)用，諸如卵黃抗體特異性純化試劑盒、卵黃抗體標(biāo)準(zhǔn)化和標(biāo)簽化的抗體，卵黃抗體才開始被廣泛使用。由于卵黃抗體化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、產(chǎn)量高、成本低，滿足動(dòng)物福利的要求，以及具有動(dòng)物種系發(fā)生距離的優(yōu)勢，因此更適于生成特異性抗體[8，9]。此外，由于卵黃抗體不激活哺乳動(dòng)物的補(bǔ)體系統(tǒng)，不與類風(fēng)濕因子或Fc受體結(jié)合，從而可以避免在免疫檢測過程中產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果，在免疫檢測中可提高檢測的特異性及敏感性，基于卵黃抗體這一獨(dú)特的生物學(xué)特性，使其在免疫檢測領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。目前，卵黃抗體已應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、膠體金層析檢測試驗(yàn)、免疫沉淀、免疫印跡等免疫分析各個(gè)方面[10]。

5? 展望

雖然卵黃抗體具有制備簡單、產(chǎn)量大、無需屠宰動(dòng)物、使用安全等獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，符合動(dòng)物福利的理念，但是目前卵黃抗體的生產(chǎn)還沒形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程以及相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。隨著研究的不斷深入以及生產(chǎn)方法的不斷改進(jìn)，相信卵黃抗體的應(yīng)用前景會(huì)更加廣闊。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 曹思婷， 郭亞男， 何生虎， 等. 卵黃抗體的研究進(jìn)展[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī).2018，9：51-54.

[2]? 余運(yùn)運(yùn)， 孫麗娜， 孫萬邦.卵黃抗體的結(jié)構(gòu)與功能其在人及動(dòng)物疾病中應(yīng)用進(jìn)展[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào).2018，34（1）：67-72.

[3]? 周彥，沈定文.雞卵黃抗體（IgY）的性質(zhì)、提純及應(yīng)用于寄生蟲學(xué)的研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào).2011，27（5）：441-443，454.

[4]? 王新穎，周鶴峰，邵敏.卵黃抗體在國內(nèi)外醫(yī)藥方面的研究現(xiàn)狀[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2015，31（2）：179-182.

[5]? 李明亮，冷超糧，宋安東，等.卵黃抗體的應(yīng)用及純化研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018，15：34-38.

[6]? 王業(yè)華， 單春喬，馮柳柳，等.卵黃抗體在病毒性疾病防治中的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2019，40：120-124.

[7]? 況小靈.抗齲齒卵黃抗體預(yù)防青少年齲齒的臨床效果[J].醫(yī)療裝備，2018，31：90-91.

[8]? 王剛，呂殿紅.卵黃抗體應(yīng)用研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2002，16-18：23.

[9]? 易全茂，謝艷霞.雞卵黃抗體研究進(jìn)展[J].動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，2004，21：44-45.

[10]? 張璐，劉珍珍，寧長申，等.IgY在免疫檢測及治療中的應(yīng)用進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38：78-81.