急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血清TK1及E-cadherin蛋白表達(dá)水平及意義

邢東文 張余轉(zhuǎn) 林堅(jiān) 林魯飛

急性白血病（Acute leukemia，AL）是一種惡性疾病，AL 通常可以分為急性淋巴細(xì)胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）和急性髓細(xì)胞白血病（Acute myeloid leukemia，AML）兩類，其中以ALL 為主［1-2］。ALL 患兒骨髓中細(xì)胞異常增殖，增殖后的細(xì)胞在骨髓中蓄積，影響機(jī)體正常的造血功能，這種現(xiàn)象還會(huì)進(jìn)一步延伸至肝、腎、脾等臟器，出現(xiàn)貧血、出血、感染等癥狀。ALL 若不及時(shí)地進(jìn)行有效治療，患者生存期平均在3 個(gè)月左右，預(yù)后極差。ALL 的發(fā)病與骨髓的異常增殖有關(guān)，胸苷激酶1（Thymidine kinase 1，TK1）能夠反映細(xì)胞增殖的特征標(biāo)記物，可用于檢測體內(nèi)細(xì)胞異常增殖速度［3-4］。E-鈣粘著蛋白（E-cadherin）是一種Ca2+依賴性糖蛋白，粘附在正常上皮細(xì)胞中。在上皮起源的腫瘤中，E-鈣粘蛋白表達(dá)經(jīng)常減少，這有助于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移［5］。正常骨髓中，E-鈣粘蛋白在紅系祖細(xì)胞CD341 的干細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)，它可能促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞間的作用利于造血過程中［6］。本文就ALL 患兒血清TK1 及E-cadherin表達(dá)的臨床意義進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年3月在本院收治的ALL 患兒172 例（觀察組，n=172），其中男97 例，女75 例，平均年齡（8.18±1.13）歲，平均體重（22.01±5.29）kg，其中未合并髓外浸潤患兒102 例，合并髓外浸潤70 例，WBC 17.4×106～117.6×106，平 均（31.7±8.6）×106，其中T-ALL 63 例，B-ALL 109例。同時(shí)選取健康兒童30 例作為對(duì)照組，其中男20 例，女10 例，平均年齡（8.02±1.01）歲，平均體重（21.86±6.10）kg。兩組性別、年齡、體重比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data between 2 groups（±s）

表1 兩組一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data between 2 groups（±s）

因素性別（男/女）年齡（歲）體重（kg）觀察組（n=172）79/75 8.18±1.13 22.01±5.29對(duì)照組（n=30）20/10 8.02±1.01 21.86±6.10 t/χ2值3.559 1.331 0.236 P 值0.059 0.184 0.813

納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中的標(biāo)準(zhǔn)［6］；②年齡≤14 歲；③均為初治患兒，未經(jīng)化療；④患兒監(jiān)護(hù)人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有肝腎等重要臟器功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、先天畸形等其他疾病。

1.2 指標(biāo)檢測

采集空腹靜脈血，每個(gè)受試者取2 份，每份2 mL，3 500 r/min 離心5 min，分離血清于潔凈的Eppendorf 管中，標(biāo)記好樣本信息后置-80℃冰箱待測，采用ELISA 法檢測E-cadherin 蛋白水平。每個(gè)樣本設(shè)3 個(gè)復(fù)孔。嚴(yán)格按照E-cadherin ELISA試劑盒（海西唐生物科技有限公司）說明書操作。TK1 檢測采用ELISA 法，檢測過程及檢測儀器同E-Cadherin。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用（±s）表示，兩組間比較使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清TK1 及E-cadherin 水平比較

觀察組血清LDH 和TK1 明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而血漿E-cadherin 水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清TK1 及E-cadherin 水平比較（±s）Table 2 Comparison of TK1 and E-cadherin in serum in 2 groups（±s）

表2 兩組血清TK1 及E-cadherin 水平比較（±s）Table 2 Comparison of TK1 and E-cadherin in serum in 2 groups（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值n 172 150 TK1（pmol/L）7.50±1.33 1.10±0.42 56.519 0.000 E-cadherin（ng/mL）29.91±8.15 55.90±10.10-25.537 0.000

2.2 不同臨床特征ALL 患兒血清TK1 及E-cadherin 水平比較

ALL 患兒血清LDH 和TK1 明顯高于AML 患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而血漿E-cadherin水平明顯低于AML 患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.3 ALL 兒童血清清LDH、TK1 表達(dá)水平相互關(guān)系及其與WBC 的關(guān)系

相關(guān)分析結(jié)果顯示，ALL 患兒TK1 與E-cadherin 水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.401，P=0.001），TKA水平與WBC 水平呈現(xiàn)正相關(guān)（r=0.421，0.000），E-cadherin 水平與WCB 水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.505，P=0.000）。見圖1～3。

表3 不同臨床特征ALL 患兒血清TK1 及E-cadherin 水平比較（±s）Table 3 Comparison of LDH and TK1 in serum in ALL patients with different（±s）

表3 不同臨床特征ALL 患兒血清TK1 及E-cadherin 水平比較（±s）Table 3 Comparison of LDH and TK1 in serum in ALL patients with different（±s）

臨床特征性別年齡（y）WBC（×106）ALL 類型髓外浸潤男女≤8＞8≥32＜32 T-ALL B-ALL是否n 97 75 88 84 82 90 63 109 70 102 TK1（pmol/L）7.52±1.36 7.47±1.32 7.54±1.31 7.38±1.34 8.64±1.41 6.46±1.09 7.63±1.41 7.42±1.23 8.84±1.12 6.58±1.06 t 值0.194 0.229 6.117 0.352 6.716 P 值0.742 0.718 0.000 0.497 0.000 E-cadherin（ng/mL）29.31±7.84 30.64±8.27 30.74±8.21 28.24±8.09 22.37±6.94 36.81±8.02 30.82±8.22 29.21±7.94 24.49±7.20 33.81±11.06 t 值0.214 0.406 8.074 0.516 6.802 P 值0.733 0.592 0.000 0.357 0.000

圖1 TKA 與WBC 相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis between TKA and WBC

圖2 TK1 與E-cadherin 水平相關(guān)性分析Figure 2 Correlation analysis between TK1 and E-cadherin level

圖3 E-cadherin 與WCB 水平相關(guān)性分析Figure 3 Correlation analysis of E-Cadherin and WCB levels

3 討論

AL 疾病的顯著特征是細(xì)胞過度增殖，細(xì)胞凋亡受到抑制。許多癌基因、抑癌基因異常，相應(yīng)蛋白表達(dá)發(fā)生異常變化，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，導(dǎo)致白血病的發(fā)生［8-9］。AL 死亡率占兒童腫瘤的第一位。AL 分為ALL 和AML 兩大類，其中ALL 是AL 的主要類型，ALL 起源與單個(gè)核淋巴祖細(xì)胞，可由B 系或T 系淋巴細(xì)胞大量增殖引起，WBC 極度升高，并且極易發(fā)生髓外浸潤，如眼、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，一旦發(fā)生髓外浸潤，預(yù)后極差［10］。

TK1 是胸苷激酶的一種同工酶，有研究表明TK1 與細(xì)胞的增殖密切相關(guān)，可用于衡量腫瘤增殖速度和分期［11-12］。TK1 作為合成嘧啶中補(bǔ)救途徑的一種重要的激酶，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。既往的研究證明［13］，TK1 水平的變化取決于細(xì)胞的增殖速度，在細(xì)胞分裂的G1 期含量較低，在G1和S 期交界處開始逐漸升高，直至S/G2 期達(dá)到高峰，其含量與DNA 的合成成正相關(guān)。E-cadherin與細(xì)胞間的粘附作用密切相關(guān)，大量研究表明［14］，E-eadherin 表達(dá)降低或缺失參與多種腫瘤的發(fā)生［15］，E-cadherin 的丟失會(huì)導(dǎo)致髓系細(xì)胞粘合力的下降［16］，血液中一些整合素介導(dǎo)祖細(xì)胞和骨髓血液之間的相互作用從而改變微環(huán)境，其可能對(duì)細(xì)胞的增殖，分化和遷移產(chǎn)生重要影響。本文的研究結(jié)果顯示，在ALL 患兒，血清TK1 的水平明顯升高，而E-cadherin 的水平明顯下降，提示其在ALL 的發(fā)病或臨床行為中具有重要的作用。

在進(jìn)一步的研究中發(fā)現(xiàn)TK1 及E-eadherin 在淋巴細(xì)胞增殖及髓外浸潤的過程中具有重要的作用。白細(xì)胞負(fù)荷及髓外浸潤與患兒的預(yù)后密切相關(guān)，白細(xì)胞負(fù)荷高及發(fā)生髓外浸潤的ALL 預(yù)后更差，高白細(xì)胞負(fù)荷及髓外浸潤往往提示異常增殖的淋巴細(xì)胞具有更強(qiáng)增殖能力和侵襲能力，髓外浸潤的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，與細(xì)胞間粘附能力的下降，細(xì)胞遷徙，基底膜的功能降低等多種因素有關(guān)，E-cadherini 及TK1 可能在此過程中發(fā)揮重要的作用。而相關(guān)分析的結(jié)果提示TK1 與E-cadherini 在ALL 的發(fā)生與髓外浸潤中發(fā)揮重要的作用。其也可能通過某個(gè)途徑相互調(diào)控。

綜上所述，ALL 患兒血清TK1 水平明顯升高，而E-cadherin 水平降低，其表達(dá)水平與ALL 的白細(xì)胞負(fù)荷及髓外浸潤等生物學(xué)行為密切相關(guān)，對(duì)其進(jìn)行就檢測有助于對(duì)ALL 的臨床特性進(jìn)行評(píng)估。