流動相組分及比例對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉保留時間的影響

□ 胡 月 王志富 公安縣公共檢驗檢測中心

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉是食品中較為常見的食品添加劑，也是食品檢驗中的常規檢測項目。按照GB5009.28—2016《食品安全國家標準食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》[1]國家標準方法的條件進行測定，檢測效率并不能達到最優，需根據實際情況進行調整。通過添加不同的緩沖鹽[2]或者梯度洗脫[3，4]的方式對這3種添加劑以及更多組分進行同時測定的文獻有很多。本實驗在國家標準GB 5009.28—2016的基礎上，探討流動相組分及比例對這3種添加劑保留時間的影響，以提高日常檢測效率，為相關檢測提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

苯甲酸、山梨酸、二水糖精鈉標準物質1 mg/mL：壇墨質檢；甲醇（色譜純）：J.T.Baker；乙酸銨（色譜純）：C.N.W；甲酸（色譜純）：J.T.Baker；超純水。

高效液相色譜儀：Waters e2695，配2489紫外檢測器；超聲波清洗機：寧波新芝 SB25—12DTD。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters symmetry C18色譜柱，（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；檢測波長：230 nm；流動相1：不同體積比的甲醇和0.02 mol/L乙酸銨溶液；流動相2：不同體積比的甲醇和甲酸—乙酸銨溶液（2 mmol/L甲酸+0.02 mol/L乙酸銨）；流速：1 mL/min；進樣體積：10 μL。

1.3 標準溶液的配制

分別準確移取1 mL上述3種標準品于10 mL容量瓶中，超純水定容，配制成100 μg/mL的3種標準儲備液，臨用前用超純水稀釋成10 μg/mL的混合標準工作液。

2 結果與討論

2.1 流動相為不同體積比的甲醇和乙酸銨溶液

按照國家標準GB 5009.28—2016中甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液比例為5∶95時，按1.2中的色譜條件進行分析，3種物質分離效果比較好，但出峰時間較長，分別為苯甲酸9.018 min、山梨酸11.225 min、糖精鈉 15.246 min（圖 1）。

當樣品量較大時，在該流動相比例條件下檢測效率較低，故分析了不同體積比的甲醇和乙酸銨溶液對3種物質的保留時間影響。結果顯示，隨著甲醇比例的提高，3種物質的保留時間不斷前移。甲醇比例在7%～10%時，山梨酸和糖精鈉的保留時間比較接近甚至無法分離；甲醇比例提高到10%以上時，3種物質的出峰順序有所改變，其中糖精鈉的出峰順序移至山梨酸之前；甲醇比例在12%和13%時分離效果比較好，其中甲醇與乙酸銨溶液比例為12∶88時，保留時間分別為苯甲酸6.292 min、糖精鈉7.394 min、山梨酸8.520 min（圖2）。當甲醇比例提高到15%時，苯甲酸和糖精鈉的保留時間比較接近，分離效果不理想（圖3）。

2.2 流動相為不同體積比的甲醇和甲酸-乙酸銨溶液

國家標準GB 5009.28—2016中提到，當樣品中基質較為復雜，存在干擾峰時，可以采用加入甲酸的流動相來測定，故本實驗也研究了流動相中加入甲酸后對3種物質保留時間的影響。

圖1 甲醇與0.02 mol/L乙酸銨比例為5∶95時的標準樣品色譜圖

圖2 甲醇與乙酸銨比例為12∶88時的標準樣品色譜圖

圖3 甲醇與乙酸銨比例為15∶85的標準樣品色譜圖

實驗結果顯示，甲醇比例為5%時，3種物質的分離效果較好，其中山梨酸出峰最慢，保留時間較長，分別為苯甲酸12.516 min、糖精鈉15.151 min、山梨酸 23.124 min（圖 4）。

圖4 甲醇與甲酸-乙酸銨比例為5∶95的標準樣品色譜圖

當甲醇比例提高至10%以上時，糖精鈉最先出峰，甲醇比例接近10%為15∶85時，分離效果較好，保留時間分別為糖精鈉5.317 min、苯時，糖精鈉和苯甲酸分離效果不好，甚至出峰時間重疊（圖5）。

圖5 甲醇與甲酸-乙酸銨比例為10∶90時的標準樣品色譜圖

當甲醇與甲酸—乙酸銨溶液比例甲酸6.418 min、山梨酸10.122 min（圖 6）。

圖6 甲醇與甲酸-乙酸銨比例為15∶85的標準樣品色譜圖

3 結論

流動相中未加甲酸時，隨著甲醇比例的提高，3種組分的出峰順序會由苯甲酸、山梨酸、糖精鈉變化為苯甲酸、糖精鈉、山梨酸，且甲醇與乙酸銨溶液體積比為12%～13%時，分離效果良好；流動相中加入甲酸時，甲醇比例提高后，出峰順序由苯甲酸、糖精鈉、山梨酸變化成糖精鈉、苯甲酸、山梨酸，且甲醇與甲酸—乙酸銨溶液體積比為15∶85時，分離效果較好。