突托蠟梅活性成分研究

李余先

突托蠟梅Chimonanthusgrammatus? ?M.? C.? Liu，為贛南地區特有民間藥用植物，僅分布于江西省安遠縣部分鄉鎮[1]，民間用于防治感冒和流行性感冒，在贛南客家人群中發揮著重要的藥用價值。當地養殖戶時常在魚塘中投放突托蠟梅葉用以防治魚病發生，亦取得了良好效果，上述應用提示突托蠟梅葉中具有抑菌抗病的活性物質。汪涯[2]等已從突托臘梅葉中分離、鑒定四種具有抑菌活性的化合物。本研究近一步對其抗菌活性成分開展探究，為突托蠟梅產品開發提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

植物材料采自江西省安遠縣，經吉林農業科技學院張忠寶教授鑒定為突托蠟梅，大腸桿菌（Escherichia? coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus? aureus）為本實驗室保存提供。柱色譜硅膠（200～300目，青島海洋化工廠）TLC薄層板（青島海洋化工廠）;Sephadex LH-20（Pharmacia? 公司），其他試劑均為分析純。

1.2 儀器設備

Eyela旋轉蒸發儀;高分辨質譜儀（MicrOTOF，瑞士Bruker公司）;BP211D電子天平（Sartorouius? 公司）;YOKO-CS薄層色譜紫外檢測器（武漢藥科新技術公司，中國）。

1.3 方法

1.3.1 成分提取分離鑒定

取干燥的突托蠟梅葉粉碎（6.0kg），80%乙醇回流反復提取3次，乙醇用量20L/每次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏。加以水混懸浸膏，石油醚、乙酸乙酯依次萃取，石油醚萃取部位（71g）經正相硅膠柱色譜分離，石油醚-丙酮（100∶1-0∶1）梯度洗脫，TCL跟蹤檢測，合并后得8個組分Fr? A-H.? FrB經反相硅膠C8柱色譜，甲醇-水（30∶7-100∶0）梯度洗脫，TLC分析合并得5個組分（FrB1-FrB5），FrB4經過Sephadex? LH-20葡聚糖凝膠柱色譜，氯仿-甲醇（1∶1）洗脫，TLC分析合并等3個組分（FrB4-1-FrB4-3）。FrB4-2經HPLC（乙腈-水，洗脫）制備純化得到化合物1（6.0mg），2（10.0mg），3（15mg）。NMR確定化合物3化學結構。

1.3.2 抑菌活性測定

MIC指標測定參考張鳳梅[3]微量肉湯稀釋法改進如下：制備濃度為10mg/mL化合物3抗菌液，-20℃貯存備用。挑取MH（A）培養基上過夜培養的單菌落置于MH培養基中，1.0麥氏比濁標準校準，1∶3稀釋到108CFU/mL，再1∶100稀釋為1×106? CFU/mL。將濃度為10mg/mL的抗菌藥液稀釋，取200uL置于無菌96孔板的第一孔內，第二孔至第六孔依次加入100uL? MH肉湯培養基，從第一孔移取100uL溶液加入第二孔，混勻，以此類推，第六孔稀釋后棄去100uL。此時各孔藥物濃度依次為10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.3125mg/mL，第七孔加入陽性對照菌液，第八孔加入陰性對照培養基。

2 結果

化合物3黃色粉末。ESI-MS? m/z? 345[M+H]+。1? H-NMR（CDCl3，500? MHz）δ：7.72（1H，d，J=8.5? Hz，H-6′），7.69（1H，s，H-2′），6.97（1H，d，J=8.5? Hz，H-5′），6.45（1H，br? s，H-8），6.36（1H，br? s，H-6），3.99（3H，s，-OMe），3.88（3H，s，-OMe），3.87 （3H，s，-OMe）。以上數據與文獻 [4]報道一致，故鑒定其結構為 7，3'，4'-三甲氧基槲皮素，見圖1。

MIC結果顯示7，3’，4’-三甲氧基槲皮素對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度MIC一致，說明其對上述兩種菌抑制強度無顯著差異。

3 討論

本研究從突托蠟梅葉的石油醚提取部位分離得到3個化合物，鑒定1個化合物，數據與文獻對比確定為7，3’，4’-三甲氧基槲皮素。抑菌活性結果顯示，該化合物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有較好的抑制作用，這與突托蠟梅的民間應用相符，為突托蠟梅的產品開發提供了實驗參考。

參考文獻

[1] 彭九生，肖忠優，劉光正，等.突托蠟梅生物學特性與種群分布初步 研究[J].江西林業科技，2002（1）：1-4.

[2] 汪涯，王凌云，鄒崢嶸，等.突托蠟梅葉化學成分及其抑菌活性[J]. 食品科學，2013，34（19）.

[3] 張鳳梅.一種晾曬煙及兩種煙草添加機植物的植物化學成分與活性研究[D].云南大學，2018，12.

[4] 駱麗萍，成凡欽，季龍，等.毛酸漿的化學成分研究[J].中國中藥雜志，2015，44（22）：4424.