紅珍珠牌雪之健膠囊急性毒性和遺傳毒性的實驗研究

馬文俊 劉有菊

【摘要】目的：研究紅珍珠牌雪之健膠囊的急性毒性和遺傳毒性實驗，評價其食用安全性。方法：依據《食品安全性毒理學評價程序和方法》進行急性毒性實驗、遺傳毒性實驗（Ames實驗、骨髓細胞微核實驗和精子畸形實驗）。結果：小鼠急性毒性實驗經口最大耐受劑量（MTD）>30 g/kg·bw，屬無毒級。Ames實驗、骨髓細胞微核實驗和精子畸形實驗結果均為陰性，表明受試物無致突變作用。結論：紅珍珠牌雪之健膠囊急性毒理分級屬無毒級，無遺傳毒性，在本實驗劑量范圍內，紅珍珠牌膠囊屬于安全性保健食品。

【關鍵詞】紅珍珠牌雪之健膠囊;急性毒性;遺傳毒性

[中圖分類號]R114 ? [文獻標識碼]A ? [文章編號]2096-5249（2020）15-000-03

紅珍珠牌雪之健膠囊根據青藏高原民間驗方“三果養生膏”配方，應用傳統醫學與現代營養的結合，古法炮制與現代工藝的結合，精選海拔3000米左右青藏高原特色草本植物白刺果、沙棘果、柴達木枸杞果等為主要原料制成的保健食品。這些生物資源在醫藥、保健食品、保健飲料和保健化妝品等方面具有廣泛的用途。高血脂、高血壓、動脈硬化、冠心病及免疫功能低下是國內外常見的心血管疾病。紅珍珠牌雪之健膠囊是以白刺果、沙棘果、枸杞果等為基礎原料外，配方中的決明子、紅花、葡萄籽等均屬藥食兩用的天然物質，在中醫臨床和民間藥食治療高脂血癥方面有廣泛的應用，這些配料均有調節血脂保健功效研究通過動物實驗，利用中藏藥、營養保健食品研究的新方法、新技術和現代分析測試，證明了降血脂保健功能，同時明確了降血脂的功能因子（即有效成分），為廣大心血管疾病患者提供安全無副作用，純天然的綠色藥物和保健食品。研究通過紅珍珠牌雪之健膠囊對小鼠經口急性毒性和遺傳毒性試驗，為進一步開發紅珍珠牌雪之健膠囊保健食品應用提供一定的理論依據及參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 受試樣品紅珍珠牌“雪之健”膠囊，由金訶藏藥股份有限公司提供。樣品內容物呈棕褐色，樣品用蒸餾水配制成所需濃度液體。

1.1.2 實驗動物和飼養環境昆明種小鼠，清潔級，體重18-22g，動物合格證號：青醫動字第001號，由青海省實驗動物中心提供;實驗動物購進后首先于恒溫恒濕的動物房環境中適應3天，單籠飼養;實驗動物飼料由浙江省實驗動物中心提供，執行標準GB1429-2010。

1.1.3 菌株鼠傷寒沙門氏菌TA 97a、TA 98、TA 100、TA 102。由上海市疾病預防控制中心提供。

1.1.4 主要儀器超凈工作臺、電子天平、壓力蒸汽滅菌器、HH-6數顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）、培養箱、恒溫電熱鼓風干燥箱。

1.2方法

1.2.1急性毒性實驗[1] 按最大耐受量試驗方法進行，取健康昆明種小鼠50只，體重18-22g，雌雄各半。于正式試驗前晚禁食，次日，用經過三次預試后確定的30g/kg劑量，經口灌胃給藥后，觀察兩周，記錄小鼠中毒表現、死亡情況。

1.2.2 Ames實驗[2] 按照《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003年版）第一部分毒理學評價檢驗、鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶（Ames實驗）方法進行試驗。

1.2.3小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗[3] 健康KM種小鼠50只，體重25-30g，隨機分為5組，雌雄各半，10只/組。根據急性毒性實驗LD50值，設3個受試物組（1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50）即15.00、7.50、3.75g/（kg·BW）3個樣品劑量組，分別稱取紅珍珠牌雪之健膠囊15.00、7.50、3.75g，加蒸餾水20mL溶解待用，另設40 mg/（kg·BW）環磷酰胺為陽性對照組、離子水陰性對照組;給藥后各組均間隔24h灌胃0.20mL/10g體重，于末次灌胃給藥后6h脫頸椎處死，取雙側股骨，滴加1滴小牛血清，制成細胞懸液，涂片制片，油鏡下選擇細胞分散好、形態完整、染色良好部位，按一定順序進行計數。計數嗜多染紅細胞（PCE）及帶微核的細胞（MNPCE）共1000個，每只小鼠計數微核的千分率。

1.2.4小鼠精子畸形實驗[4] 選25-30g健康KM種雄性小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，給藥組按1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50，40mg/kg·bw環磷酰胺陽性對照組、陰性對照組（離子水），各組雄性小鼠按照相應的劑量，分別連續灌胃5d后，喂養觀察30d。于第35d處死小鼠，取兩側副睪的精子涂片精子，按規定涂片制成。觀察計數各組小鼠完整精子1000個，計算精畸率。

1.3統計學處理 應用spss17.0軟件進行數據的統計分析，以均數±標準差（_x±s）形式表示。

2 結果

2.1紅珍珠牌雪之健膠囊對小鼠急性毒性實驗的結果 經觀察兩周，雌雄兩組動物均未發現中毒癥狀、異常反應，生長良好，觀察期未見死亡。于實驗末，處死實驗小鼠，解剖經肉眼觀察心、肝、脾、肺腎等主要臟器，未發現臟器異常。紅珍珠牌雪之健膠囊對小鼠急性毒性試驗LD50>30g/kg·bw。根據急性毒性分級標準，屬無毒級，見表1。

2.2紅珍珠牌雪之健膠囊Ames實驗結果 由表2、表3可見，經兩次Ames實驗，5個劑量組回變菌落數與自發回變菌落數相比較，四種菌株再加與不加S-9的條件下，均無顯著性差異;而陽性對照回變菌落數高于陰性對照組回變菌落數的2倍以上。表明紅珍珠牌“雪之健”膠囊無致突變作用。

2.3小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗 由表4可見，紅珍珠牌雪之健膠囊高、中、低劑量組與空白對照組比較，微核千分率均無統計學意義（P>0.05），而環磷酰胺組微核率則顯著高于空白對照組，有統計學意義（P<0.01）。表明紅珍珠牌雪之健膠囊對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率未見明顯影響，檢測結果為陰性。

2.4小鼠精子畸形實驗 由表5可見，紅珍珠牌雪之健各劑量組小鼠精子畸形率與空白組比較，小鼠精子畸形率無顯著性差異（P>0.05），而環磷酰胺組與空白組比較，小鼠精子畸形率明顯升高，差異有統計學意義（P<0.01）。

3 討論

高脂血癥是各種原因導致的血清中膽固醇或甘油三酯水平升高的一類疾病。近30年來研究表明，血脂異常是我國人群心血管疾病的重要危險因素之一，人群血脂水平和血脂異常患病率在快速增高，人群血脂水平和血脂異常患病率在快速增高，經濟發達地區人群、中老年人群患病相對較高。攝入太多食物的脂肪，這些因素直接導致人體新陳代謝速度減慢，血液流速會減慢，血黏度迅速升高，造成心腦供血不足，如果不及時防范、調理、將會引發冠心病、高血壓、腦血栓等心腦血管疾病。甘油三脂、膽固醇、低密度脂蛋白的升高，均能導致血液黏稠度過高。目前降脂的西藥雖然較多，但有一定的不良反應，服藥期間還應檢測其副作用。

紅珍珠牌雪之健膠囊配方原料，唐古特白刺果實和種子富含生物堿、黃酮類、氨基酸等生物活性成分，其中總黃酮的含量為1.46%～1.65%[5]。《藏醫精髓與醫學寶典》記載：“白刺果可入藥，健脾胃、滋補強身、舒筋活血，主治肺病和胃病，果核可榨油”。其果實富含的有益成分，能有效降低大鼠的血脂含量[6]。藥理研究及臨床發現，配方中的枸杞子有效成分-枸杞多糖、紅花提取物、沙棘中的黃酮類、決明子蒽醌類對高脂血癥模型動有降脂作用，其中有效成分可有效降低血脂膽固醇和甘油三脂水平，對心腦血管疾病起到一定的預防作用[7-8]。葡萄籽含有多酚類物質（GPS）：兒茶素類和原花青素類，不飽和脂肪酸，粗蛋白、氨基酸和維生素A、E、D、K、P及多種微量元素;其葡萄籽提取物原花青素可降低血脂水平、預防心腦血管疾病[9]。研究提示，實驗條件下，紅珍珠牌雪之健膠囊對小鼠經口急性毒性最大耐受量（MTD），雌、雄小鼠經灌胃給予金訶牌雪益康膠囊30g/kg，均未出現死亡、異常情況，解剖肉眼觀察各個臟器未發現明顯異常，按急性毒性分級標準判定，金訶牌雪益康膠囊屬無毒級;且遺傳毒性試驗均未見致突變作用。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛生部， 中國國家標準化管理委員會. GB15193. 3—2003食品安全性毒理學評價程序急性毒性試驗[S]. 北京： 中國標準出版社， 2003.

[2] 國家質量監督檢驗檢疫總局. GB15193. 4—2003食品安全性毒理學評價程序和方法： 鼠傷寒沙門氏菌哺乳動物微粒體酶試驗[S]. 北京： 中國標準出版社， 2003： 35-43.

[3] 國家質量監督檢驗檢疫總局. GB15193. 5—2003食品安全性毒理學評價程序和方法： 骨髓細胞微核試驗[S]. 北京： 中國標準出版社， 2003： 47-48.

[4] 黃聘和， 敬明武， 蔣勇， 等. 小鼠精子畸形試驗的方法學探討[J]. 預防醫學情報雜志， 2017， 33（8）： 809-812

[5] 楊仁明， 索有瑞， 王洪倫. 唐古特白刺果實化學成分和功效作用研究進展[J]. 天然產物與研究開發， 2012， 24（7）： 985-989.

[6] 索有瑞， 王洪倫， 汪漢卿. 柴達木盆地唐古特白刺果實降脂和抗氧化作用研究[J]. 天然產物研究與開發， 2004， 16（1）54-58.

[7] 劉勇， 廉永善， 王穎莉， 等. 沙棘的研究開發評述及其重要意義[J]. 中國中藥雜志， 2014， 39（9）： 1547-1552.

[8] 成龍， 梁日欣， 楊濱， 等. 紅花提取物對高脂血癥大鼠降脂和抗氧化的實驗研究[J]. 中國實驗方劑學雜志， 2006， 12（9）： 25-27.

[9] 趙超英， 姚小曼. 葡萄籽提取物原花青素的營養保健功能（綜述）[J]. 中國食品衛生雜志， 2000， 12（6）： 38-41.

基金項目：藏藥新藥開發國家重點實驗室（NO.2015DQ870717）;青海省藏藥新藥開發重點實驗室（NO.2017-ZJ-Y15）

作者簡介：馬文俊（1984-），男，在讀碩士，助理研究員，主要從事藏藥新藥及保健食品的研究開發。