清炎合劑的定性鑒別研究

鄒昱蕾 張韶湘 楊皓然 余曉玲

昆明市中醫醫院制劑科，云南 昆明 650011

清炎合劑是在我院老中醫行醫多年的驗方基礎上研制的醫院制劑，由金銀花、連翹、防風、荊芥、白芷、蔓荊子、黃芩、天花粉、生地黃、赤芍、當歸、香附、桑白皮、桔梗、高良姜、陳皮、炒建曲、甘草等18味藥組成，以金銀花、連翹清熱、解毒為君藥；荊芥、防風、白芷、蔓荊子、黃芩祛風清熱，天花粉、生地黃增強清熱之功共為臣藥；當歸、赤芍、香附活血散瘀，桑白皮、桔梗合甘草瀉熱利咽。苦寒清熱藥中反佐高良姜以免藥物格拒，且配香附行氣溫中以制苦寒太過，陳皮、炒建曲理氣行滯和胃，均為佐藥；甘草調和諸藥為使，全方共奏清熱解毒、活血祛風之功效，主治風熱毒邪上擾，脈絡阻滯所致喉痹、乳娥、鼻塞、目赤腫痛，用于咽炎等五官科慢性炎癥。臨床使用多年，療效較好。為加強對制劑質量控制，綜合分析處方中各藥味的性質，從該方君藥中選取連翹、臣藥中選取黃芩、佐藥中選取赤芍，對其主要有效成分進行薄層色譜法研究，制定該制劑的質量標準，為臨床安全用藥提供理論基礎和科學依據。

1 藥品與試藥

清炎合劑(批號：20180916、20181228、20190328昆明市中醫醫院)；連翹苷對照品(批號110821-201816)、黃芩苷對照品(批號110715-201821)、芍藥苷對照品(批號110736-201943)，均來源于中國食品藥品檢定研究院；1%香草醛硫酸溶液、 2%三氯化鐵乙醇溶液、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、乙醚、正丁醇、正己烷、1%氫氧化鈉、濃氨液、三氯甲烷、甲醇、氯仿、水；試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 連翹的鑒別 取清炎合劑50 mL，水浴濃縮至約25 mL，放冷，乙醚振搖提取2次，每次25 mL，棄去乙醚提取液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25 mL ，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水30 mL洗滌1次，棄去水洗液，取正丁醇提取液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，加于中性氧化鋁柱(100～200目，2.5 g，內徑1～1.5 cm，干法裝柱)上，用甲醇30 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液[1]。另取處方中除去連翹的其他藥味, 按處方比例同法制成缺連翹的陰性對照樣品。取陰性對照樣品50 mL, 同供試品溶液的制法, 制成陰性對照溶液。取連翹苷對照品，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各5～10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(7∶1)為展開劑展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點[2]。陰性對照在相應位置無斑點, 表明陰性對照無干擾。如圖1所示。

2.2 黃芩的鑒別 取清炎合劑30 mL，水浴蒸干，殘渣加甲醇20 mL使溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。

另取處方中除去黃芩的其他藥味, 按處方比例同法制成缺黃芩的陰性對照樣品。取陰性對照樣品30 mL, 同供試品溶液的制法, 制成陰性對照溶液。

取黃芩苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。

照薄層色譜法(中國藥典通則0502)試驗，吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液各5～10 μL、對照品溶液5 μL，分別點于同一4%醋酸鈉溶液制備0.4%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。在供試品的薄層色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點[3-4]。陰性對照在相應位置無斑點, 表明陰性對照無干擾。如圖2所示。

2.3 赤芍的鑒別 取2.1項下的供試品溶液作為供試品溶液。另取處方中除去赤芍的其他藥味, 按處方比例同法制成缺赤芍的陰性對照樣品。取陰性對照樣品50 mL, 同供試品溶液的制法, 制成陰性對照溶液。取芍藥苷對照品，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各3～5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點[5]。陰性對照在相應位置無斑點, 表明陰性對照無干擾。如圖3所示。

圖1 連翹TLC色譜 圖2 黃芩TLC色譜 圖3 赤芍TLC色譜

3 討論

清炎合劑經臨床驗證療效確切、效果顯著。有研究表明，清炎合劑除直接具有抑菌作用外還有增強機體免疫力而達到抑菌的作用[6]。連翹清熱解毒，為方中君藥，具有抗菌、抗病毒等多種藥理活性[8]，其中木脂素類有效活性成分連翹苷含量較高；黃芩祛風清熱，為清炎合劑中的臣藥之一,其黃芩苷含量較高, 有大量文獻闡述黃芩中黃芩苷為主要藥效成分, 且被證實存在廣泛的藥理活性, 具有解熱抗炎、抗微生物等多種藥理作用[9-10]；赤芍活血散瘀，主要含有芍藥苷, 羥基芍藥苷等豐富的苷類化合物, 故選定其主要活性成分芍藥苷作為定性指標。綜上，采用薄層色譜法對制劑中連翹、黃芩、及赤芍進行定性鑒別, 對于清炎合劑的質量控制具有重要意義。

清炎合劑處方藥味較多，在檢測中相互之間有干擾，研究中發現，黃芩的鑒別如采用《中國藥典》方法[1]，樣品以乙酸乙酯-甲醇(3∶1)提取，無法得到清晰斑點，原因可能為乙酸乙酯-甲醇(3∶1)溶劑系統極性較弱，增加了脂溶性成分的溶出和分離難度；本研究采用甲醇為溶劑進行提取，因甲醇極性較大，對弱極性成分提取效率較低，干擾較少，故可得到清晰斑點。連翹及赤芍的鑒別，供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上顯一個相同顏色的斑點，而按處方比例同法制成的陰性對照樣品，無相應斑點，即陰性無干擾，說明此鑒別有一定的專屬性。

本研究對制劑中連翹、黃芩、赤芍進行TLC 定性鑒別，建立的質量控制分析方法,并經過對多批產品的驗證,結果表明，該質量控制所采用的方法專屬性強、靈敏度高、重復性好、方法簡便、準確，可用于清炎合劑質量控制中的定性鑒別方法。