非洲馬瘟概況綜述

吳顥　趙靜　肖冉　王巧娜　阮征

摘要：介紹了非洲馬瘟病原學、流行病學、臨床癥狀、病理變化、診斷及疫苗研究情況，分析了非洲馬瘟防控現狀，提出了防控非洲馬瘟的目標及措施，為我國防范非洲馬瘟疫情提供依據。

關鍵詞：馬瘟;非洲馬瘟病毒;防控

中圖分類號：S858.21 ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ?文章編號：1007-273X（2020）08-0008-03

非洲馬瘟（African horse sickness， AHS）是由非洲馬瘟病毒（African horse sickness virus， AHSV）感染馬屬動物引起的一種急性或亞急性非接觸的蟲媒介傳染病[1]。普遍認為AHS原發于非洲，庫蠓是其傳播媒介[2]，以擬蚊庫蠓（Culicoides imicola）為主。該病病程短、死亡率高，有明顯的季節性和地域性，多見于溫熱潮濕季節，在非洲撒哈拉沙漠以南是地方性流行病。世界衛生組織（OIE）將其列為A 類動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。馬屬動物感染后的臨床癥狀根據種類不同而不同，主要表現為發熱、皮下水腫和病毒血癥，嚴重時伴有組織和臟器出血。馬最易感，病死率可達95%，相反斑馬和驢感染后幾乎不表現出臨床癥狀。近年來周邊國家頻頻出現AHS疫情，同時我國也存在超過300種庫蠓屬昆蟲，為AHS在我國暴發提供了條件。如何有效預防AHS是我國面臨的全新挑戰。

1 ?病原學

AHSV是呼腸孤病毒科（Reoviri-dae）環狀病毒屬（Orbivirus）的成員，環狀病毒屬還包括藍舌病病毒（Bluetongue virus， BTV）、流行性出血熱病毒（Epizootic hemorrhagic disease virus，EHDV）以及馬器質性腦病病毒（Equine encephalitis virus，EEV）。其中AHSV與EEV和BTV較為相似[1]。

AHSV病毒顆粒直徑約為75 nm，主要由衣殼（Capsid）、內膜（Inner envelop）、內核心殼（Core shell）和病毒基因組（Genome）構成[2]。32個殼粒構成衣殼雙層20面立體對稱結構，基因組為10個長短不等的雙鏈RNA 片段，3個長片段L1～L3;3個中等片段M4～M6;4個短片段S7～S10。分別編碼結構蛋白VP1～VP7及非結構蛋白NS1～NS3和 NS3A。蛋白VP1、VP3、VP4、VP6、VP7構成內衣殼。蛋白VP2、VP5構成外衣殼[3]。3個非結構蛋白（NS1、NS2和NS3/3A）主要存在于受感染的細胞中[4]。

AHSV病毒有9個抗原性不同的血清型（AHSV 1～9），但在血清學試驗或疫苗免疫上經常出現某些交叉反應[5]。1型至8型只存在于撒哈拉沙漠以南的部分地區，但20世紀90年代在西班牙和葡萄牙暴發的AHS是由4型引起的。9型分布最為廣泛，在非洲之外也有流行。2019年，斯威士蘭、乍得向OIE報告發生非洲馬瘟疫情，2020年泰國向OIE報告發生非洲馬瘟疫情，都疑似由9型引起的。

AHSV病毒對酸堿度較為敏感，pH低于6.0易失活，pH 3.0迅速失活，pH 7.0～8.5則保持活性。對乙醚、氯仿等有一定的抵抗力，還能抗胰蛋白酶，但在0.1%甲醛溶液中48 h即可被滅活。不耐高溫，于60 ℃ 30 min即失活。

AHSV病毒在血液或血清中可長期存活，在4 ℃或室溫條件下甚至可存活多年。即使載體腐敗，病毒仍能存活。病毒經Parker培養基培養后，凍干或-70 ℃冷凍保存，復蘇后保持較高活性，但在（-50）～（-20） ℃極易失活[6]。

2 ?流行病學

2.1 ?流行現狀和地理分布

目前，AHSV 在撒哈拉沙漠南部的非洲熱帶和亞熱帶地區呈地方性流行，范圍很廣，西起塞內加爾、埃塞俄比亞，東至索馬里，并且向南擴展至南非北部[7，8]。后傳播到北非、中東、阿拉伯半島、西南亞和地中海區域國家。1987—1990年，傳播至西班牙、葡萄牙。2020年3月泰國也暴發非洲馬瘟疫情，目前它在亞洲的流行病學情況還不清楚。

2.2 ?傳染源、易感動物和傳播途徑

自然條件下，斑馬是AHSV的天然宿主，但其基本不表現臨床癥狀，在病毒傳播中主要作為傳染源。馬屬動物及其雜交種都是易感動物，馬尤其是幼齡馬最為易感;騾較易感;驢具有耐受性。AHSV主要依靠蟲媒介傳播，由庫蠓類昆蟲叮咬在易感動物間傳播，其中擬蚊庫蠓是最重要的傳播媒介。伊蚊、蟄蠅、按蚊等吸血昆蟲也可傳播。我國存在的藍舌病也由此類蟲媒傳播，表明AHSV在我國傳播有成熟條件。

3 ?臨床表現

AHSV自然感染的潛伏期一般為5～7 d，根據引起臨床癥狀的不同可分為發熱型、心型、肺型和混合型[8]。

發熱型是最輕型，通常只有溫和到中等程度的發熱和眶上窩水腫，無死亡，病程短，很快恢復正常。多發生在低毒力株病毒感染，或是發生于具有一定抵抗力的感染動物，是斑馬惟一能表現出來的癥狀類型[9]。

心型呈亞急性型，以持續幾周的發熱為特征。病程發展很慢，有部分病例可恢復。主要的臨床表現是皮下水腫，表現為頭部、頸部皮下水腫，發熱，上眼瞼、口唇和腭等部位腫脹，并向胸、肩及腹部擴展。發生水腫的部位不會低于四肢。有時結膜充血，眼中有出血點，舌的腹側面可能有出血斑。常伴有腹痛癥狀，致死率超過50%[2]。瀕死期病馬有呼吸頻率增加、倒地橫臥、肌肉震顫、出汗等表現。

肺型呈極急性經過，發展非常快，多見于流行初期或新發病的地區。通常有明顯的精神沉郁和發熱（40～42 ℃），心跳加速、呼吸困難導致痙攣性咳嗽，頭頸大量出汗，最終鼻孔擴張，流出大量泡沫樣液體，結膜發紺。患此型疾病的馬匹多數因呼吸困難而死亡，僅有少數病例恢復，預后極度不良，致死率常常超過95%[7]。

混合型是AHS最常見的類型，呈現肺型和心型兩種病型的臨診癥狀，多呈亞急性經過，心肺混合型。致死率約70%，通常在發熱開始后的1周內因肺水腫和心臟衰竭而死亡[2]。

4 ?病理變化

不同類型病變各異，但主要特征為急性肺水腫和心肌損害（心肌炎和心肌的彌漫性出血），心肺有黃色膠凍樣液體，肝輕度腫脹，淋巴結急性腫脹，脾多不腫大。

肺型最顯著的病變是肺小葉間水腫和胸腔積液。全肺呈粉紅色或紅色，整個支氣管樹充滿白色泡沫。腹部和胸腔內充滿大量黃色透明液體。胃底部充血，腸系膜、腹膜、盲腸和結腸漿膜有點狀出血。

心型最主要的損傷是皮下、筋膜下、肌內組織出現大量的黃色明膠樣液體，肌肉呈茶褐色并有出血。心包內充滿黃色或紅褐色液體，心內外膜點狀或斑狀出血。肺臟在非混合型感染時有點狀出血。盲腸和結腸漿膜表面有出血點。肝臟腫大呈暗褐色、脂肪變性、充血。脾臟腫大，有大量出血點。

混合型的損傷與心型和肺型所發生的損傷一樣。

5 ?診斷

OIE和FAO等國際組織推薦的AHSV實驗室檢測方法主要分為病原學和血清學檢測方法。病原學方法主要是病毒分離和鑒定。血清學檢測方法有補體結合試驗、酶聯免疫吸附試驗、中和試驗。

5.1 ?病原學檢測

病料樣品采集：病畜全血應于發熱期采集，最好用EDTA或OPG（50%甘油水溶液+0.5%草酸鈉溶液+0.5%石炭酸溶液）處理，4 ℃保存待檢[8]。血清采集雙份，分別在急性期和康復期或急性期和相隔21 d采集，于-20 ℃保存。取病死動物的脾、肺和淋巴結在研缽中用無菌沙研磨后，加入10%甘油制備成10%～20%的懸浮液，4 ℃保存或送檢[8，10]。

病毒分離、鑒定：2～4日齡的乳鼠腦內接種是原代分離AHSV的首選方法。取血液或肺、脾、淋巴結等病料的滅菌上清液，接種于2～4日齡乳鼠腦內，觀察4～10 d;若出現神經癥狀則需要在乳鼠腦內繼代接種。也可用感染組織處理后的上清液、紅細胞裂解液接種倉鼠腎細胞、馬腎細胞及雞胚細胞進行病毒培養，觀察細胞病變或進行熒光抗體染色檢查。

5.2 ?血清學檢測

5.2.1 ?補體結合（CF） ?試驗因補體結合反應抗體是群特異性的，與非洲馬瘟的9種補體抗原具有群特異性反應。可用滅活的馬屬動物血清（60 ℃ 30 min）進行補體結合試驗對該病進行診斷。

5.2.2 ?中和抗體試驗（VN） ?因中和抗體是型特異性抗體，滴度上升較慢，需要5 d或更多時間才能得出結果，故診斷價值小，主要用于AHSV的血清分型。

5.2.3 ?酶聯免疫吸附試驗 ?ELISA具有群特異性和高敏感性，建立的間接ELISA方法可以鑒別血清中的非洲馬瘟病毒抗體，具有良好的特異性和靈敏性。目前商業化ELISA試劑盒的準確率達95%。

5.2.4 ?RT-PCR ?敏感性和特異性高，可檢測多種樣品，操作簡單快速，是目前用于實驗室診斷的主要方法。原理是基于AHSV基因組s7的設計特異引物，然后進行熒光定量檢測。經試驗實時熒光定量RT-PCR快速檢測方法靈敏度可達10拷貝/μL。

5.2.5 ?環介導等溫擴增原理 ?基于AHSV的VP7保守序列，設計特異性擴增引物。然后通過對反應體系中各組分濃度、反應溫度及時間的優化，建立快速、靈敏的檢測方法。該檢測方法具有快速、特異、靈敏、操作簡單、設備要求低的特點，適合用于AHSV現場快速檢測。

鑒別診斷應注意與馬器質性腦病、血小板減少性紫癜和馬病毒性動脈炎、馬鉤端螺旋體病、巴貝斯蟲病等區別。尤其是易與馬器質性腦病引起的臨床癥狀和損傷相混淆[11，12]。

6 ?疫苗

6.1 ?弱毒疫苗

多價弱毒疫苗能產生穩定的免疫力，但偶爾會有嚴重的副作用，風險較大[13，14]。

6.2 ?滅活疫苗

滅活疫苗的優點是不會有嚴重副作用。但生產成本較高，且接種程序復雜，才能達到較高水平保護性免疫力[15]。

6.3 ?亞單位疫苗

體外表達VP2和VP5蛋白作為疫苗的基礎組分。接種該疫苗的動物能產生針對同源病毒的中和抗體，有明顯保護作用。

無疫情國家及地區均禁止使用AHS弱毒疫苗，以防控為主。

7 ?防控目標

基于泰國發生非洲馬瘟疫情，最近疫點離我國邊境直線距離不足800 km，疫情傳入我國的風險較高。而我國是已獲得OIE認可的非洲馬瘟歷史無疫國。故防控AHS的目標是采取一切措施防止AHSV傳入我國。當發生可疑病例時，應及時確診，并進行隔離;一旦確診，立刻按照《中華人民共和國動物防疫法》的規定采取緊急、強制性的控制和撲滅措施。封鎖疫區，撲殺病畜并作無害化處理，對被病畜污染的環境進行徹底消毒，噴灑殺蟲劑、驅蟲劑等消滅媒介昆蟲。

8 ?防控措施

8.1 ?加強邊境防控

高度警惕境外傳入風險，密切關注境外疫情動向 ，抓好疫情預警、邊境地區防控、口岸檢疫、野生馬屬動物巡查、打擊走私等工作，嚴防非洲馬瘟疫情傳入。

8.2 ?提升應急能力

應建立完善的AHS監測體系和應急隊伍，一旦發現馬屬動物出現AHS臨床癥狀，或大量發病死亡等情況，能進行快速反應、及時處置，防止疫情擴散。

8.3 ?夯實技術儲備

要深入開展非洲馬瘟病毒病原學研究，加強快速診斷等技術研究儲備。組織具備條件企業緊急生產、儲備相應數量應急用疫苗。加強實驗室檢測能力，提高非洲馬瘟病原學檢測能力。

8.4 ?加強宣傳培訓

加大非洲馬瘟防控知識宣傳普及力度，提升馬屬動物養殖、經營等相關從業人員生物安全意識。提升畜牧獸醫人員開對非洲馬瘟的預警水平和早期識別、及時報告、快速處置能力。

9 ?展望

AHS是馬類疾病中致死率最高的一種疾病，雖然地域性較強，但近年來全球一體化進程加劇，疫病流行范圍急劇擴大，經由鄰近國家傳入我國風險與日俱增。而目前AHS疫苗發展不足以應對疾病暴發。要提高防控意識，強化防控手段，將疫病拒之于國門之外。同時加大對疫苗研究的投入。吸取國外優秀防控經驗，建立快速高效的非洲馬瘟檢測監測方法，針對AHSV流行病學以及病原學特征加強聯防聯控，避免我國畜牧業遭受損失。

參考文獻：

[1] COETZER J A W，THOMSON G R，TUSTIN R C. Infectious diseases of livestockwith special reference to southern Africa[M].New York：Oxford University Press，1994.460-475

[2] SELLON D C，LONG MT.Equine Infectious Diseases[M].2nd edn. Philadelphia：Elsevier Health Sciences，2014.181-188.

[3] GRIMES J，BASAK A K，ROY P，et al.The crystal structure of bluetongue virus VP7[J].Nature，1995，373：167-170.

[4] GRUBMAN M J，LEWIS S A.Identification and characterisation of the stuctural and nonstructural proteins of African horse sickness virus and determination of the genome coding assignments[J].Virology，1992，186：444-451.

[5] LAVIADA M D，ROY P，SANCHEZ-VIZCAINO J M，et al.The use of African horse sickness NS3 protein expressed in bacteria，as a marker to differentiate infected from vaccinated horses[J].Virus research，1995，38：205-218.

[6] MIRCHAMSY H，HAZRATI A.A review of the aetiology and pathology of African horse sickness[J].Arch Inst Razi，1973，25：23-46.

[7] MELLOR P S.Epizootiology and vectors of African horse sickness virus[J].Comp Immunol Microbiol Infect Dis，1994，17：287-296.

[8] BRYANS J T，GERBER H. Equine Infectious Diseases III[M]. Paris：Elsevier Inc ，1972.

[9] HOWELL P G. Emerging Diseases Ofanimals[M].Rome FAO Agricultural Studies，1963.71-108

[10] HAMBLIN C，ANDERSON E C，MELLOR P S，et al.The detection of African horse sickness virus antigens and antibodies in young Equidae[J].Epidemiol Infect，1992，108：193-201.

[11] COETZER J A W，THOMSON G R，TUSTIN R C.Infectious diseases of livestock with special reference to southern Africa[M].Cape Town：Oxford University Press，1994.476-479.

[12] VENTER G J，GROENEWALD D，VENTER E，et al.A comparison of the vector competence of the biting midges，Culicoides （Avaritia） bolitinos and C.（A.）imicola，for the Bryanston serotype of equine encephalosis virus[J].Med Vet Entomol，2002，16：372-377.

[13] NOBEL T A，NEUMANN F.Vaccination against African horse sickness and postvaccination reactions in Israel[J].Refu Vet，1961， 18：168-173.

[14] PARVI K M，ANDERSON C R.Isolation of vaccine strains of African horse sickness virus from brains of two horses given polyvalent vaccine[J].Indian J Vet Sci Anim Husb，1963，33：215-219.

[15] STUDDERT M J.Virus infections of vertebrates[M].Elsevier Press：Amsterdam，1996：101-123.

收稿日期：2020-06-10

作者簡介：吳 ?顥（1987-），男，湖北武漢人，助理獸醫師，碩士，主要從事重大動物疫病防控工作，（電子信箱）150303893@qq.com;通信作者，

阮 ?征（1966-），男，正高級畜牧師，主要從事重大動物疫病防控工作，（電子信箱）972147621@qq.com。