Galectin-2在妊娠期糖尿病患者中的表達(dá)及其與胰島素抵抗的關(guān)系

禤文婷 陳麗霞 黎美金

摘要：目的? 探討半乳糖凝集素-2（Galectin-2）在妊娠期糖尿病（GDM）患者中的表達(dá)情況，分析其與胰島素抵抗的關(guān)系及臨床意義。方法? 選擇2018年1月～2019年12月在我院定期產(chǎn)檢和住院分娩的GDM患者50例作為觀察組，另選取我院同期健康孕婦35例作為對(duì)照組，比較兩組血清和胎盤組織中Galectin-2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平，并分析Galectin-1表達(dá)與胰島素抵抗的關(guān)系。結(jié)果? GDM組血清中Galectin-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為（0.621±0.105），高于對(duì)照組的（0.152±0.089），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。GDM組胎盤組織中Galectin-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為90.00%，中表達(dá)占40.00%，高表達(dá)占30.00%，高于對(duì)照組的77.14%、20.00%、14.29%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Spearman相關(guān)分析顯示，Galectin-2的表達(dá)水平與胰島素抵抗指數(shù)呈正相關(guān)（r=0.605，P=0.043）。結(jié)論? Galectin-2在妊娠期糖尿病患者血清和胎盤組織中的表達(dá)增高，且與胰島素抵抗密切相關(guān)，提示其可能參與妊娠期糖尿病的病理過程。

關(guān)鍵詞：Galectin-2;妊娠期糖尿病;胰島素抵抗

Abstract：Objective? To investigate the expression of Galectin-2 （Galectin-2） in patients with gestational diabetes （GDM）， and to analyze its relationship with insulin resistance and its clinical significance.Methods? 50 patients with GDM who received regular check-ups and hospitalized deliveries in our hospital from January 2018 to December 2019 were selected as the observation group， and 35 healthy pregnant women during the same period in our hospital were selected as the control group，the expression levels of Galectin-2 mRNA and protein in serum and placental tissues of the two groups were compared， and the relationship between Galectin-1 expression and insulin resistance was analyzed.Results? The relative expression of Galectin-2 mRNA in the serum of the GDM group was （0.621±0.105）， which was higher than that of the control group （0.152±0.089），the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of Galectin-2 protein expression in placenta tissue of GDM group was 90.00%， medium expression accounted for 40.00%， high expression accounted for 30.00%， which was higher than 77.14%， 20.00%， 14.29% of control group，the difference was statistically significant （P<0.05）.Spearman correlation analysis showed that the expression level of Galectin-2 was positively correlated with insulin resistance index （r=0.605，P=0.043）.Conclusion? The expression of Galectin-2 in serum and placenta tissues of patients with gestational diabetes was increased， and it was closely related to insulin resistance， suggesting that it may be involved in the pathological process of gestational diabetes.

Key words：Galectin-2;Gestational diabetes;Insulin resistance

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指既往無糖尿病的孕婦在妊娠期間首次發(fā)生的糖代謝異常。GDM嚴(yán)重危害母嬰健康，不僅可導(dǎo)致巨大兒、胎兒窘迫、產(chǎn)后出血等多種不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，并顯著增加孕婦及其子代罹患肥胖、糖尿病等代謝性疾病的風(fēng)險(xiǎn)[1]。GDM發(fā)病機(jī)制尚未闡明，目前普遍認(rèn)為胰島素分泌缺陷和胰島素抵抗是其發(fā)病的重要環(huán)節(jié)和特征。Galectin-2屬于半乳糖凝集素（Galectins）家族成員，可通過糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域與β-半乳糖苷殘基結(jié)合，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和免疫反應(yīng)等生物學(xué)過程。近年研究發(fā)現(xiàn)Galectins與糖尿病、高脂血癥等代謝性疾病密切相關(guān)。Galectin-2在GDM患者中的表達(dá)及其作用的研究報(bào)道較少。基于此，本研究旨在探究Galectin-2在GDM患者血清和胎盤組織中的表達(dá)情況及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2018年1月～2019年12月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬東莞人民醫(yī)院產(chǎn)檢并住院分娩的GDM患者50例作為觀察組，年齡23～39歲，平均年齡（28.89±2.91）歲;分娩孕周34～39周，平均分娩孕周（37.13±3.01）周;體重指數(shù)（BMI）19～26 kg/m2，平均BMI（22.51±1.52）kg/m2;初產(chǎn)婦22例，經(jīng)產(chǎn)婦28例。另選取同期年齡、孕周相匹配的健康孕婦35例作為對(duì)照組，年齡21～38歲，平均年齡（27.35±4.11）歲;分娩孕周35～39周，平均分娩孕周（38.52±1.52）周;BMI 19～24 kg/m2，平均BMI（20.15±1.23）kg/m2;初產(chǎn)婦16例，經(jīng)產(chǎn)婦19例。兩組年齡、BMI、分娩孕周比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)附屬東莞人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)? 納入標(biāo)準(zhǔn)：①單胎妊娠;②觀察組患者均符合2010年國(guó)際糖尿病與妊娠關(guān)系研究協(xié)會(huì)（IAPSG）制定關(guān)于GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)：空腹血糖<5.1 mmol/L，餐后1 h血糖<10.0 mmol/L，餐后2 h血糖<8.5 mmol/L;其中1項(xiàng)達(dá)到或者超過上述界值，即可診斷為GDM。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往糖尿病、先天性心臟病、肝炎、甲狀腺功能異常或其他自身免疫性疾病者。

1.3方法? 血液樣本：在孕早期（8～12周）產(chǎn)檢當(dāng)天空腹采集靜脈血，測(cè)定血糖和胰島素水平，根據(jù)穩(wěn)態(tài)模型法計(jì)算胰島素抵抗指數(shù);分離血清，置于-80 ℃凍存?zhèn)溆谩ＬケP樣本：孕產(chǎn)婦分娩后取出胎盤，立即用生理鹽水沖洗，近臍帶附著處取組織2塊，其中一份組織置于-80 ℃凍存?zhèn)溆茫硪环萁M織加入10%中性福爾馬林固定24 h，梯度脫水后石蠟包埋備用。RT-PCR法檢測(cè)Galectin-2 mRNA表達(dá)：使用RNAiso Plus提取總RNA。使用RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性1 min，60 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共30個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。PCR引物序列：Galectin-2（上游引物：5-GAAGATCACAGGCAGCATCG-3，下游引物：5-ACAGGTGATCTTCCCGTTGT-3）、β-actin（上游引物：5-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3，下游引物：5-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3）。PCR產(chǎn)物經(jīng)過1.5%的瓊脂糖凝膠電泳后，采用凝膠分析儀掃描分析。免疫組化染色法檢測(cè)Galectin-2蛋白表達(dá)：胎盤石蠟包埋組織切片經(jīng)脫蠟、水化后，使用PBS磷酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù);加入2% H2O2，室溫孵育15 min;加入美國(guó)Abcam公司生產(chǎn)的小鼠抗人Galectin-2多克隆抗體（1∶500稀釋），4 ℃孵育過夜;PBS漂洗3次，10 min/次;加入HRP標(biāo)記羊抗小鼠二抗，室溫孵育25 min，DAB顯色。

1.4結(jié)果判讀? 由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行閱片。采用文獻(xiàn)報(bào)道的評(píng)分方法[2]，結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞比例（無=0，<10%=1，10%～50%=2，51%～80%=3，>80%=4）和染色強(qiáng)弱（無=0，弱=1，中=2，強(qiáng)=3）的乘積進(jìn)行免疫反應(yīng)評(píng)分（IRS），按照評(píng)分的分值判斷為陰性（0～3分），低表達(dá)（4～6分），中表達(dá)（7～9分）和高表達(dá)（9～12分）。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以（n）表示，采用？字2檢驗(yàn);采用Spearman相關(guān)分析Galectin-2表達(dá)狀態(tài)與胰島素抵抗指數(shù)的關(guān)系;以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組Galectin-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較? RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，GDM組血清Galectin-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量為（0.621±0.105），高于對(duì)照組的（0.152±0.089），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.171，P<0.05），見圖1。

2.2兩組Galectin-2蛋白相對(duì)表達(dá)量比較? 免疫組化染色結(jié)果顯示，Galectin-2蛋白主要表達(dá)于胎盤滋養(yǎng)葉細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，見圖2。GDM組胎盤組織中Galectin-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為90.00%，中表達(dá)及高表達(dá)占比均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=36.026，P<0.05），見表1。

2.3 Galectin-1表達(dá)與胰島素抵抗的關(guān)系? GDM患者胎盤組織中Galectin-1蛋白的免疫反應(yīng)評(píng)分與胰島素抵抗指數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.605，P=0.043），見圖3。

3討論

GDM是妊娠常見的并發(fā)癥，其發(fā)病率在不同地區(qū)、不同人群中存在較大差異，變化范圍在9.3%～25.5%之間[3]。近年來，隨著人們生活方式改變和高齡孕婦日漸增多，我國(guó)GDM的發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)。北京地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查顯示，2005～2012年GDM的發(fā)病率從14.7上升至19.7%[4]。GDM臨床過程復(fù)雜，容易造成多種不良妊娠結(jié)局，增加母嬰遠(yuǎn)期心血管和代謝性疾病患病風(fēng)險(xiǎn)[5-8]。GDM孕婦產(chǎn)后5～16年內(nèi)發(fā)展為糖尿病的累積發(fā)病率可高達(dá)36%，與孕期血糖正常的孕婦相比較，GDM孕婦未來發(fā)生糖尿病的幾率增加7倍。因此，深入研究GDM的發(fā)病機(jī)制，尋找早期診斷的生物標(biāo)志物具有重要意義。

GDM的病因和發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明，GDM患者存在不同程度的胰島素抵抗、胰島素分泌不足和炎癥反應(yīng)狀態(tài)[9]。Galectin-2是一種β-半乳糖苷結(jié)合蛋白，參與調(diào)節(jié)機(jī)體的炎癥免疫反應(yīng)、葡萄糖和脂肪代謝等多種生物學(xué)過程[10]，其中Galectin-2表達(dá)于多種炎癥免疫細(xì)胞，通過誘導(dǎo)細(xì)胞遷移、激活和釋放炎癥因子發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用;Galectin-2參與葡萄糖和脂肪代謝過程，其基因多態(tài)性已被證實(shí)與高空腹胰島素水平和心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。另外，Galectin-2可與淋巴毒素-α（LTA）相結(jié)合并調(diào)節(jié)LTA的表達(dá)，下調(diào)Galectin-2表達(dá)可降低LTA細(xì)胞外的水平，同時(shí)降低炎癥反應(yīng)和冠心病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GDM組血清Galectin-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組（P<0.05），說明將血清Galectin-2 mRNA表達(dá)作為GDM早期診斷生物標(biāo)記物具有可行性。另外，GDM組胎盤中Galectin-2蛋白表達(dá)水平高于高于對(duì)照組（P<0.05），而且GDM患者胎盤組織中Galectin-2蛋白的免疫反應(yīng)評(píng)分與胰島素抵抗呈正相關(guān)（P<0.05），說明GDM患者胎盤組織中Galectin-2蛋白表達(dá)隨著胰島素抵抗程度的增加而升高，提示Galectin-2可能通過調(diào)控胰島素抵抗參與GDM的發(fā)病，臨床可通過靶向干預(yù)Galectin-2表達(dá)，減輕胰島素抵抗，可能成為GDM藥物治療研究的新方向。 綜上所述，Galectin-2在妊娠期糖尿病患者血清和胎盤組織中的表達(dá)增高，且與胰島素抵抗密切相關(guān)，提示其可能參與妊娠期糖尿病的病理過程。

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收稿日期：2020-05-22;修回日期：2020-06-01

編輯/杜帆