免標(biāo)記比色核酸適配體傳感器同步快速檢測(cè)孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠

吳文偉, 王 翌, 劉可鑫, 李天松*, 楊詠潔*

(1. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 吉林 延吉 133002; 2. 北華大學(xué)理學(xué)院, 吉林 吉林 132001)

孔雀石綠(malachite green, MG)屬于三苯甲烷類染料。它既是染料,也是殺菌劑,具有較強(qiáng)的抗真菌、抗寄生蟲(chóng)和防腐的功效,曾被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[1]。然而,MG具有潛在的致畸、致癌和致突變作用[2],現(xiàn)已被世界各國(guó)列為水產(chǎn)品養(yǎng)殖禁用藥物[3]。無(wú)色孔雀石綠(leucomalachite green, LMG)是MG在生物體內(nèi)的主要代謝還原產(chǎn)物。與MG相比,LMG在體內(nèi)殘留的半衰期更長(zhǎng)、毒性更強(qiáng)[4],可作為MG殘留檢測(cè)的主要標(biāo)志物[5]。然而,MG防霉效果顯著,價(jià)格低廉,用量少,易得到,致使MG殘留的食品安全事件頻頻發(fā)生，這不僅給消費(fèi)者健康帶來(lái)了極大的安全隱患,也給我國(guó)水產(chǎn)品出口貿(mào)易造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。

截至目前,MG或LMG的檢測(cè)方法主要有兩大類。一類是儀器分析檢測(cè)法,包括高效液相色譜法(HPLC)[6]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[7]。這些方法靈敏且可靠,但樣品制備煩瑣耗時(shí)，儀器昂貴且需要專業(yè)的儀器操作人員,難以滿足基層現(xiàn)場(chǎng)快速篩查的要求。另一類是快速檢測(cè)分析法,常見(jiàn)的有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[8]、表面增強(qiáng)拉曼散射免疫測(cè)定[9]、膠體金免疫層析法(GICA)[10]和化學(xué)發(fā)光免疫分析法[11]等。這些方法雖然操作簡(jiǎn)便，快速,但多數(shù)以單克隆抗體為檢測(cè)探針。單克隆抗體存在制備煩瑣、價(jià)格昂貴、穩(wěn)定性差、難以保存和運(yùn)輸?shù)热秉c(diǎn)[12]。而且,單克隆抗體只能檢測(cè)單一指標(biāo),無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)MG和LMG的同時(shí)快速檢測(cè)。因此,針對(duì)該問(wèn)題,本課題組前期篩選獲得了能夠同時(shí)識(shí)別MG和LMG的雙特異性核酸適配體aptamer3(A3)。……