12株雛雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

盧國民 韓明寶 陳書文 尤永君*

（1.天津瑞普生物技術股份有限公司，天津 300380；2.河北廊坊康達畜禽養殖公司，河北廊坊 065000）

12株雛雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

盧國民1韓明寶1陳書文2尤永君1*

（1.天津瑞普生物技術股份有限公司，天津 300380；2.河北廊坊康達畜禽養殖公司，河北廊坊 065000）

本文通過對河北某大型孵化場雛雞卵黃囊進行病料采集，利用病原分離、培養特性、染色特性、生化試驗等對病原進行了分離鑒定，結果表明，分離出的大腸桿菌對大多數抗菌藥物敏感。

雛雞；大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗

早期雛雞檢測對早期雛雞細菌性疾病具有重要意義，本文對河北某孵化場60只雛雞進行卵黃囊細菌分離鑒定及藥敏試驗，為開口藥及細菌病的預防提供依據。

1 材料與方法

1.1 病料來源

病料采自河北某孵化場雛雞。

1.2 主要試劑

普通營養瓊脂培養基、麥康凱瓊脂、三糖鐵瓊脂（TSI）均購自北京路橋技術有限公司；大腸桿菌顯色培養基為青島海博生物技術有限公司產品；葡萄糖蛋白胨水、糖發酵管、西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂、藥敏紙片均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 細菌的分離

無菌取雛雞的卵黃囊，分別劃線接種于普通營養瓊脂、麥康凱瓊脂培養基，37℃恒溫培養24h，觀察細菌生長情況及菌落特征。劃線接種于麥康凱培養基及大腸桿菌顯色培養基上，培養24h，挑取一環細菌的純培養，進行革蘭氏染色鏡檢。

1.4 生化鑒定

挑取純培養物，接種糖發酵管、三糖鐵瓊脂培養基，37℃恒溫培養24h觀察結果。

挑取典型菌落進行吲哚試驗、MR試驗、VP試驗及檸檬酸鹽利用試驗。

1.5 紙片擴散法藥敏試驗

將濃度為108CFU/mL的新鮮菌液涂布普通營養瓊脂平板，放置5min后，將10種藥敏紙片貼于平板表面，37℃培養18h后觀察結果，根據CLSL標準進行藥物敏感性評價。

2 結果與分析

2.1 培養結果

60只雛雞共分離出15株細菌。分離菌在普通瓊脂培養基上為圓形隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、半透明的灰白色菌落；其中12株分離菌在麥康凱培養基上形成桃紅色、光滑、中等大小的菌落。在大腸桿菌顯色培養基上形成藍綠色菌落。

2.2 形態及生化鑒定

各分離菌革蘭氏染色鏡檢，可看到淡紅色、短小的桿狀細菌。各分離菌均可以分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產酸產氣，60%的菌株還利用蔗糖；三糖鐵瓊脂培養基上斜面和底層均產酸，變黃，產氣，不產生硫化氫；IMViC試驗結果為“+ + --”。根據伯杰氏細菌鑒定手冊，上述分離菌均符合大腸桿菌的特性，因此可以確定其為大腸桿菌。

2.3 藥敏試驗結果

根據CLSI標準，12株大腸桿菌對不同藥物的藥敏紙片的抑菌情況如下表。

表1 藥敏試驗結果

由表1可以看出，從雛雞卵黃囊中分離的大腸桿菌對頭孢喹肟、恩諾沙星、新霉素、安普霉素最為敏感，對林可霉素、替米考星、卡那霉素耐藥。12株大腸桿菌均為多耐菌株，其中3個2耐菌株，4個3耐菌株，1個4耐菌株，1個5耐菌株，2個6耐菌株，1個7耐菌株。

3 討論

本次分離的12株雛雞大腸桿菌對頭孢喹肟、恩諾沙星、新霉素、安普霉素4種抗菌藥物敏感率為超過60%，可根據此結果進行雛雞的開口用藥及1日齡與油苗混合注射的抗生素的篩選，在12株大腸桿菌中有多株多重耐藥菌，有3株細菌對6種以上細菌耐藥。多重耐藥現象的出現可能與種雞濫用抗生素有關，許多養殖戶濫投抗生素，或在飼料及飲水中長期添加抗菌藥物進行疾病預防，都會造成耐藥性提高。藥敏試驗結果表明，應對雛雞卵黃囊進行分離細菌，應盡可能通過藥敏試驗篩選敏感藥物，為開口藥提供依據。

[1] 胡桂學.獸醫微生物學實驗教程[M].北京：中國農業大學出版社，2006：47-60.

盧國民（1990—），男，碩士生，山東濰坊人，主要從事獸醫微生物與免疫學方面的研究工作。

尤永君，博士，主要從事動物臨床診斷。