強直性脊柱炎患者14-3-3η DKK-1及TGF-β1水平與BASDAI BASFI的相關性分析

王 沖 邱衛強

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是以慢性炎癥為主要臨床表現的全身性免疫性疾病，且具不可逆性，當前無特異性治療方案，致殘率極高[1]。14-3-3η是14-3-3蛋白的一種，作為高度保守的酸性蛋白家族，可參與多種生命活動的調節，功能涉及免疫炎癥、細胞周期凋亡等。曾婷婷等[2]報道，類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis,RA)患者14-3-3η明顯高于健康人群。dickkopf相關蛋白1(dickkopf-1，DKK-1)是Wnt信號通路的負性調節因子，有研究[3]指出，DKK-1可通過抑制Wnt信號途徑參與骨重塑，同時還可影響核因子kB受體活化因子、骨保護素的表達，對破骨細胞產生及骨吸收過程亦存在一定影響。而轉化生長因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)作為強效致纖維化因子，對各類結締組織有極復雜的生物學作用，許紅飛等[4]報道，TGF-β1在AS患者黃韌帶、椎旁肌中呈明顯高表達。但血清14-3-3η、DKK-1蛋白及TGF-β1與AS患者Bath強直性脊柱炎病情活動指數(Bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)、Bath強直性脊柱炎功能指數(Bath ankylosing spondylitis functional index,BASFI)等病情指標的相關性研究較少。鑒于此，本研究采集資料分析AS患者血清14-3-3η、DKK-1及TGF-β1水平變化情況，并探究其與AS患者預后的相關性，為AS的臨床干預提供參考，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2016年1月駐馬店市中心醫院收治的AS患者60例為研究對象，作為AS組。其中男性49例，女性11例，年齡29～57歲，平均(40.12±5.69)歲；平均體質量指數(body mass index,BMI)(25.19±0.37)kg/m2，29例有吸煙史。另按1∶1比例在本院同期接受健康體檢的健康志愿者中篩選60例設為對照組，其中男性45例，女性15例，年齡32～60歲，平均(40.87±6.14)歲，BMI(25.20±0.68)kg/m2，27例有吸煙史。兩組研究對象性別構成、年齡、BMI及吸煙史等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具可比性。

1.2 納入與排除標準 納入標準：①AS組符合中華醫學會風濕病學分會《強直性脊柱炎診斷及治療指南》中AS診斷要求[5]；②入組前肝腎功能正常；③無重要器官器質性病變；④對照組均為健康人，無任何內、外科疾??；⑤所有研究對象均知曉研究內容并自愿簽署研究知情同意書；⑥研究通過醫院倫理委員會批準。排除標準：①入組前接受過抗腫瘤壞死因子藥物治療；②入組前半年內有糖皮質激素類藥物、非類固醇類藥物使用史；③大劑量使用抗風濕藥物。

1.3 方法 ①血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1檢測：所有研究對象均于入組后即刻采集血清樣本，采用酶聯免疫吸附法檢驗，試劑盒購自武漢博士德，均嚴格參照試劑盒說明書操作。② BASDAI[6]評估：主要對AS組患者的疲勞程度 、頸背髖部疼痛程度、除頸背髖部以外的關節腫痛程度、區域觸壓后的不適程度、晨僵程度等進行評價，單個維度分值按0～10分對應無癥狀～非常嚴重。③BASFI[7]評估：主要評價AS組患者過去1周內完成穿襪、彎腰撿鋼筆、仰臥位站起等行為的難易程度，總計10個條目，單個條目按0～10分對應容易～無法完成。2種評分分值越高，病情越嚴重，評價時間均為患者入院時。

1.4 觀察指標 記錄并比較兩組研究對象血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1水平；并分析血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1與病情評價指標的相關性。

2 結果

2.1 兩組研究對象血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1 比較 AS組14-3-3η、TGF-β1高于對照組，DKK-1低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組研究對象血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1 比較

2.2 AS組血清14-3-3η、DKK-1、TGF-β1與BASDAI評分、BASFI評分的相關性分析 AS組患者60例，平均BASDAI評分(40.12±2.63)分，BASFI評分(42.67±5.22)分。經Pearson相關性分析發現，AS組患者血清14-3-3η、TGF-β1與BASDAI評分、BASFI評分呈正相關(r=0.556、0.533、0.459、0.433，P<0.001)；DKK-1則與BASDAI評分(r=-0.285，P<0.05)、BASFI評分呈負相關(r=-0.464，P<0.001)。見圖1。

圖1 AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1與病情的相關性分析

3 討論

AS的病因至今尚未完全闡明，AS早期無特異性癥狀，起病隱匿，多數患者以頸、腰背部及外周關節疼痛等為起病癥狀，可累及骶髂關節、椎體、椎間盤等，引起功能喪失甚至致殘，且當前無特效治療方法[8]。14-3-3η作為高度保守酸性蛋白家族成員，因其具備兩性凹槽，故可與多種配體蛋白結合，在真核生物中表達廣泛，也是細胞內重要的信號轉導蛋白之一，參與多種疾病的發生及進展。Maksymowych等[9]報道，14-3-3η在AS患者中存在異常表達，診斷AS的曲線下面積值高達0.86。而 BASDAI、BASFI評分是AS臨床診療中常用的評分指標，前者主要評價疾病相關癥狀、后者則主要評價活動能力等，均是反映AS病情嚴重程度的重要指標。本研究結果顯示，AS患者血清14-3-3η明顯高于對照組，并與BASDAI評分、BASFI評分呈正相關，與吳穎等[10]報道類風濕性關節炎、脊柱關節炎患者血清14-3-3η存在明顯高表達的結果相似。

同時，以新骨形成為骨重塑形式是AS最典型的病理特征之一，新骨形成也是AS患者脊柱活動受限、僵硬、融合甚至殘廢的重要原因，且至今仍無特異性手段逆轉AS骨贅形成[11]。近年來研究[12]證實，Wnt信號通路在AS新骨形成中有重要作用，其可通過干預骨細胞分化程度促進新骨形成。DKK-1則是Wnt信號通路的重要抑制因子。本研究結果顯示，AS組血清DDK-1蛋白表達顯著低于對照組，這與扶忠超等[13]的報道結論一致。另一項研究[14]有類似報道，并認為骨形成蛋白7(bonemorphogenetic protein-7,BMP-7)/DKK-1比值與骶髂關節炎癥程度、BASDAI放射學指標等反映病情、病程的指標顯著相關。這與本研究結論相似，均提示AS患者血清DKK-1與病情密切相關。既往亦有研究[15]報道，DKK-1低表達可促進骶髂關節X型膠原表達，軟骨細胞肥大,形成骨性強直，誘導骶髂關節融合；DKK-1功能的修復可增強其對Wnt/β-action信號通路的調節作用，從而抑制新骨形成，可在一定程度上預防關節僵硬。但也有研究持相反意見，如Daoussi等[16]報道AS患者血清DKK-1較正常人群呈異常高表達。分析造成DKK-1表達不一的原因或受Wnt信號通路激活后代償性增加、檢測方式、DKK-1無效生成等多因素影響，仍有待規范檢測方式后深入探究。

TGF-β1則是TGF-β超家族的核心成員。TGF-β1可通過誘導結締組織生長因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)分泌，參與軟骨細胞增殖、血管形成等軟骨形成過程，在炎癥、纖維化過程中發揮關鍵作用[17]。本研究結果顯示，AS組血清TGF-β1顯著高于對照組，且與BASDAI評分、BASFI評分呈正相關，與王慶文等[18]報道結論存在差異，其報道AS患者骶髂關節存在TGF-β1異常高表達，但血清TGF-β1與正常人群差異無統計學意義，分析或與樣本量較小有關。

綜上所述，AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1存在異常表達現象，并與BASDAI評分、BASFI評分等反映病情的指標存在相關性，14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1在AS患者血清中呈異常表達，或可成為反映病情嚴重程度的敏感指標。本研究存在一定局限性，如樣本狹窄、存在一定混雜因素影響，尤其是血清DKK-1蛋白、TGF-β1與在AS患者中的表達與既往報道存在一定差異。因此，AS患者血清14-3-3η、DKK-1蛋白、TGF-β1的表達仍有極大深入探究空間，擬采集大樣本量后設計更嚴謹的研究進一步深入探究。