內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在氧化低密度脂蛋白誘導的人RPE細胞凋亡中的作用

吳 桐，黨寬榮，蘇靜波，呂葆真，陸新婷，惠延年，杜紅俊

0引言

年齡相關性黃斑變性(age-related macular degeneration, ARMD)是老年人不可逆盲的最主要原因。按照病理變化不同，ARMD可以分為干性和濕性兩種類型。干性ARMD的主要病理改變之一是視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)細胞的凋亡和由此導致的感光細胞死亡，而氧化應激損傷是主要原因[1]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(endoplasmic reticulum stress, ERS)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡機制，它通過影響細胞內(nèi)促存活和促凋亡途徑相關基因的表達，維持細胞內(nèi)代謝平衡，以及PERK-eLF2-ATF4-CHOP、IRE1-XBP1和ATF6三種經(jīng)典的信號途徑發(fā)揮作用[2]。既往研究中已證實氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, OxLDL)可引起RPE細胞凋亡，但其參與凋亡的具體機制以及ERS是否參與其中尚不明確[3-4]。本研究采用不同濃度的OxLDL作用于人RPE細胞，觀察對細胞活力和凋亡的影響，同時觀察ERS相關蛋白及凋亡相關酶的變化，探討ERS在OxLDL誘發(fā)的人RPE細胞凋亡中的作用和機制。

1材料和方法

1.1材料人RPE細胞系ARPE19(中國科學院細胞庫)、胎牛血清(Hyclone，澳大利亞)、低糖DMEM(Corning，美國)、胰酶(Gibco，美國)、青霉素/鏈霉素(Gibco，美國)、OxLDL、LDL、Dil-OxLDL(翊圣生物，中國)、Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡雙染試劑盒(碧云天，中國)、CCK8(七海生物，中國)、BCA蛋白定量試劑盒、小鼠源Caspase-12抗體、小鼠源β-actin抗體(CST，美國)、兔源CHOP抗體、兔源GRP78抗體、兔源XBP-1抗體、兔源ATF6抗體(Proteintech，中國)、兔源RPE65抗體(Abcam，美國)、Alexa Fluor 488標記的山羊抗兔IgG二抗、辣根過氧化酶(HRP)標記的山羊抗小鼠IgG二抗、HRP標記的山羊抗兔IgG二抗(翊圣生物，中國)、DAPI(Invitrogen，美國)、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(碧云天，中國)、ECL超敏發(fā)光底物(四正柏，中國)。主要儀器設備：CO2培養(yǎng)箱(上海力申科學儀器)、倒置顯微鏡(Olympus，日本)、FSX100熒光顯微鏡(Olympus，日本)、SDS-PAGE 電泳儀、電泳槽及化學發(fā)光儀(Bio-Rad，美國)、流式細胞儀(Becton-Dickinson,美國)。……