高糖培養人晶狀體上皮細胞創傷后Cyclin D1的表達

陳 晨，趙楠楠，符麗君，朱振華，閻 沖，祝家昌，修 皓

0引言

糖尿病性白內障(diabetic cataract)是糖尿病常見的并發癥，可導致患者視力障礙。目前我國是全球糖尿病人數最多的國家，2017年糖尿病人數為1.14億，預計到2045年將達到約1.5億[1]。晶狀體上皮細胞的凋亡是除先天性白內障以外的所有類型白內障發生的共同細胞學基礎[2]。晶狀體上皮細胞是晶狀體內代謝最活躍的部分，該細胞呈單層排列，為晶狀體的生長、分化和損傷修復等提供基礎物質及代謝能量。一旦正常生理功能被破壞，晶狀體纖維排列紊亂，晶狀體則出現混濁[3]。糖尿病性白內障的發生與晶狀體上皮細胞的凋亡密切相關，研究表明40mmol/L葡萄糖能夠顯著上調晶狀體上皮細胞的凋亡[4]，其中細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表達可影響細胞凋亡。目前認為，在細胞周期進程中，Cyclin D1是G1期細胞周期素，其含量受生長因子等因素的調控，呈周期性變化[5]。本研究在體外不同濃度的高糖條件下培養人晶狀體上皮細胞，探究其在創傷后Cyclin D1的表達，揭示Cyclin D1與糖尿病性白內障之間可能存在的關系，為今后研究奠定基礎。

1材料和方法

1.1材料實驗細胞：人晶狀體上皮細胞(HLEB3)購自北納創聯生物技術研究院。主要試劑：DMEM培養基購自Hyclone公司；胎牛血清、胰蛋白酶購自Gibco公司；二甲基亞砜(DMSO)購自Sigma公司；細胞總RNA及總蛋白提取試劑盒購自Magen公司；四甲基偶氮唑(MTT)、逆轉錄試劑盒、青霉素/鏈霉素、熒光定量PCR試劑盒、蛋白Marker購自Ferentas公司；特異性引物由天一輝遠生物科技有限公司合成；……