菩提樹組培擴(kuò)繁技術(shù)研究

摘要： ?以MS為基本培養(yǎng)基，分別加入不同濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)6-BA、NAA和IBA的組合，對(duì)菩提樹當(dāng)年生長(zhǎng)健壯的帶側(cè)芽莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)，最后篩選出菩提樹初代培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.10 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L;繼代增殖的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L;生根階段的最適培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.05 mg/L +IBA 1.0 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L。同時(shí)還篩選出草炭土、細(xì)河沙、 壤土以3∶5∶2的比例混合是菩提樹組培苗移栽成活率最高的移栽基質(zhì)，為73.2%。

關(guān)鍵詞： ?菩提樹; ?組培擴(kuò)繁

中圖分類號(hào)： ? S 723. 1 + 32， ?S 687 ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： ? A ? ? ? ? ? ? ? ?文章編號(hào)：1001 - 9499（2020）02 - 0023 - 03

菩提樹（Ficus religiosa）為?？崎艑俚母叽髥棠?，樹高可達(dá)20 m。樹干挺拔健壯，樹冠卵圓形或倒卵形。葉互生，深綠色具光澤，革質(zhì)，全緣。葉長(zhǎng)8～16 cm，葉寬6～12 cm，基部圓形或微心形，在尖端處常有長(zhǎng)尾。花期3～4月，果期5～6月。果球形，成熟時(shí)紅色，表面光滑。菩提樹分枝擴(kuò)展，樹形高大，枝繁葉茂，冠幅廣展，是優(yōu)良的觀賞樹種，還宜作庭院、行道的綠化樹種。另外，該樹對(duì)氫氟酸有較強(qiáng)抗性，還宜作污染區(qū)綠化樹種。

菩提樹種子繁殖需選10年以上的健壯母樹，因種子、穗材難得，故常規(guī)繁殖手段難以在短時(shí)間內(nèi)繁殖出大量苗木來滿足市場(chǎng)需求。故本試驗(yàn)以菩提樹當(dāng)年生長(zhǎng)健壯的帶側(cè)芽莖段為外植體進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，篩選出初代培養(yǎng)、繼代增殖、生根階段的最適培養(yǎng)基，同時(shí)也篩選出成活率最高的移栽基質(zhì)，以期完善菩提樹組培技術(shù)流程，為菩提樹組培快繁及實(shí)現(xiàn)工廠化育苗奠定理論基礎(chǔ)。

1 試驗(yàn)材料

遼西生態(tài)試驗(yàn)林場(chǎng)生產(chǎn)科提供的菩提樹當(dāng)年生長(zhǎng)健壯的帶側(cè)芽莖段。

細(xì)胞分裂素6-BA（國(guó)藥集團(tuán)）、生長(zhǎng)素NAA（國(guó)藥司集團(tuán)）、IBA（國(guó)藥集團(tuán)）、糖（遼寧省建平縣三家糖廠）、瓊脂（福建金燕海洋生物）、Hcl（國(guó)藥集團(tuán)）、NaOH（國(guó)藥集團(tuán)）、高壓滅菌設(shè)備（上海博訊）。

2 試驗(yàn)方法

2. 1 外植體的選取與處理

于晴天上午，采集生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的菩提樹幼嫩枝條作為外植體，除去莖段上的葉片帶回試驗(yàn)室，先用自來水沖洗外植體表面的灰塵，再放入洗滌劑溶液中浸泡2～5 min，最后用自來水沖洗干凈。將清洗干凈的外植體剪成長(zhǎng)4 ～5 cm的具1～2個(gè)飽滿、未萌發(fā)芽莖段，并置于超凈工作臺(tái)（已開機(jī)、滅菌20 min以上）中進(jìn)行表面消毒滅菌，先用75%酒精浸泡30 s，無菌水沖洗2～3次，然后按材料的木質(zhì)化程度，分別用0.1%HgCl2浸泡6～8 min，最后用無菌水沖洗5～6次。

2. 2 培養(yǎng)基及移栽基質(zhì)的配置

以MS為基本培養(yǎng)基，在高溫滅菌前給各階段培養(yǎng)基分別加入不同質(zhì)量的細(xì)胞分裂素6-BA、生長(zhǎng)素NAA和IBA的組合，蔗糖30 g/L，瓊脂8 g/L，用0.1 mol/L Hcl或0.1 mol/L NaOH調(diào)解pH值至5.5～5.8，高壓滅菌壓力保持在0.105～0.12 MPa（注意壓力不要高于0.14 MPa），時(shí)間為20 min。

2. 2. 1 初代培養(yǎng)

以MS為基本培養(yǎng)基，將表面消毒的外植體切去兩端，切成1～2 cm長(zhǎng)單芽，按照正常生長(zhǎng)方向接種到添加了不同質(zhì)量的細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA的初代培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，6-BA設(shè)置0.8、1.6、2.4 mg/L 3個(gè)濃度梯度，NAA設(shè)置0.1、0.2 mg/L 2個(gè)濃度梯度，采用完全隨機(jī)組合，共6個(gè)處理（表1）。每處理接種20瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，30天后觀察6個(gè)處理對(duì)外植體不定芽的誘導(dǎo)率及芽生長(zhǎng)狀況，確定最佳初代培養(yǎng)基。

2. 2. 2 繼代增殖

當(dāng)初代誘導(dǎo)的不定芽高長(zhǎng)到1.5 cm及以上時(shí)，將萌發(fā)的幼芽從基部切下，去掉莖尖，接種到添加不同濃度的細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA的繼代增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行不定芽的增殖培養(yǎng)，6-BA設(shè)置0.6、1.2、1.8 mg/L 3個(gè)濃度梯度，NAA設(shè)置0.05、0.10 mg/L 2個(gè)濃度梯度，采用完全隨機(jī)組合，共6個(gè)處理（表2）。每處理接種20瓶，每瓶5個(gè)嫩芽，觀察培養(yǎng)物生長(zhǎng)情況，40天后統(tǒng)計(jì)增殖倍數(shù)，確定最適繼代增殖培養(yǎng)基。

2. 2. 3 生根培養(yǎng)

將繼代次數(shù)已超過4次、高1.5 cm以上、生長(zhǎng)健壯的叢生芽切成具2～3片葉片的單芽，接種在以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量的生長(zhǎng)素NAA、IBA的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基采取IBA、NAA單獨(dú)配制及IBA和NAA混合配制的4個(gè)配方（表3）。30天后統(tǒng)計(jì)平均生根條數(shù)、生根率，確定最佳生根培養(yǎng)基。

2. 3 培養(yǎng)條件

在組織培養(yǎng)過程中，溫度和光照是重要的環(huán)境條件，對(duì)生長(zhǎng)、分化、生根皆有很大影響。培養(yǎng)室溫度設(shè)定為25±2 ℃，光照強(qiáng)度為2 500～3 000 Lux，光照時(shí)間為14～16 h/天，該條件適用于菩提樹各組培階段組培苗的培養(yǎng)。

2. 4 移 栽

生根培養(yǎng)30～35天，當(dāng)不定根長(zhǎng)至1 cm時(shí)，移栽組培苗。移栽基質(zhì)為以下3種，即細(xì)河沙、草炭土∶細(xì)河沙（1∶1）、草炭土∶細(xì)河沙∶壤土（3∶5∶2），每種基質(zhì)移栽100株，30天后統(tǒng)計(jì)生根條數(shù)與生根率?；|(zhì)混合過程中，需噴灑0.2%代森錳鋅水溶液消毒，混勻后堆漚覆膜、壓嚴(yán)，滅菌3天，防止菌類的滋生。在移栽的過程中也要防止菌類的滋生，確保適當(dāng)?shù)墓庹?、溫度、水分，盡可能地創(chuàng)造適宜于它生存的環(huán)境，幫助其盡快由異養(yǎng)型過渡到自養(yǎng)型，保證成活。

3 試驗(yàn)結(jié)果分析

3. 1 初代培養(yǎng)

由不同激素組合對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響（表4）可知：在不定芽誘導(dǎo)過程中，不同的激素組合對(duì)其影響不同。低濃度的6-BA可促進(jìn)不定芽的分化，隨著濃度增加，雖可促進(jìn)芽的增殖，但會(huì)抑制植物的節(jié)間伸長(zhǎng)，導(dǎo)致愈傷組織生長(zhǎng)過旺。綜合來看，處理1，即MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.10 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L的萌芽率為53%，芽生長(zhǎng)狀況也最好，是最適初代培養(yǎng)基。

3. 2 繼代增殖

由不同激素組合對(duì)不定芽繼代增殖的影響（表5）可知：在繼代培養(yǎng)過程中，隨著BA濃度的增加，不定芽的增殖倍數(shù)也隨之增加，但當(dāng)6-BA達(dá)到1.8 mg/L時(shí)，組培苗開始大量長(zhǎng)出愈傷組織，增殖芽部分畸形，增殖倍數(shù)降低，影響組培苗的正常生長(zhǎng)。綜合來看，處理9，即MS+BA 1.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L的苗分化多，平均增殖倍數(shù)為7.4，分化苗生長(zhǎng)健壯、葉色綠，為繼代培養(yǎng)最適培養(yǎng)基。

3. 3 生根培養(yǎng)

由不同生長(zhǎng)素配比對(duì)組培苗生根的影響（表6）可知： NAA和IBA均可以誘導(dǎo)組培苗生根，2種激素配合使用生根效果更好。因此組培苗最適生根培養(yǎng)基配方為處理14，即1/2MS+NAA 0.05 mg/L +IBA 1.0 mg/L +蔗糖30 g/L +瓊脂8 g/L，平均生根數(shù)5.5條，生根率為93%。

3. 4 移栽基質(zhì)的確定

由不同基質(zhì)煉苗成活率及組培苗生長(zhǎng)情況調(diào)查（表7）可知：不同的移栽基質(zhì)對(duì)菩提樹組培苗移栽成活率的影響不同。單獨(dú)用沙子或草炭土不利于保水，雖然熟表土可促進(jìn)根的生長(zhǎng)，但通透性不好，容易板結(jié)，移栽成活率低。因此熟表土中加入草炭土、細(xì)河沙，不僅可以提供給幼苗所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還能提高基質(zhì)的透氣性。將草炭土、細(xì)河沙、 壤土以3∶5∶2的比例混合應(yīng)用，移栽成活率最高，為73.2%。

4 結(jié)論與討論

4. 1 菩提樹組織培養(yǎng)過程中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)6-BA、NAA、IBA是培養(yǎng)基中的關(guān)鍵物質(zhì)，對(duì)外植體不定芽誘導(dǎo)、不定芽繼代增殖、組培苗生根起著重要、明顯的調(diào)節(jié)作用。

4. 2 在初代培養(yǎng)階段，培養(yǎng)基中加入NAA和6-BA，可誘導(dǎo)愈傷組織的形成;在繼代增殖培養(yǎng)階段，6-BA和NAA的影響達(dá)極顯著水平。說明6-BA作為影響菩提組培苗增殖的最主要因素，它可促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化，延遲組織衰老，增強(qiáng)蛋白質(zhì)合成，抑制頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)側(cè)芽顯著生長(zhǎng)，而NAA能夠促進(jìn)增殖組培苗的高生長(zhǎng)，并與6-BA存在交互作用，進(jìn)而影響菩提組培苗的增殖效果。但是當(dāng)6-BA達(dá)到1.8 mg/L時(shí)，組培苗開始大量長(zhǎng)出愈傷組織，增殖芽部分畸形，增殖倍數(shù)降低，影響組培苗的正常生長(zhǎng)，繼代增殖階段6-BA的使用濃度不能高于1.8 mg/L。在生根培養(yǎng)階段，單純使用生長(zhǎng)素NAA和IBA即能誘導(dǎo)根的形成。

4. 3 菩提樹組培擴(kuò)繁技術(shù)研究的成功為菩提樹的快速繁殖開辟了一條新途徑，解決了常規(guī)的繁殖手段難以滿足生產(chǎn)需要的矛盾，為菩提樹的規(guī)模化人工種植奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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[2] 鄧正正， ?李超峰， ?王立華. ?菩提樹的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J]. ?植物生理學(xué)通訊， ?2005（6）： ?795.

第1作者簡(jiǎn)介： ?黃立華（1971-）， ?女， ?本科， ?高級(jí)工程師， ?主要從事植物組織培養(yǎng)研究。

收稿日期： 2019 - 12 - 21

（責(zé)任編輯： ? 李 丹）