犬瘟熱病毒一步法RT-PCR 檢測方法的建立與應(yīng)用

李文佳，陳 姍，高 旭

延邊大學(xué)動物醫(yī)學(xué)系，吉林延吉 133400

犬瘟熱（canine distemper，CDV）是由犬瘟熱病毒（canine distemper virus， CDV)引起犬科動物的一種高度接觸性、烈性傳染病，我國將其列為二類動物傳染病，一年四季均可發(fā)生，尤其是季節(jié)交替和高溫天氣更容易發(fā)病[1]。主要臨診癥狀是反復(fù)發(fā)熱和后期的神精癥狀，伴有腹瀉和嘔吐，由于病程晚期病毒損傷患犬神經(jīng)元，多為死亡或預(yù)后不良，患病幼犬死亡率高達(dá)80%。CDV 無論在病情嚴(yán)重程度、傳染強(qiáng)度，還是在死亡率上都是犬類動物傳染病之首，給養(yǎng)犬業(yè)帶來巨大重創(chuàng)[2]。

CDV 為負(fù)鏈單股RNA 病毒，屬于副粘病毒科，副粘病毒屬成員。由于與同屬的牛瘟病毒（RPV）和麻疹病毒（MV）存在抗原相關(guān)性，臨床診斷中血清學(xué)方法常存在爭議[3]。因此，分子診斷較為可信，在眾多分子診斷方法中，RT-PCR 方法應(yīng)用較多，但由于常規(guī)的RT-PCR 檢測方法需要兩步進(jìn)行，即在進(jìn)行PCR 之前，需要經(jīng)歷病毒基因組RNA到cDNA 的反轉(zhuǎn)錄，往往在反轉(zhuǎn)錄過程引入污染源，導(dǎo)致假陽性出現(xiàn)。而一步法RT-PCR 檢測方法避免了中間環(huán)節(jié)，反應(yīng)可以在一個反應(yīng)管中一步完成，不但節(jié)省時間，還可大大提升檢測準(zhǔn)確率[4]。因此，本研究擬參照GenBank 已登錄的CDV 基因序列，選取核蛋白編碼基因N 作為目的基因，設(shè)計一對特異性引物，建立一種特異、高效、靈敏、重復(fù)性好的CDV 一步法RT-PCR 檢測方法，為CDV 感染的早期診斷和病原體監(jiān)測提供一種有效的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 毒株與病料

犬瘟熱病毒（CDV）、犬細(xì)小病毒（CPV）和鵝細(xì)小病毒（GPV）由延邊大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室分離保守；……