牛羊布魯氏菌病免疫防控的調(diào)查評(píng)估報(bào)告

王英華，方先珍，李 蛟，閆若潛

(河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 鄭州 450008)

根據(jù)《河南省布魯氏菌病防治計(jì)劃》(2017-2020年)要求，在全省范圍內(nèi)除種畜和奶畜外，對(duì)牛羊?qū)嵭胁剪斒暇?俗稱“布病”)全面免疫，做到應(yīng)免盡免。如今，實(shí)施布魯氏菌病免疫已1年有余，為了解布魯氏菌病免疫政策實(shí)施后，牛羊免疫情況、牛羊布魯氏菌病陽(yáng)性率、臨床發(fā)病率等，本試驗(yàn)調(diào)查了20個(gè)縣(區(qū))，85個(gè)牛場(chǎng)、90個(gè)牛散養(yǎng)戶、96個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)、98個(gè)羊散養(yǎng)戶、192個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)(戶)。實(shí)施牛、羊布魯氏菌病疫苗免疫的有12個(gè)縣(區(qū))，所選取的場(chǎng)點(diǎn)末次免疫時(shí)間均在6個(gè)月以上，集中免疫的疫苗為布魯氏菌病S2株疫苗；其余8個(gè)縣(區(qū))未實(shí)施布魯氏菌病疫苗免疫。調(diào)查評(píng)估報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 供試牛、羊 分布于河南全省18個(gè)地市，小地市抽查1個(gè)縣(區(qū))，大地市抽查2個(gè)縣(區(qū))，共抽查了20個(gè)縣區(qū)。涉及牛場(chǎng)85個(gè)，牛散養(yǎng)戶90個(gè)，采集牛血清樣品2 918份；羊場(chǎng)96個(gè)、羊散養(yǎng)戶98個(gè)，采集羊血清樣品3 213份；采集豬血清3 056份。

1.2 被檢血清 供試牛、羊頸靜脈采血，豬前腔靜脈采血，分離血清，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)試劑 布病陽(yáng)性和陰性血清，購(gòu)自中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生物學(xué)研究所；布病虎紅平板凝集抗原和試管凝集抗原，購(gòu)自中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病研究所，批號(hào)為201802。

1.4 方法

1.4.1 虎紅平板凝集試驗(yàn) 該試驗(yàn)按GB/T18646-2002布病診斷技術(shù)中虎紅平板凝集試驗(yàn)的操作步驟進(jìn)行，在滅菌潔凈的玻璃板上，用移液器分別吸取被檢血清30 mL與虎紅平板凝集抗原30 mL混合均勻，同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判定：在陰、陽(yáng)性血清對(duì)照成立的條件下，對(duì)被檢血清進(jìn)行判定。被檢血清在室溫(20 ℃)4 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象，判為陽(yáng)性；無(wú)凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性。

1.4.2 試管凝集試驗(yàn) 針對(duì)虎紅平板凝集試驗(yàn)檢出的陽(yáng)性血清，依據(jù)GB/T18646-2002布病診斷技術(shù)中試管凝集試驗(yàn)的操作步驟進(jìn)行復(fù)核。每份血清用4支凝集試管。編碼后，在第1管牛加入1.2 mL、羊加入1.15 mL稀釋液，在2～4管各加入0.5 mL稀釋液。然后向第1管加入0.05 mL牛被檢血清或0.1 mL羊被檢血清，混合均勻，棄去0.25 mL，取0.5 mL混合液加入第2管，混合均勻；再吸第2管混合液0.5 mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混合液0.5 mL；然后將0.5 mL稀釋好的試管凝集抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻。被檢血清稀釋度依次變?yōu)?∶50、1∶100、1∶200和1∶400，同時(shí)做陰、陽(yáng)性對(duì)照及抗原對(duì)照，并配制比濁管。將全部試管、對(duì)照管及比濁管充分震蕩后置37 ℃溫箱中20～22 h，取出后放室溫2 h，然后判定結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)反應(yīng)的有無(wú)及其強(qiáng)度進(jìn)行判定，以各管中上層液體的清亮度記錄凝集反應(yīng)的強(qiáng)度(凝集價(jià))。如果牛凝集價(jià)在1∶100達(dá)50%以上凝集時(shí)、羊凝集價(jià)在1∶50達(dá)50%以上凝集時(shí)(參照比濁管清亮度)，則判定為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 抽查的20個(gè)縣(區(qū))中，實(shí)施羊布魯氏菌病免疫的有12個(gè)，占所抽查縣區(qū)的60%；實(shí)施肉牛布魯氏菌病免疫的有7個(gè)，占所抽查縣區(qū)的35%；未實(shí)施牛、羊布魯氏菌病免疫的有8個(gè)，占所抽查縣區(qū)的40%。

2.2 8個(gè)未實(shí)施牛、羊布魯氏菌病免疫的縣區(qū)(代號(hào)A～H)，共檢測(cè)牛血清樣品1 207份，檢出3份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率0.24%(見表1)；共檢測(cè)羊血清樣品1 250份，檢出2份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率0.16%(見表2)。陽(yáng)性樣品試管復(fù)核效價(jià)見表3。

2.3 7個(gè)實(shí)施肉牛布魯氏菌病免疫的縣區(qū)(代號(hào)I～O)，共檢測(cè)牛血清樣品931份，檢出276份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率29.65%(見表4)。53個(gè)牛場(chǎng)(戶)中，有16個(gè)檢出陽(yáng)性樣品，場(chǎng)群陽(yáng)性率為30.19%。

2.4 12個(gè)實(shí)施羊布魯氏菌病免疫的縣區(qū)(代號(hào)I～T)，共檢測(cè)羊血清樣品1 923份，檢出264份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率13.73%(見表5)。在免疫的114個(gè)場(chǎng)(戶)中，有79個(gè)場(chǎng)(戶)未檢出陽(yáng)性樣品，35個(gè)場(chǎng)(戶)有陽(yáng)性樣品檢出，場(chǎng)群轉(zhuǎn)陽(yáng)率僅為30.70%。

表1 8個(gè)未實(shí)施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)牛感染抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 8個(gè)未實(shí)施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)羊感染抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 琥紅平板試驗(yàn)陽(yáng)性樣品試管凝集復(fù)核結(jié)果

2.5 12個(gè)實(shí)施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)，免疫前3年(2014-2016年)牛羊陽(yáng)性率見表6。

2.6 本次調(diào)查的20個(gè)縣(區(qū))，種畜、奶畜均為免疫。44個(gè)奶牛場(chǎng)，有2個(gè)場(chǎng)群檢出陽(yáng)性樣品，奶牛場(chǎng)群陽(yáng)性率為4.5%；7個(gè)種羊場(chǎng)，1個(gè)奶羊場(chǎng)，有1個(gè)種羊場(chǎng)檢出陽(yáng)性樣品1份。

2.7 本次調(diào)查還抽查了20個(gè)縣(區(qū))的192個(gè)豬場(chǎng)(戶)，共采集了3 056份豬血清，未檢出布魯氏菌病陽(yáng)性樣品。

表4 7個(gè)實(shí)施肉牛布魯氏菌病免疫的縣區(qū)牛感染抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 12個(gè)實(shí)施羊布魯氏菌病免疫的縣區(qū)羊感染抗體檢測(cè)結(jié)果

表6 12個(gè)實(shí)施布魯氏菌病免疫的縣區(qū)免疫前3年抗體陽(yáng)性率 (%)

3 討論

3.1 8個(gè)未實(shí)施牛、羊布魯氏菌病免疫的縣(區(qū))認(rèn)為，日常工作中布魯氏菌病的檢測(cè)陽(yáng)性率并不高，對(duì)牛羊布魯氏菌病的防控應(yīng)實(shí)施監(jiān)測(cè)、陽(yáng)性撲殺、逐步凈化的策略。本次調(diào)查中，8個(gè)未實(shí)施免疫的縣(區(qū))，牛陽(yáng)性率為0.24%，羊陽(yáng)性率僅為0.16%。牛、羊群布魯氏菌病陽(yáng)性率并不高，建議各縣(區(qū))先摸清本區(qū)域布魯氏菌病感染本底情況，對(duì)陽(yáng)性率不高的區(qū)域?qū)嵤┍O(jiān)測(cè)、陽(yáng)性撲殺、逐步凈化的防控策略，切記盲目跟風(fēng)免疫。

3.2 本次調(diào)查的12個(gè)對(duì)牛、羊?qū)嵤┝瞬剪斒暇∶庖叩目h(區(qū))，轉(zhuǎn)陽(yáng)率并不高，牛陽(yáng)性率只有29.65%，羊陽(yáng)性率為13.73%。場(chǎng)群轉(zhuǎn)陽(yáng)率也不高，牛、羊場(chǎng)群陽(yáng)率均接近1/3。陽(yáng)性樣品是自然感染還是疫苗免疫后轉(zhuǎn)陽(yáng)，本試驗(yàn)并不能區(qū)分。結(jié)合當(dāng)?shù)厝粘２剪斒暇z測(cè)情況發(fā)現(xiàn)，從實(shí)施布魯氏菌病免疫以來(lái)，布魯氏菌病臨床發(fā)病率降低，民間的病例也在減少。因此，建議對(duì)陽(yáng)性率高的區(qū)域?qū)嵤┎剪斒暇∶庖摺２剪斒暇?yīng)實(shí)施分區(qū)域凈化、免疫區(qū)域嚴(yán)格調(diào)運(yùn)的防控措施。

3.3 種畜未實(shí)施免疫，且布魯氏菌病陽(yáng)性率并不高，種畜可以實(shí)施監(jiān)測(cè)、撲殺、凈化的防控策略，保持種源長(zhǎng)期處于無(wú)疫狀態(tài)。奶畜也未實(shí)施免疫，且布魯氏菌病陽(yáng)性率也不高，發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性畜及時(shí)撲殺，因此所調(diào)查縣區(qū)本地奶源是安全放心的。

3.4 本次調(diào)查的所有豬群中，未發(fā)現(xiàn)布魯氏菌病陽(yáng)性樣品，也沒(méi)有臨床病例。

3.5 12個(gè)免疫羊布魯氏菌病的縣(區(qū))中，有5個(gè)縣(區(qū))雖然免疫了，但并未檢測(cè)到抗體，有1個(gè)縣(區(qū))虎紅平板初篩時(shí)檢出了16份陽(yáng)性樣品，但試管凝集復(fù)核時(shí)全部為陰性。從場(chǎng)群來(lái)看，免疫的114個(gè)場(chǎng)(戶)中，有79個(gè)場(chǎng)(戶)未檢出陽(yáng)性樣品。布魯氏菌病疫苗免疫后，并未產(chǎn)生能檢測(cè)到的抗體。提示布魯氏菌病感染動(dòng)物是否與地域有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

3.6 布魯氏菌病危害嚴(yán)重，要凈化和根除該病。其一，畜牧部門需完善并推廣群體監(jiān)測(cè)和摸底調(diào)查。通過(guò)群體抽樣監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性畜群，再利用逐頭抽樣篩查并淘汰陽(yáng)性動(dòng)物。其二，要加強(qiáng)檢疫監(jiān)管與動(dòng)物撲殺補(bǔ)貼力度。對(duì)跨區(qū)域調(diào)運(yùn)的布魯氏菌病易感動(dòng)物嚴(yán)格進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并按規(guī)定程序申報(bào)、審批，經(jīng)檢疫合格后方可調(diào)運(yùn)，同時(shí)加強(qiáng)監(jiān)管。合法調(diào)入的動(dòng)物要按規(guī)定隔離期滿后方可混群飼養(yǎng)。加強(qiáng)牛羊交易市場(chǎng)和屠宰場(chǎng)所的監(jiān)管。國(guó)家和地方政府根據(jù)家畜市場(chǎng)價(jià)格，及時(shí)調(diào)整撲殺動(dòng)物補(bǔ)貼標(biāo)準(zhǔn)，鼓勵(lì)養(yǎng)殖戶主動(dòng)撲殺陽(yáng)性動(dòng)物，凈化畜群。其三，加強(qiáng)布魯氏菌病病原、致病機(jī)制、疫苗等的研發(fā)。