血清及肺泡灌洗液γ 干擾素、血栓素和可溶性B7-H3 在難治性肺炎支原體肺炎中的鑒別診斷價值分析

梁利紅

難治性肺炎支原體肺炎（Refractory Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，RMPP）是病情嚴重且抗感染治療仍無法有效控制的支原體肺炎，與普通支原體肺炎（Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP）比較，病情更為嚴重，治療效果欠佳，具有一定病死率，預后較差［1］。目前支原體培養仍為MPP診斷及檢測的金標準，但其陽性率較低，尋找簡單、快速、有效的臨床診斷指標對于早期控制疾病、提高治療效果及預后具有重要臨床意義?，F有研究認為，肺炎支原體（Mycoplasma Pneumoniae，MP）感染后機體炎癥反應及其引起的氣道黏膜高分泌是導致RMPP及重癥MPP的重要影響因素［2-3］。本研究選用RMPP病兒及MPP病兒作為研究對象，以血清及肺泡灌洗液作為研究樣本，以γ干擾素（Interferon-γ，IFN-γ）、血栓素（Thromboxane，TXB2）、可溶性B7-H3（Soluble B7-H3，sB7-H3）等炎癥介質指標作為研究指標，比較各組病人不同體液中各炎性因子的表達，并分析其診斷價值，旨在為RMPP的早期診斷提供參考。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2017 年2 月至2019 年3 月鄭州大學附屬兒童醫院住院治療的80 例RMPP 病兒作為研究對象，納入RMPP組；另擇同期于鄭州大學附屬兒童醫院治療的80例普通MPP病兒及50例查體健康的兒童分別納入MPP組及對照組。

診斷標準：MPP 組病兒及RMPP 組病兒診斷均符合《實用兒科學》中肺炎支原體肺炎診斷標準［4］，經呼吸道病原體檢測、痰培養等檢查顯示MP抗體陽性；RMPP 病兒為應用大環內酯抗生素7 d以上仍無臨床體征及影像學改善者。納入標準：符合MPP 或RMPP 診斷標準；臨床資料完整；病兒近親屬或監護人簽署知情同意書。排除標準：合并其他病原體混合感染者；合并哮喘、結核等肺部疾病者。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法臨床資料收集：收集病兒臨床表現、影像學表現及支氣管鏡檢查情況，其中臨床表現主要包括咳嗽、肺啰音、呼吸音等肺部表現、肺外受累（消化系統、心血管系統、肝臟、腎臟、皮膚、神經系統）；影像學表現主要為胸腔積液、肺不張等影像學表現；支氣管鏡檢查情況主要包括黏膜糜爛、黏膜脫落、黏液栓形成等。

標本收集：①血清收集：所有病兒入院后采集外周靜脈血，對照組受試者查體當天采集外周靜脈血，促凝后以3 000 r/min的速度離心10 min，收集上清液保存備用。②肺泡灌洗液收集：術前征求病兒近親屬知情同意，給予2.0%利多卡因霧化局部表面麻醉，肌肉注射阿托品，入室后經鼻腔滴入呋嘛滴劑，采用咪達唑侖鎮靜，根據病兒選擇對應的纖維支氣管鏡，適量丁卡因膠漿涂抹鏡管，插入病變管腔內，觀察病灶后進行支氣管肺泡灌洗，灌洗液選用37 ℃0.9%氯化鈉溶液，體質量＜20 kg 的病兒，灌洗量為1 mL/kg；體質量≥20 kg 的病兒，灌洗量為20 mL，灌洗結束后以13.3～20.0 kPa 負壓抽吸灌洗液，灌洗液分裝在1.5 mL離心管內，以3 000 r/min離心10 min，收集上清液保存備用。

指標測定：分別測定血清及肺泡灌洗液內IFN-γ、TXB2 和sB7-H3 水平，各指標的測定均采用酶聯免疫吸附法，IFN-γ、sB7-H3等指標測定試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供，TXB2 指標測定試劑盒由上海羽朵生物科技有限公司提供，實驗操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法采用SPSS 19.0進行數據處理與統計學分析，計數資料以例（%）表示，組間比較行χ2檢驗；計量資料以±s 表示，兩組間比較行獨立樣本t檢驗，三組間比較采用單因素設計的方差分析的方法，三組之間兩兩比較采用LSD-t檢驗的方法；兩組分類數據的比較采用χ2檢驗的方法；血清及肺泡灌洗液指標與臨床癥狀的相關性采用Spearman相關性分析，繪制ROC 曲線評價各指標診斷RMPP的價值，檢驗水準α＝0.05。

2 結果

2.1 一般資料比較三組病兒性別組成、年齡比較未見明顯差異，RMPP組病兒發熱天數顯著高于MPP組（P＜0.05）。見表1。

表1 RMPP、MPP病兒各80例及健康兒童50例一般資料比較

2.2 臨床癥狀表現分析RMPP組病兒肺部呼吸音減低、肺實變、胸腔積液、黏膜糜爛、黏液栓形成等發生率顯著高于MPP組（P＜0.05）。見表2。

2.3 各組病兒血清學指標及肺泡灌洗液指標比較RMPP 組、MPP 組病兒血清 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3水平顯著高于對照組（P＜0.05），RMPP組血清各指標水平高于MPP 組（P＜0.05）；RMPP 組病兒肺泡灌洗液中 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3 水平均顯著高于MPP組（P＜0.05）。詳見表3。

2.4 入組病人血清、肺泡灌洗液指標與臨床特征的相關性分析血清IFN-γ、sB7-H3 水平與病兒胸腔積液、肺實變發生相關（P＜0.05）；血清TXB2 及肺泡灌洗液IFN-γ、TXB2、sB7-H3 水平與肺部呼吸音減低、肺實變、胸腔積液、黏液栓形成等癥狀相關（P＜0.05）。見表4。

2.5 血清、肺泡灌洗液指標對RMPP的診斷價值分析ROC曲線分析示，肺泡灌洗液TXB2診斷RMPP的曲線下面積最大，診斷截點值為68.59 pg/mL，診斷靈敏度及特異度分別為85.0%、78.7%。詳見表5。

3 討論

現有研究證實，MP 感染后機體細胞因子水平及免疫功能狀態對MP 感染病人疾病發生、發展及預后密切相關［5-6］。本研究對 RMPP 病兒及 MPP 病兒臨床癥狀進行比較，結果顯示，RMPP組病兒肺部呼吸音減低、肺實變、胸腔積液、黏膜糜爛、黏液栓形成等發生率高于MPP 組，與前人報道的RMPP 臨床癥候基本類似［7-8］。目前MPP 如何發展為RMPP的具體機制尚未完全闡釋清楚，以往認為可能與MP 耐藥性、病毒載量、混合感染、氣道黏液高分泌等因素相關，而細胞因子水平也在其中發揮重要作用［9-10］。本研究中 IFN-γ 是 Th1 細胞分泌的主要細胞因子，既往被諸多研究證實在感染性疾病中均存在顯著性升高［11-12］。B7-H3是新近發現為共刺激分子B7 家族成員，也是T 細胞的輔助性刺激因子，研究證實其可促進IFN-γ、腫瘤壞死因子、白細胞介素-6的釋放，調節機體的炎癥反應［13］。TXB2 屬于前列腺素家族成員，是花生四烯酸的代謝產物，可與G蛋白受體及TXA2發生反應，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺動脈高壓等多種肺部疾病的發展過程中發揮重要作用［14］。本研究結果顯示，與MPP 病兒比較，RMPP 病兒存在血清及肺泡灌洗液中IFN-γ、TXB2和sB7-H3水平顯著升高，且其部分指標與病兒的臨床癥候呈正相關，提示血清及肺泡灌洗液IFN-γ、TXB2和sB7-H3水平可一定程度反映MPP病兒的病情。既往翟佳羽等［15］研究證實，與普通MPP 比較，RMPP病兒病情更重，血清IFN-γ等細胞因子水平更高，是RMPP發生的獨立危險因素；張新星等［16］也證實RMPP組病兒血清sB7-H3水平較MPP更高，本研究在前人研究結果上進一步證實了RMPP病兒存在更為明顯的炎性因子亢進狀態。

表2 RMPP、MPP病兒各80例臨床表現比較/例（%）

表3 RMPP、MPP病兒各80例及健康兒童50例血清指標及肺泡灌洗液指標比較/（pg/mL，±s）

表3 RMPP、MPP病兒各80例及健康兒童50例血清指標及肺泡灌洗液指標比較/（pg/mL，±s）

注：RMPP為難治性肺炎支原體肺炎，MPP為支原體肺炎，IFN-γ為γ干擾素，TXB2為血栓素，sB7-H3為可溶性B7-H3；-為無數值

組別對照組MPP 組RMPP 組F（t）值P 值例數50 80 80血清IFN-γ 104.12±31.02 624.85±158.96 895.63±212.96 355.648 0.000 TXB2 35.85±12.45 195.17±79.63 289.28±89.56 179.126 0.000 sB7-H3 44.15±15.74 312.48±105.71 466.71±127.45 264.223 0.000肺泡灌洗液IFN-γ-45.78±10.27 89.46±34.12（10.964）0.000 TXB2-54.17±17.48 88.45±32.78（8.253）0.000 sB7-H3-107.48±34.71 142.51±44.78（5.530）0.000

表4 難治性肺炎支原體肺炎80例血清學、肺泡灌洗液指標與臨床特征的相關性分析（r/P值）

表5 難治性肺炎支原體肺炎80例血清、肺泡灌洗液指標對RMPP的診斷價值分析

本研究結果顯示，肺泡灌洗液TXB2診斷RMPP的曲線下面積最大，肺泡灌洗液sB7-H3及IFN-γ次之，而血清 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3 診斷曲線下面積均不足0.7，提示與血清學指標比較，肺泡灌洗液具有更高的診斷效能。分析其原因，血清學炎性因子指標可受多種因素影響，感染、代謝異常等因素均可造成血清指標的波動，不確定因素較多；而肺泡灌洗液是肺部病灶沖洗收集的液體，其水平可直接反應病灶部位的炎癥狀態，診斷價值更高［17］。本研究結果中肺泡灌洗液TXB2診斷截點值為68.59 pg/mL，診斷靈敏度及特異度分別為85.0%、78.7%，具有較高的診斷價值。既往研究證實，TXB2 水平與氣道黏膜栓形成相關，病原體進入呼吸道后可刺激吞噬細胞釋放TXB2，其水平升高刺激機體C反應蛋白合成增多，而TBX2同時作為一種血管收縮劑，其可引起血小板聚集及氣道平滑肌收縮，增加氣道高反應性，同時促使血管滲透性增高，增加氣道分泌物，加重氣道炎癥反應，最終導致氣道黏膜栓的形成［18-19］。而有研究報道，大量氣道黏膜栓是導致難治或重癥MPP發生的重要危險因素［20］，因此，推測TBX2對機體炎癥及氣道高反應的控制是其具有較高診斷效能的可能機制。

綜上，與MPP比較，RMPP病兒存在血清及肺泡灌洗液 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3 的明顯升高，可用于疾病診斷，各指標中，肺泡灌洗液TXB2 診斷RMPP的診斷效能最高，可作為RMPP 早期診斷的參考指標。