膽固醇對HepG2細胞脂代謝通路的影響

張仁文

(吉林化工學院，吉林 吉林 132022)

1 引言

肝癌作為全球死亡率極高的惡性腫瘤，嚴重威脅人類的生命與健康，因此尋找有效的治療手段愈發重要。肝癌細胞有增殖迅速這一特征，這種極速增殖是由肝癌細胞中異常的脂質代謝引起的[1，2]。脂質代謝一方面增強肝癌細胞能量的獲取來促進細胞增殖和轉移，另一方面脂質代謝產物還可以作為信號分子用來加強細胞信號的傳遞[3，4]。膽固醇是細胞中的天然組分，其不僅是細胞膜的主要成分也是體內多種活性物質合成的前體分子。有研究表明細胞內膽固醇代謝紊亂能引起一系列疾病[5]，然而外源性膽固醇在癌癥發生發展中的作用仍未得到充分研究。因此本實驗將探究外源膽固醇對肝癌細胞活力的影響，并進一步觀察對細胞脂質代謝中關鍵基因表達的影響。

2 材料與方法

2.1 實驗細胞

人肝癌細胞系HepG2。

2.2 實驗藥品

DMEM培養基、PBS緩沖液、膽固醇、CCK-8、逆轉錄試劑盒、qRT-PCR檢測試劑盒。

2.3 實驗方法

2.3.1 CCK-8檢測細胞活力

HepG2細胞培養至約80%匯合度時，胰酶消化并計數，以每孔5000個細胞接種于96孔板中培養過夜。配制不同膽固醇濃度的培養基并替換96孔板培養基，膽固醇濃度分別為0，6.25，12.5，25，50，100mg/L，每個濃度設置4個復孔，其中0mg/L為對照組，繼續培養(37℃，5% CO2)。培養24 h后向每孔加入10μL CCK-8溶液，用移液器吹打混勻，將96孔板在細胞培養箱內繼續培育2h，用酶標儀測定各孔在450nm處的吸光度。

2.3.2 qRT-PCR檢測脂代謝相關基因表達情況

1、樣品RNA的提取

將HepG2細胞以2×105個/孔接種于6孔板中培養過夜。分別加入含0，12.5，100mg/L膽固醇的DMEM培養基繼續培養24h。……