表面活性劑協同超聲波酶法提取三七花總皂苷工藝優化及抗氧化活性研究

陳紅惠，TARUN BELWAL，李剛鳳，羅自生,3,4*

1(文山學院 化學與工程學院，云南 文山，663099)2(浙江大學 生物系統工程與食品科學學院，浙江 杭州，310058)3(浙江大學 馥莉食品研究院，浙江 杭州，310058)4(浙江大學 農業和農村部農產品采后處理重點實驗室、國家和地方食品智能技術與裝備聯合工程實驗室、浙江省農產品加工重點實驗室、浙江省食品技術與裝備工程實驗室，浙江 杭州，310058)

三七為中國特有的名貴中藥材，又稱“田七”、“金不換”，主要產于云南省文山州。三七除含有三七皂甙外，還有揮發油、氨基酸等多種活性成分，三七對于心血管和腦血管系統具有生理活性作用，還可抑制腫瘤細胞的生長，增強免疫系統和神經系統，并具有抗炎和抗衰老的特性[1-5]。三七全株中皂苷含量最高，但皂苷種類與根莖部位有所差異，研究發現三七花降血壓，降血脂的功效優于三七主根[6]。如今，我國有500多家制藥、保健和化妝品公司使用三七作為原料，三七產業發展具有巨大的市場前景，但目前國內三七系列產品多以三七根為原料加工而成，三七花通常作為花茶進行泡飲或作為菜肴烹飪食用，其利用率和經濟附加值都很低，對三七花的深入開發是三七產業發展的必然趨勢。

對于中草藥產品的開發，安全高效是成分提取的重要前提。常見的提取方法中回流、煮沸、滲濾等方式通常需要大量的溶劑和時間，成本較高，存在提取效率低、環境污染等問題[7]。另外，以上傳統提取方法會導致皂苷水解，導致提取物的生物活性降低[8]。近年來，各種新的提取方法應用于中藥功效成分的提取，如雙水相萃取，離子液提取，超高壓提取等[9-18]，但這些方法設備成本高，容易造成環境污染，技術難以推廣。目前，提取的最新趨勢技術主要集中在尋找盡量減少污染，降低提取溶劑消耗和能量要求。近來，應用表面活性劑取代傳統的有機溶劑進行天然產物提取分離成為研究新方向[19]，由于它本身具有兩親性，使得它可以同時提取極性范圍跨度很大的目標化合物[20]。VIEIRA等[21]利用非表面活性劑從微藻中提取了類胡蘿卜素，馬祥等[22]采用超聲-表面活性劑協同的方法提取竹葉中的總黃酮，提取效果更好。采用表面活性劑提取與其他方法相比具有提取條件溫和、更環保、安全性高、成本低等優點，可產業化生產[23]。

采用傳統方法對三七花皂苷的提取已有大量研究，然而，兼顧綠色環保、高效的提取方法研究較少，表面活性劑作為溶劑已經被證明具有良好的萃取效率，但要進一步提高提取效率，還需要開發一種聯合萃取方法。纖維素酶和果膠酶等在破壞細胞壁、提高生物活性成分的提取和進一步縮短提取時間方面表現出一定優越性；超聲輔助萃取通過提供超聲波，產生空化氣泡，對細胞結構進行機械損傷，在實驗室和放大實驗中均證明了其較高的萃取效率[17-18]。結合這些提取技術的優點，本研究建立了一種新的酶法-超聲輔助表面活性劑提取方法，考察其對三七總皂苷的提取效率，并與熱回流提取法和超聲輔助提取法傳統進行比較。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

三七花，產于云南文山；標準品人參皂苷Re、Rg1、Rc、Rb1、Rb2、Rb3、Rd、F2，三七皂苷R1、Fc、Fe，北京中科益友化工研究院；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)(純度>98%)、Triton X-100、Fe-三吡啶三吖嗪(TPTZ)、纖維素酶、果膠酶等，上海Aladdin公司，均為分析純；puc19 DNA質粒，生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.2 儀器與設備

KQ-600E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Gemini SEM300熱場發射掃描電子顯微鏡，德國Carl Zeiss公司；DYCZ-24DN電泳儀，浙江納德科學儀器有限公司；凝膠成像分析系統，北京布拉德科技發展有限公司；酶標儀，瑞士TECAN公司。

1.3 三七花皂苷的提取

將三年生的新鮮三七花通過冷凍干燥機干燥后，用粉碎機碾碎，通過40目篩。三七花粉末被收集在一個棕色的瓶子里，儲存在-20 ℃的冰箱里以供進一步分析。對干燥三七花粉進行了不同提取條件的研究。

1.3.1 加熱回流提取(heat reflux extraction，HRE)

稱取1.00 g三七花粉，加入含有30 mL體積分數為70%的乙醇的圓底燒瓶中，將三七花粉與乙醇均勻混合，然后置于水浴鍋中，與冷水連接，在70 ℃下回流加熱1.5 h。

1.3.2 超聲輔助提取(ultrasound-assisted extraction，UAE)

將1.00 g三七花粉放入錐形瓶中，加入30 mL 70%(體積分數)的乙醇，旋渦攪拌后,在60 ℃溫度，超聲功率465 W的超聲波清洗器中提取40 min。

1.3.3 酶解超聲輔助表面活性劑提取(enzymolysis-ultrasound-assisted surfactant extraction，EUASE)

將三七花粉(1.00 g)與30 mL Triton X-100溶液(0.24 mmol/L)和0.2%復合酶[m(纖維素酶)∶m(果膠酶)=4∶6]在50 mL PFTE容器中混合均勻，將容器蓋上，在60 ℃下恒溫水浴酶解孵育1.5 h，然后將反應化合物置于超聲波清洗器中以465 W超聲處理40 min。

1.4 三七總皂苷含量測定方法

采用香草醛-高氯酸比色法測定三七總皂苷(Panaxnotoginsengsaponins，PNS)含量[15]，以三七皂苷R1為對照，線性回歸方程為：y=2.428 3x-0.002 4，R2=0.999 7，其中y為吸光值，x為皂苷含量(mg)，根據回歸方程可計算得到PNS含量，按公式(1)計算PNS得率:

(1)

1.5 實驗設計

1.5.1 單因素實驗

在單因素實驗之前，進行了預實驗以選擇最佳溶劑和提取方法，在預實驗中測試不同溶劑(水、乙醇、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、曲拉通X-100、吐溫 20)和提取方法(水浴、超聲波、酶解超聲波)中，溶劑曲拉通X-100和酶解超聲法提取三七花皂苷得率最高[24]。通過單因素試驗確定各因素的最佳條件。分別設定復合酶添加量(0.04%～0.24%，質量分數)、酶解pH(2～7)、酶解溫度(20～70 ℃)、酶孵育時間(0.5～3 h)、液固比(10∶1～60∶1)、超聲功率(300～600 W)、超聲時間(10～60 min)和超聲溫度(30～80 ℃)在不同條件下提取。對每個因素進行了6個層次的測試，每次改變1個因素水平，其他因素保持不變。

1.5.2 響應面優化三七花總皂苷提取條件

通過對單因素實驗結果進行多重比較分析,選擇有顯著影響的3個因素(超聲時間、酶解溫度、超聲功率)進行Box-Behnken (BBD)設計，自變量分別為X1(超聲時間),X2(酶解溫度),X3(超聲功率)，以PNS提取率為實驗的響應值Y，通過試驗進行分析。對實驗數據進行回歸分析并擬合到二階多項式模型，如公式(2)所示。為了推導出二次方程，使用BBD設計了17個階乘點和5個中心點的重復，統計分析BBD中的數據，建立數學模型，估計獨立變量的響應，驗證響應實驗的有效性。

(2)

式中：Y為響應因變量(PNS提取率)，A0是回歸常數;Ai是第i次線性系數;Aii是第i次二次項系數;Aij是第i次交互項系數(i≠j);n是實驗中研究和優化的因子數量，Xi和Xj是編碼的獨立變量[13,25]。

1.6 抗氧化測定

1.6.1 PNS對DPPH自由基清除能力測定

將EUASE優化條件下提取得到的PNS提取液稀釋成不同濃度，參考HUANG等[26]方法，并做少量修改，測定PNS對DPPH自由基的活性清除能力。準確吸取各濃度提取液100 μL轉移至96孔板，然后將190 μL DPPH溶液(0.1 mmol/L)添加到各樣品中，在黑暗中反應0.5 h，測定515 nm處吸光值，甲醇作為空白對照，結果表達為毫克 Trolox 當量每克干物質(mg TE/g DW)。

1.6.2 鐵離子還原/抗氧化能力(Ferric ion reducting/antioxidant power，FRAP)實驗測定PNS抗氧化能力

參考HUANG等[26]方法進行適當修改。按照體積比例10份醋酸緩沖液(0.1 mol/L)，1份TPTZ(10 mmol/L)，1份FeCl3(20 mmol/L)混合配制FRAP試劑。取樣品提取液100 μL，加入FRAP 190 μL，混合均勻，置于37 ℃水浴鍋中10 min，然后于593 nm下進行吸光度測定，以甲醇為空白對照。結果表達為毫克 Trolox 當量(TE)每克干物質(mg TE/g DW)。

1.6.3 PNS對質粒DNA氧化損傷的保護作用

通過加入不同濃度樣品溶液，研究其對DNA氧化損傷變化影響。分別移取 pUC18質粒DNA 1 μL，PNS提取液4 μL，Fenton氧化劑(100 μmol/L的FeSO4、1 mmol/L的H2O2和104 μmol/L的EDTA)8 μL，用PBS補體積均為20 μL于2.0 mL離心管中。離心振蕩后置于37 ℃水浴鍋中60 min，加入 2.0 μL 10×Loading buffer染色，混勻，經瓊脂凝膠電泳分離25 min，使用凝膠成像分析系統照相觀察[27]。

1.7 HPLC測定皂苷組分

用高效液相色譜(Waters e2695)配合2998 PDA檢測器測定三七花中皂苷組分，檢測波長為203 nm。將EUASE皂苷提取液用0.22 μm濾膜進行過濾，用Agilent C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 mm)分離，流動相溶劑A(乙腈)和溶劑B(0.5%磷酸)梯度洗脫:0～5 min，25%A；5～20 min，30%A；20～30 min，35%A；30～70 min，45%A；70～80 min，35%A；80～90 min，25%A。注入10 μL樣品體積，在柱溫40 ℃，流速 0.3 mL/min條件下洗脫分離。

1.8 掃描電子顯微鏡觀察

采用掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope，SEM)對提取處理前后的三七花樣品進行觀察。分別稱取1 g干燥三七花粉末，進行HRE、UAE、EUASE提取，然后過濾提取液，收集濾渣置于玻璃培養皿內，在60 ℃熱風干燥箱中干燥1 h。用導電膠將各處理后的樣品粘在樣品臺上并噴金，在電壓為5.00 kV，高真空條件下，使用SEM進行觀察。

1.9 數據分析與圖形繪制

所有實驗均進行了3次平行，結果以均值±標準差表示；BBD設計采用Design Expert (Version 10.0)軟件；統計學處理采用SPSS 17.0軟件，組間差異采用ANOVA進行Duncan差異分析，差異的顯著性被定義在5%的水平(P<0.05)；實驗結果圖用Origin 8.0繪制。

2 結果與分析

2.1 單因素實驗多重比較分析

為優化提取工藝條件，對各單因素的最佳提取率水平進行多重比較分析，找到顯著影響PNS提取率的因素，為BBD設計提供判斷依據，多重比較結果如表1所示。

表1 不同因素對PNS提取率影響的多重比較Table 1 Multiple comparisons of the effects of different factors on the yield of PNS

通過對各單因素的多重比較分析，不同因素中超聲時間、酶解溫度和超聲功率提取PNS的得率較其他因素較高，與其他因素提取結果相比，具有顯著性差異(P<0.05)，其余因素對PNS提取率影響不顯著，故實驗選擇超聲時間、酶解溫度、超聲功率為主要影響因素，進行響應面優化實驗。

2.2 單因素實驗分析

2.2.1 超聲時間對PNS提取率的影響

超聲時間在10～60 min與PNS提取率的關系如圖1-A所示。當超聲開始時，PNS提取率相對較低，但是20 min后，PNS的提取率顯著提高，并在50 min時提取率最高，這是由于在超聲過程中，在聲波振動影響下，介質細胞受到不同程度破壞，此外機械能轉變為熱能，使得介質溫度提高，加速分子運動，從而促進有效成分的溶解[11]?？梢?，需要達到一定超聲時間對物料才可產生明顯的空化效應和機械效應，從而提高PNS的提取率。當超聲時間大于50 min，PNS的提取率減少，這可能是強烈的機械效應會破壞皂苷化合物的苷元結構，使得溶出的PNS產物部分被分解，從而提取率導致下降，這種現象在其他成分提取也有類似影響[25]。

2.2.2 酶解溫度對PNS提取率的影響

由于酶屬于生物活性物質，酶溶液反應溫度嚴重影響酶的活性和構象。酶解溫度在20～50 ℃范圍內與PNS提取率的關系如圖1-B所示。在50 ℃以下時，隨溫度增加PNS的提取率升高明顯，提取率最高達15.65%，這一現象的原因是酶需要在最適的溫度下激發其活性，植物組織才能得到有效分解，有效成分也因此能更好溶出。當溫度超過50 ℃，PNS的提取率出現下降，這是由于超過一定溫度總是會導致酶活性降低。

2.2.3 超聲功率對PNS提取率的影響

由于空化效應，超聲功率在萃取過程中發揮了重要作用。超聲功率在300～600 W范圍內與提取率的關系如圖1-C所示。當超聲功率為420 W時，PNS提取率最高，達到15.89%，功率繼續增加反而降低了PNS的提取率。通過超聲波的功率可控制頻率與強度，改變空穴強度，達到提高提取率的目的。需引起注意的是，超聲頻率過高相反引起提取率下降，這主要是超聲波產生的輻射壓細胞組織變形，植物蛋白質變性，對有效成分結構破壞或分解[25]。

2.3 Box-Behnken設計優化變量

2.3.1 模型建立與統計分析

利用軟件Design Expert (Version 10.0)進行實驗設計和數據分析。研究了3個隨機因子(超聲時間、酶解溫度、超聲功率)對響應值(PNS提取率)的影響，BBD實驗設計及PNS提取率見表2，通過多元回歸分析，得到PNS提取率的多元二次回歸響應面模型如下:

A-超聲時間；B-酶解溫度；C-超聲功率圖1 單因素對PNS提取率的影響Fig.1 Effect of single factor on the yield from PNS注：不同字母表示具有顯著性差異(P<0.05)

表2 Box-Behnken實驗設計及響應值結果Table 2 Results of Box-Behnken design tests

表3 回歸方差分析表Table 3 Analysis of variance of the regression model

注: “*”表示顯著(P<0.05)，“**” 表示極顯著(P<0.01)

2.3.2 響應面交互影響

通過繪制三維響應面圖及等高圖，可以直觀的反映各因素與PNS提取率的相互影響關系。由圖2-A可看出，與酶解溫度方向比較，超聲功率曲線更陡峭。當酶解溫度大于55 ℃時，等高線密度非常密集(圖2-B)，表明酶解溫度和超聲功率(X23)存在顯著交互作用。在圖2-C和圖2-D中，酶解溫度和超聲時間的響應曲面較陡，等高線趨向橢圓形，說明此時超聲時間和酶解溫度之間的交互作用對PNS提取率的有較大影響。適宜的酶解溫度對于溶劑能更深入進入組織內部，一定的超聲時間為原料產生疏松結構形成重要影響，二者之間對提取率有顯著的影響關系。這種相互影響關系在蘋果皮多酚、苦瓜多糖等活性物質提取的超聲波酶法提取中也有相同結論[11-13]。由圖2-E和圖2-F可看出，響應曲面較平緩，等高線密度均勻，無密集情況出現，表明超聲功率與超聲時間的交互作用不顯著。

圖2 各因素交互作用的響應面和等高線圖Fig.2 Response surface and contour diagram of the interaction of various factors

2.3.3 模型結果驗證

以Box-Behnken Design(BBD)模型為基礎，結合各因素的線性、二次項和交互作用的顯著性，確定了EUASE最佳提取條件為：酶解溫度59.91 ℃，超聲時間40.21 min，超聲功率464.69 W，通過模型方程預測PNS的最大響應值為16.41%。根據實際實驗條件，將最佳條件修改為酶解溫度60 ℃，超聲時間40 min，超聲功率465 W，在此條件下進行3次驗證實驗，PNS提取率平均可達(16.38±0.02)%，與預測值的符合度較高，證實了響應模型預測的適用性，該條件可用進一步用于從三七花中提取PNS。

2.4 EUASE和其他傳統方法的比較

分別采用HRE、UAE和EUASE三種方法對三七花進行PNS提取，由圖3可知，HRE提取效率最低，為(13.47±0.12)%，UAE提取效果優于HRE提取，達到(15.63±0.08)%，2種方法相同之處在于提取溶劑均為乙醇，但UAE得到更高的提取效率歸因于超聲產生的空穴效應，對原料細胞壁結構破壞，導致固液相的接觸面積變大，有效成分更易溶出。以上結果中EUASE法得到最高的提取率，為(16.38±0.02)%，比HRE高約2.91%，比UAE提高了0.75%，原因是主要由于處于臨界濃度的表面活性劑膠束更容易滲透進入細胞，具有更好溶解提取物的能力，可見，表面活性劑取代乙醇有機溶劑后，通過超聲酶解輔助作用，提取物溶出量更多，提取率更高。

有研究報道采用發酵法輔助提取三七皂苷，利用微生物產生的酶破壞三七細胞壁結構，可使三七皂苷提取含量達到(12.25±0.21)%，比醇提含量(9.05±0.43)%提高了35.36%[28]，提取率雖然有較大提高，但發酵時間需4 d，效率低。LIN等采用離子液體進行超聲提取從人參根中提取人參皂苷[29]。在優化條件下總皂苷提取率達(17.81±0.47)mg/g；WANG等[15]采用微波輔助酶解法對人參莖葉總皂苷進行提取，最佳條件下提取含量為(60.62±0.85)mg/g。與現有的三七皂苷提取技術的提取率相比，EUASE法具有提取效率高，提取溶劑安全環保，成本低，可工業化推廣等優勢，結果表明，該方法簡便、高效、低成本、環保，對其他植物有效成分的提取也有參考價值。

2.5 抗氧化活性

2.5.1 三七總皂苷對DPPH自由基清除效果的測定

酚羥基是三七皂苷類物質中主要活性基團,自由基能被酚羥基捕獲生成穩定的半酮式結構，使得自由基鏈式反應終止[30]。采用DPPH法測定UAE、EUASE、HRE三種處理方式下及不同濃度PNS的體外抗氧化能力，如圖3-A所示，各提取物濃度增加時PNS的抗氧化能力也隨之增加，但不同方法提取得到的三七花提取液抗氧化活性顯著不同，EUASE法得到的PNS表現出明顯高于HRE和UAE的抗氧化能力，當PNS質量濃度增加到20 mg/mL時，EUASE法的樣品DPPH自由基清除能力達高150.46 mg TE/g DW，而HRE法的樣品抗氧化能力最低，其DPPH自由基清除能力為63.39 mg TE/g DW。這是由于酚羥基數目的多少影響三七皂苷抗氧化能力的差異，當三七花提取濃度增加，皂苷含量高，故具有較多的酚羥基基團提供氫離子，表現良好的清除自由基的作用。由以上結果可知，EUASE法的PNS提取率最高，抗氧化能力最強，HRE法中提取時間較長，也會帶來對三七皂苷苷元結構的分解，導致酚羥基數目減少，表現出弱的抗氧化性[26,28]。

2.5.2 FRAP測定

FRAP抗氧化能力測定，即通過待測物質對鐵還原能力，反映樣品總抗氧化能力，抗氧化能力越強則吸光值越高。圖3-B中不同方法提取的PNS樣品抗氧化能力隨濃度增加出現明顯增加趨勢，與傳統提取方法(UAE、HRE)相比，以EUASE法提取物的抗氧化能力增加趨勢更明顯，最高達264.72 mg TE/g DW(20 mg/mL)，在相同濃度條件下，3種提取方法PNS提取物的抗氧化能力依次為EUASE>UAE>HRE，故EUASE提取的PNS總抗氧化能力高于相同條件下USE和HRE法提取的PNS。

A-DPPH自由基清除力；B-FRAP測定圖3 不同質量濃度PNS的抗氧化活性Fig.3 Antioxidant activity of the extracts of PNS at different concentrations

2.5.3 三七總皂苷對質粒 DNA 氧化損傷的防護作用

實驗將質粒DNA經Fenton試劑處理后，通過凝膠電泳檢測質粒DNA超螺旋結構的轉變，并觀察其氧化損傷保護程度。電泳圖4中lane2為DNA損傷未保護對照組，該組DNA發生完全氧化損傷，超螺旋結構被破壞，超螺旋結構數量比泳道1空白組大大減少。在泳道3～11加入不同濃度PNS對DNA進行孵育，在0.019 5～0.156 mg/mL時，超螺旋結構的質粒DNA明顯增多，與濃度呈依賴關系；而在0.156～5.00 mg/mL時，質粒DNA開環結構增多，表明PNS對其氧化損傷保護作用開始減弱。對比PNS體外抗氧化能力，體外抗氧化實驗中PNS的清除自由基能力與濃度呈正相關量效關系，而對DNA的氧化損傷保護實驗結果中，PNS在低濃度時表現出保護DNA免被氧化損傷的作用，在高濃度時卻有促氧化的作用，原因是皂苷結構中的酚羥基對·OH進行直接清除，從分子結構來看，·OH可與皂苷分子形成多種消旋結構，避免DNA生物分子的損傷，另外PNS可能還有絡合、嵌入等其他方式與DNA結合起到保護作用[27]。

泳道1-未損傷DNA；泳道2～11-DNA+Fenton試劑+PNS提取液(0、0.0195、0.039、0.078、0.156、0.312、0.625、1.25、2.50、5.00 mg/mL)圖4 不同濃度PNS提取液對質粒DNA損傷影響的電泳圖Fig.4 Protection against oxidative damage to puc19 DNA with the different concentrations of PNS extract

2.6 HPLC組分分析

依次將11種人參皂苷、三七皂苷標準品的混標樣品和EUASE法最優條件下提取的皂苷樣品按1.7方法進行HPLC分離，HPLC色譜圖如圖5所示。對比圖5-A中11種標準品的分離保留時間，可看出圖5-B中三七花通過EUASE法提取后分離得到三七皂苷R1、Fc、Fe，人參皂苷Rg1、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、F29種皂苷組分。

2.7 掃描電鏡觀察結果

為進一步了解不同提取方法對三七花皂苷提取率產生較大差異的原因，使用掃描電鏡觀察經以下方法處理后的三七花樣品，結果見圖6。未處理三七花樣品細胞壁結構完整致密，均勻(圖6-A)；樣品進行HRE處理后，樣品表面出現疏松結構，有少數部位穿孔，但細胞壁結構大部分完整，沒有被破壞，原因可能是采用溶劑加熱法提取對物料結構影響不大，導致能溶出的提取物有限(圖6-B)；當樣品進行UAE處理，樣品表面結構出現較大空穴結構，破壞程度強于HRE法處理，說明超聲波的破壞作用比HRE有效得多，空穴效應明顯，能使物料結構疏松，有利更多有效成分與溶劑接觸并溶出，從形成的空穴看，內部仍有致密結構存在(圖6-C)；通過EUASE處理后，樣品結構產生的空穴更大更多，相比較UAE法結構更疏松，對細部內部結構破壞更深入，這主要是由于在復合酶的分解作用下，表面的組織細胞壁分解，再加上超聲波產生較多空化氣泡，相互碰撞過程中，產生更高溫度和壓力的微射流，植物細胞內部帶來更大破壞，將細胞分解成更多小碎片，促使物質的溶解及在溶劑中的轉移(圖6-D)。由上可知，不同的處理方式與樣品結構的破壞程度有直接關系，原料內部結構破壞程度越大提取率也越高。EUASE法處理的原料破壞性最強，表現出最高提取率的結果是必然的。

A-混標色譜圖;B-樣品色譜圖圖5 三七花總皂苷色譜圖Fig.5 Chromatogram of total saponins of Panax notoginseng flowers

A-未處理干燥三七花;B-HRE法處理三七花;C-UAE法處理三七花;D-EUASE法處理三七花圖6 掃描電鏡圖像Fig.6 Scanning electron microscope images

3 結論

(1)通過響應面分析法得到表面活性劑協同超聲波酶法提取三七花總皂苷的最佳工藝為添加0.2%(質量分數)復合酶，液固比為30∶1 (mL∶g)的Triton X-100，在酶解pH為5，酶解溫度60 ℃，超聲功率465 W條件下超聲提取40 min，PNS提取率可達16.38%。EUASE對PNS提取起到重要作用，與傳統提取方法相比，EUASE法能提高PNS的提取率。對于提取得到的三七總皂苷表現出較強抗氧化能力和保護DNA氧化損傷作用。

(2)EUASE法是一種綠色的提取技術，提取溶劑采用表面活性劑，具有提取效率高、用量少、成本低、無毒可降解、綠色環保等優點。本研究可推廣用于在其他植物化學成分提??；并在優化條件下，用三七花提取有重要價值的皂苷，應用于各種功能食品、醫藥產品、化妝品中。