梅毒血清固定患者外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平變化及意義

駱冬蘭

【摘要】 目的：探究梅毒血清固定患者外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平變化及意義。方法：選取2016年8月-2019年9月本院收治的梅毒血清固定患者38例為固定組，梅毒治療后非梅毒螺旋體抗原血清試驗轉陰患者27例為轉陰組，以及進行體檢健康者33例為健康對照組。采用流式細胞儀雙標法檢測三組外周趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，采用雙抗體及夾心ELISA法檢測三組IL-12、IL-10水平，觀察分析三組外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平的變化及意義。結果：固定組外周血CCR3表達明顯高于轉陰組與健康對照組（F=255.441，P<0.05），而CCR5、CXCR3表達均低于轉陰組與健康對照組（F=70.674、218.128，P<0.05）;轉陰組與健康對照組外周血細胞CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3比較，差異均無統計學意義（P>0.05）;固定組IL-10水平明顯高于轉陰組與健康對照組（F=48.205，P<0.05），IL-12比轉陰組與健康對照組低，但差異無統計學意義（F=1.173，P>0.05）;ROC曲線顯示，外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平對梅毒血清固定的AUC依次為0.838、0.797、0.592、0.908、0.503、0.660。結論：外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平對梅毒血清固定有著一定的診斷價值，對梅毒血清固定患者的病情發展起著很重要的作用。

【關鍵詞】 梅毒 血清固定 外周血 趨化因子受體 細胞免疫 細胞因子

[Abstract] Objective： To investigate the changes and significance of chemokine receptor and IL-12， IL-10 in peripheral blood of patients with syphilis serum fixation. Method： From August 2016 to September 2019， 38 patients with syphilis serum fixation treated in our hospital were selected as the fixed group， after syphilis treatment 27 patients with negative serum test of non-Treponema pallidum antigen were selected as the negative group， and 33 healthy people who underwent physical examination were taken as the healthy control group. The levels of CCR3， CCR5， CXCR4 and CXCR3 of three groups were measured by flow cytometry， and the levels of IL-12， IL-10 of three groups were detected by double antibody and sandwich ELISA. The changes and significance of chemokine receptor and IL-12， IL-10 levels in peripheral blood of three groups were observed and analyzed. Result： The expression of CCR3 in peripheral blood of the fixed group was significantly higher than those of the negative group and the healthy control group （F=255.441， P<0.05）， while the expression of CCR5， CXCR3 were lower than those of the negative group and the healthy control group （F=70.674， 218.128， P<0.05）. The difference of CCR3， CCR5， CXCR4 and CXCR3 in peripheral blood cells between the negative group and the healthy control group were not statistically significant （P>0.05）. The level of serum IL-10 in the fixed group was significantly higher than those in the negative group and the healthy control group （F=48.205， P<0.05）， but the serum IL-12 in the fixed group was lower than those in the negative group and the healthy control group （F=1.173， P>0.05）. The ROC curve showed that the level of the peripheral blood chemokine receptor， IL-12 and IL-10 in the serum of syphilis were 0.838， 0.797， 0.592， 0.908， 0.503， 0.660. Conclusion： The level of chemokine receptor， IL-12 and IL-10 in peripheral blood has a certain diagnostic value for syphilis serum fixation， and plays an important role in the development of syphilis serum fixation patients.

[Key words] Syphilis Serum fixation Peripheral blood Chemokine receptor Cellular immunity Cytokine

First-authors address： Shenzhen Maternity & Child Healthcare Hospital Affiliated to Southern Medical University， Shenzhen 518028， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.24.009

梅毒是由梅毒螺旋體所引起的一種慢性傳播疾病，其主要傳播方式是通過性接觸及血液傳播[1-2]。而梅毒血清固定還可稱為血清抵抗，指的是梅毒患者進行規則治療6～9個月后滴度無明顯下降或2年后血清反應仍然沒有轉陰，目前沒有有效的治療方法，這給患者造成巨大的心理壓力。近年來研究發現，梅毒血清固定與機體的免疫系統有著較大的關系[3-4]。本研究通過檢測健康者、血清試驗轉陰以及血清固定患者的外周血趨化因子受體和IL-12、IL-10水平，觀察梅毒血清固定患者相對于健康者與轉陰患者各指標的變化，分析其對梅毒血清固定患者的影響。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年8月-2019年9月本院收治的38例梅毒血清固定患者為固定組，27例梅毒治療后非梅毒螺旋體抗原血清試驗轉陰患者為轉陰組，以及33例進行體檢健康者為健康對照組，本次研究患者均確診梅毒。梅毒血清固定納入標準：血清固定前已經經過驅梅治療未出現癥狀;快速血漿反應素環狀卡片實驗（RPR）持續陽性，早期持續時間≥1年，晚期持續時間≥2年。排除標準：神經梅毒;男性患者（因本院男性患者少，不便收集標本）;伴有其他免疫系統疾病、嚴重系統性疾病;感染其他性病等。本研究征得院醫學倫理委員會批準，研究對象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 外周血趨化因子受體檢測 FITC標記的CD4單抗以及相應同型對照抗體、PE標記的CCR3單抗、CCR5單抗及相應的同型對照PE-IgG、PE-IgG2A購于美國eBioscience公司;APC標記的CXCR4、CXCR3單抗以及其同型對照APC-IgG2A購于美國Abcam公司;流式細胞儀為美國BD公司產品。流式細胞儀雙標法檢測外周血CD4+ T細胞表面CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平的表達。采集三組研究對象空腹外周血5 mL，并即刻送檢。步驟如下：（1）分別取用5個離心管標記為A、B、C、D、E，其中A管作為陰性對照;（2）B管加入FITC-CD4單抗（0.5 μg）+PE-CCR3單抗（0.5 μg）;（3）C管加入FITC-CD4單抗（0.5 μg）+PE-CCR5單抗（0.5 μg）;（4）D管加入FITC-CD4單抗（0.5 μg）+APC-CXCR4單抗（0.5 μg）;（5）E管加入FITC-CD4單抗（0.5 μg）+APC-CXCR3單抗（0.5 μg）;（6）各管分別加入100 μL的新鮮抗凝全血，混勻，經過避光孵育、裂解、離心、棄上清液后，各管加入1%多聚甲醛溶液150 μL固定后，上機檢測。統計三組外周血CD4+T細胞CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3的表達率。

1.2.2 血清IL-12、IL-10水平檢測 使用雙抗體夾心ELISA法檢測三組血清IL-12、IL-10水平。步驟如下：（1）將標準品IL-12稀釋成800、400、200、100、50、25、0 pg/mL（標本用標本稀釋液1︰1稀釋）;（2）將不同濃度標準品及標本（50 μL/孔）分別加入抗人IL-12單抗包被的相應孔中，封板膠紙封住反應孔，放置在微量震蕩器上震蕩、37 ℃ 孵育60 min（洗滌液洗板3次并用吸水紙拍干）;（3）每孔加入80 μL的鏈霉親和素-HRP，膠紙封住反應孔，室溫震蕩、37 ℃孵育30 min（洗板3次）;（4）每孔同時加入底物A、B各50 μL，小心輕振蕩使其混勻，37 ℃溫育10 min（避免光照）;（5）當取出酶標板后，立即快速加入50 μL的終止液，之后應該馬上對其測定結果。在450 nm波長處測定各孔的OD值。以標準品的OD值，對其繪制標準曲線，依據標本的OD值在曲線上找出其濃度。

1.3 統計學處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，三組比較采用單因素方差分析，多重對比采用LSD-t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組一般資料比較 固定組38例，均為女性;年齡20～52歲，平均（31.89±7.12）歲;梅毒程度：Ⅰ期8例，Ⅱ期30例;梅毒血清反應素試驗滴度1︰1患者8例，1︰2患者13例，1︰4患者16例，1︰8患者1例。轉陰組27例，均為女性;年齡21～50歲，平均（32.36±6.47）歲。健康對照組33例，均為女性;年齡22～55歲，平均（33.12±6.23）歲。三組一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組外周血趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3表達率比較 固定組外周血CCR3表達比轉陰組與健康對照組高，而CCR5、CXCR3表達均低于轉陰組與健康對照組（P<0.05）;三組外周血CXCR4表達比較，差異無統計學意義（P>0.05）;轉陰組與對照組外周血細胞CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 三組IL-12、IL-10水平比較 固定組IL-10水平比轉陰組與健康對照組高（P<0.05），IL-12比轉陰組與健康對照組低，但差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.4 外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平對梅毒血清固定的診斷價值 ROC曲線分析顯示，外周血趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3以及IL-12、IL-10水平對梅毒血清固定的AUC依次為0.838、0.797、0.592、0.908、0.503、0.660，部分診斷準確性一定，見圖1、2和表3。

3 討論

梅毒是臨床中常見的一種性傳播疾病，近年來在我國的發病率大幅度升高。臨床中，一些梅毒患者在接受規范的驅梅治療后，檢驗外周血快速血漿反應素環狀卡片實驗（RPR），發現還是一直呈現出陽性，導致出現血清固定的病癥[5-6]。而今梅毒血清固定的現象已經非常普遍，占梅毒患者的較大一部分比例[7-8]。梅毒血清固定對患者來說危害是非常大的，相關研究指出，血清固定會造成患者的內臟器官、神經系統等受到不同程度的損傷，還會傳播給下一代，甚至會導致胎兒在圍生期死亡等危險情況出現[9-10]。許多研究已指出，梅毒血清固定與機體的細胞免疫功能有著密切的關系[11-13]。

趨化因子是一類在淋巴細胞募集中具有非常重要作用的蛋白質超家族，趨化因子受體則是一類介導趨化因子與G蛋白相偶聯的受體[14]，其表達是趨化因子發揮作用的一個比較關鍵的決定因素。趨化因子及其受體能夠精確的調節免疫系統的各種反應，在機體的生理病理過程中起著很重要的作用[15-16]。此次研究結果發現，固定組與轉陰組及健康對照組比較，外周血趨化因子受體CCR3水平顯著增高（P<0.05），而CCR5、CXCR3水平均顯著降低（P<0.05）;轉陰組外周血趨化因子受體與健康對照組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。表明機體的正常免疫功能對于梅毒血清反應素試驗轉陰來說，是一個比較重要的條件。機體免疫功能低下，會造成對梅毒螺旋體免疫應答異常，導致部分梅毒螺旋體避過機體的細胞免疫，不能及時清除所有的梅毒螺旋體，從而感染出現血清固定[17-18]。

正常情況下健康者身體中，血清細胞因子IL-12、IL-10是處于一個相對比較動態平衡的狀態，它們能對人體細胞免疫系統的穩定進行調節與維持。但當患者出現梅毒血清固定后，使得IL-12、IL-10水平發生變化，造成免疫系統的穩定性發生改變[19]。此次研究中，三組IL-10水平比較，差異有統計學意義（P<0.05），且梅毒血清固定組IL-10水平顯著高于轉陰組與健康對照組。此研究結果與關楊等[20]研究一致。而三組IL-12水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）。由此可見，梅毒血清固定使機體IL-10水平上升，進而抑制T細胞功能并阻礙Th1介導的細胞免疫應答，從而使得機體中的保護性清除TP的細胞免疫功能降低，從而導致免疫失去平衡。同時當梅毒患者接受正規驅梅治療后，機體內梅毒螺旋體得到清除，細胞免疫功能就能慢慢地恢復到正常水平。

本研究通過外周血趨化因子受體、IL-12、IL-10水平的ROC曲線，了解各指標對梅毒血清固定的診斷價值，結果顯示趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR3以及IL-10水平在梅毒患者機體中起著重要的作用。在臨床中對梅毒患者的治療，在原有的常規抗生素驅梅治療，還需要配合一些免疫調節劑來增強機體的免疫功能，降低梅毒血清固定的發生率。由于此次研究對象數量不多，研究結果可能會有一定的不足，故今后還有待進一步增加研究對象深入研究分析。

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（收稿日期：2020-01-08） （本文編輯：程旭然）