外周血裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)百日咳診斷價(jià)值的研究

伍金倩 ，黃道連 ，崔經(jīng)和 ，高瑞琳 ，童輝純 ，鄧?yán)x

（中山火炬開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院1.檢驗(yàn)科；2.兒科，廣東 中山 528437；3.南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛(ài)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 中山 528400）

百日咳是由百日咳桿菌引起的一種傳染性極強(qiáng)的呼吸道傳染病，其臨床表現(xiàn)可因年齡而有所不同[1]，典型的臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性痙攣性咳嗽，咳嗽終末伴有雞鳴樣、吸氣性吼聲[2]。 據(jù)相關(guān)報(bào)道，近年來(lái)我國(guó)百日咳發(fā)病率有上升趨勢(shì)[3]，局部地區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)流行，主要感染對(duì)象為 1 歲內(nèi)的嬰幼兒[4，5]，0～3月齡的嬰兒由于免疫功能差，易并發(fā)重癥肺炎、呼吸衰竭、肺實(shí)變和百日咳腦病等嚴(yán)重并發(fā)癥危及生命[6]。 目前百日咳的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段主要有血清學(xué)檢查、PCR 法和百日咳桿菌培養(yǎng)。 近年來(lái)相繼有學(xué)者在百日咳患兒外周血中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)缺乏、染色質(zhì)凝集、有裂隙的成熟小淋巴細(xì)胞-裂隙淋巴細(xì)胞[7，8]。Meng Qing-hong 等[9]在給小鼠注射百日咳毒素后，小鼠外周血涂片、骨髓及脾臟涂片中觀察到有裂隙淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生。 這就提示我們裂隙淋巴細(xì)胞有可能成為診斷百日咳的一個(gè)特異性指標(biāo)。 本文主要通過(guò)比較百日咳確診組與非百日咳組外周血裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果，同時(shí)聯(lián)合白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞比例等指標(biāo)，探討外周血涂片裂隙淋巴細(xì)胞對(duì)診斷百日咳的實(shí)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般臨床資料 收集2019 年1 月-2019 年10月在中山市中山火炬開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院和中山市博愛(ài)醫(yī)院就診的病例共89 例為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，其中符合百日咳診斷標(biāo)準(zhǔn)的患兒37 例設(shè)為實(shí)驗(yàn)組（男性23 例，女性 14 例；＜1 歲 32 例，＞1 歲 5 例），隨機(jī)選取的非百日咳患兒52 例設(shè)為對(duì)照組（男性38 例，女性14例；＜1 歲 39 例，＞1 歲 13 例）。

1.2 試劑與儀器 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)儀為邁瑞全自動(dòng)血液分析儀；試劑為邁瑞公司生產(chǎn)；外周血涂片染色液為珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢驗(yàn)方法

1.3.1 外周靜脈血檢測(cè) 抽取入選患兒靜脈血2ml于EDTA-K2 抗凝管中，白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)嚴(yán)格按照邁瑞血液分析儀操作說(shuō)明進(jìn)行測(cè)試;外周血涂片操作按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[10]，計(jì)算100 個(gè)成熟淋巴細(xì)胞中裂隙淋巴細(xì)胞所占比例。

1.3.2 百日咳桿菌核酸檢測(cè) 采用美國(guó)疾病預(yù)防控制中心推薦方法[11]采集患兒鼻咽拭子標(biāo)本，送廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 質(zhì)量與控制 兩家單位的血常規(guī)分類與計(jì)數(shù)結(jié)果均參加且通過(guò)衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)， 并每天執(zhí)行室內(nèi)質(zhì)控，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有可比性；外周血涂片裂隙淋巴細(xì)胞由固定人員進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.5 百日咳診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）2003[12]診斷標(biāo)準(zhǔn)，百日咳確診依據(jù)為：⑴沒(méi)有其他明顯原因的咳嗽≥2 周，并具有≥1 個(gè)下列癥狀：陣發(fā)性咳嗽，或吸氣性回聲，或咳嗽后嘔吐；⑵實(shí)驗(yàn)室分離出百日咳桿菌， 或PCR 方法檢測(cè)到核酸序列，或雙份血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理， 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料以百分率表示。 兩組間計(jì)量資料比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)，陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞比例差異 百日咳組裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、 白細(xì)胞數(shù)及淋巴細(xì)胞比例的均數(shù)分別為 6.27±0.70 %、27.90±2.65×109/L 和 71.35±2.03%，均高于非百日咳組 2.81±0.23 %、11.81±0.73×109/L和65.42±1.84%，根據(jù)Mann-Whitney U 檢驗(yàn)分析，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 見(jiàn)表1。

表1 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)及淋巴細(xì)胞比例的均值比較

2.2 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率差異 若設(shè)裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4%為檢出陽(yáng)性，則在37 例百日咳確診病例中陽(yáng)性例數(shù)為22 例，陽(yáng)性率為59.5%，明顯高于非百日咳5.8%，陽(yáng)性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.851，P＜0.05）。 見(jiàn)表2。

表2 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率差異比較

2.3 裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)單獨(dú)以及聯(lián)合白細(xì)胞數(shù)與淋巴細(xì)胞比例對(duì)百日咳的診斷效能 ROC 曲線分析結(jié)果顯示， 裂隙淋巴細(xì)胞數(shù)這一指標(biāo)對(duì)診斷百日咳有較高的準(zhǔn)確性。 若裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)取4%為臨界點(diǎn)，曲線下面積(AUC)最大，值為0.781，對(duì)應(yīng)的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為0.595、0.942、0.880 和 0.766。 若把裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（≥4%）、白細(xì)胞數(shù)(≥19.5×109/L)及淋巴細(xì)胞比例（≥66.5 %）三項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合診斷，則AUC為0.878，對(duì)應(yīng)的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為 0.784、0.904、0.853、0.855，準(zhǔn)確性優(yōu)于裂隙淋巴細(xì)胞數(shù)單一指標(biāo)以及白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞比例聯(lián)合指標(biāo)。 見(jiàn)圖1、表3。

3 討論

圖1 裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)單獨(dú)以及聯(lián)合白細(xì)胞數(shù)與淋巴細(xì)胞比例診斷百日咳的ROC 曲線

表3 各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)或者聯(lián)合對(duì)百日咳的診斷效能

有文獻(xiàn)指出，百日咳早期發(fā)病時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著升高，痙攣咳嗽期升高最多，以淋巴細(xì)胞為主[13]。在本實(shí)驗(yàn)中，百日咳患兒的白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞比例明顯升高，均高于非百日咳患兒，與王琨[14]的研究相一致，也與此文獻(xiàn)描述相符。

另有研究發(fā)現(xiàn)，裂隙淋巴細(xì)胞不僅存在于百日咳感染患者，也存在于淋巴瘤患者[15]。 本次實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)，在某些非百日咳患兒外周血涂片中也可見(jiàn)少量裂隙淋巴細(xì)胞，這說(shuō)明裂隙淋巴細(xì)胞并不為百日咳患者所特有。 但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)顯示，百日咳組的裂隙淋巴細(xì)胞平均值明顯多于非百日咳組。 若設(shè)裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4%為檢出陽(yáng)性， 百日咳組的陽(yáng)性率也明顯高于非百日咳組。 因此，盡管裂隙淋巴細(xì)胞不能作為百日咳的特異性指標(biāo)，但仍有重要意義，臨床上也常以細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果聯(lián)合血液指標(biāo)，為疾病的診斷和鑒別診斷提供線索[16]。

為了解裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)單一指標(biāo)和聯(lián)合指標(biāo)對(duì)百日咳的診斷效能， 本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了ROC 曲線分析，根據(jù)結(jié)果顯示，當(dāng)裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)取4%為臨界點(diǎn)時(shí)，診斷百日咳的準(zhǔn)確性最高，其診斷靈敏度、特異度分別為0.595 和0.942。若把裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、 白細(xì)胞數(shù)及淋巴細(xì)胞比例三項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合診斷，則準(zhǔn)確性優(yōu)于裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)單一指標(biāo)以及白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞比例聯(lián)合指標(biāo)。 故臨床在診斷百日咳時(shí)，根據(jù)患者臨床癥狀，同時(shí)結(jié)合裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)以及白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞比例，會(huì)更加準(zhǔn)確可靠。

百日咳患兒的臨床癥狀常常不典型，容易漏診[17]。傳統(tǒng)的培養(yǎng)周期長(zhǎng)，陽(yáng)性率低；PCR 方法技術(shù)要求嚴(yán)格，成本高；血清學(xué)檢測(cè)方法存在疫苗接種和感染均可出現(xiàn)陽(yáng)性導(dǎo)致結(jié)果難以區(qū)分;而外周血裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)所需設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)易快速，可成為臨床診斷百日咳的輔助指標(biāo)，但要求技術(shù)人員熟練掌握細(xì)胞形態(tài)學(xué)，且對(duì)于裂隙淋巴細(xì)胞的診斷百分比，也還需要大量的實(shí)驗(yàn)來(lái)研究和驗(yàn)證。

綜上所述，裂隙淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于百日咳的診斷具有較高的靈敏度和特異性，可為臨床診斷百日咳提供線索，減少臨床對(duì)百日咳的漏診率。 該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行，值得在基層醫(yī)院推廣。