異丙酚抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制

李繼峰

（鶴壁市人民醫(yī)院麻醉科，河南 鶴壁 458030）

心肌成纖維細(xì)胞（cardiac fibroblasts，CF）占心肌組織細(xì)胞中的60～70%，對(duì)維持心臟正常的生理功能方面起著重要的作用[1-3]。 心肌纖維化是多種心血管疾病的病理表現(xiàn)，如心力衰竭、冠心病、高血壓等，是導(dǎo)致心室重塑的主要因素[4，5]。 當(dāng)心肌受到各種致病因素刺激后，會(huì)導(dǎo)致膠原合成增加并沉積，并最終發(fā)生心肌纖維化[6]。心肌膠原纖維主要包括Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白，當(dāng)心肌成纖維細(xì)胞增殖時(shí)，會(huì)伴有膠原蛋白的過度沉積，這是導(dǎo)致心肌纖維化的主要原因[7]。 研究證實(shí)，血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ)是可導(dǎo)致心肌纖維化的主要因素，并會(huì)引起心肌成纖維細(xì)胞的增殖及膠原沉積，從而導(dǎo)致心肌纖維化[8]。 異丙酚是臨床常用的麻醉誘導(dǎo)藥物，并證實(shí)其具有抑制心肌收縮力、清除氧自由基以及保護(hù)心臟缺血等作用[9，10]。 但是，異丙酚對(duì) AngⅡ誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響及作用機(jī)制，目前還不清楚。 因此，本研究通過采用Ang Ⅱ建立誘導(dǎo)新生大鼠CFb 纖維化模型，探討異丙酚抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制，為異丙酚應(yīng)用于冠心病心室重構(gòu)、心肌纖維化的預(yù)防及治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑 實(shí)驗(yàn)材料： 選取新生1～3d的Wistar 大鼠，取其心肌成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)及分離純化，并保存與本實(shí)驗(yàn)室。 DMEM 培養(yǎng)基、胰蛋白酶和胎牛血清購自于美國Gibco 公司；二甲基亞砜（DMSO）和噻唑藍(lán)（MTT）購自于美國Sigma公司；Ⅰ、Ⅲ型膠原的ELISA 檢測(cè)試劑盒購自于欣博盛生物科技有限公司；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒及ECL 發(fā)光試劑盒購自碧云天生物科技有限公司；TGF-β1 抗體、ERK1/2 抗體、cPKCα 抗體和 βactin 抗體均購自abcom 公司； 其余為國產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 心肌成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定 選取新生1～3 d 的Wistar 大鼠，提取其心肌成纖維細(xì)胞并進(jìn)行分離純化。 Wistar 大鼠水合氯醛麻醉后處死，隨后75%乙醇浸泡消毒，與超凈臺(tái)取心臟，無菌PB S 沖洗。 隨后在大皿中取部分心肌，將取出的心肌于中皿中剪碎并轉(zhuǎn)移至5ml 滅菌EP 管中， 加入4ml 的胰蛋白酶：I 型膠原酶比例為2：1 的混合液。水浴鍋中37 度消化10 分鐘， 隨后靜置2 分鐘，隨后提取上清液，再向其中加入等量的含血清DMEM培養(yǎng)基中和混合酶液的消化，900r/min 離心10min，重復(fù)操作3 次。 隨后向各離心管中加入1ml 含血清的DMEM 培養(yǎng)基，輕輕吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，在培養(yǎng)箱中放置2h 后，換液貼壁的細(xì)胞即為心肌成纖維細(xì)胞。 繼續(xù)培養(yǎng)3～4 代用于實(shí)驗(yàn)。

心肌成纖維細(xì)胞Vimentin 免疫熒光染色。 ⑴玻片準(zhǔn)備：75%酒精浸泡蓋玻片約24 小時(shí)，隨后將蓋玻片與酒精燈上烘烤轉(zhuǎn)移至無菌六孔板中。 ⑵細(xì)胞鋪板：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的成纖維細(xì)胞，胰酶消化后離心計(jì)數(shù)， 后將細(xì)胞以8*10^5 密度鋪至上述六孔板中。 隨后十字法將細(xì)胞搖勻。 ⑶固定：待細(xì)胞長(zhǎng)至70%匯合率時(shí)，棄掉六孔板上清液，并用PBS沖洗2～3 遍。 隨后加入4%多聚甲醛室溫固定15分鐘。⑷打孔:棄掉多聚甲醛。隨后加入0.5%Triton 1ml， 搖床室溫孵育 15 分鐘。 ⑸封閉: 棄掉 0.5%Triton，PBS 沖洗三遍，隨后沒孔加入 1%BSA，室溫孵育 2 小時(shí)。 ⑹一抗孵育：用 BSA 按 1:1000 比例配制Vimentin，β-actin 混合抗體。隨后每個(gè)蓋玻片加100 微混合抗體。4 度過夜孵育。⑺二抗孵育：用BSA 按1:1000 比例配制相應(yīng)種屬來源的混合抗體。室溫避光孵育2h。⑻封片：載玻片滴甘油，隨后將載玻片倒扣在載玻片上，凡士林周圍涂抹密封，室溫避光自然風(fēng)干后，熒光顯微鏡拍照。

1.2.2 MTT 法測(cè)定不同濃度的異丙酚對(duì)各組細(xì)胞增殖抑制率 分別選取含有1×10-6mol/L Ang Ⅱ的異丙酚（0、25、50、100 和 200μmol/L）作用于心肌成纖維細(xì)胞24h。 采用MTT 法測(cè)定不同濃度的異丙酚對(duì)各組細(xì)胞的增殖抑制率。 取1×105/mL 處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的心肌成纖維細(xì)胞，接種于96 孔板。在37 ℃下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后，使用不同濃度的異丙酚（含有1×10-6mol/L Ang Ⅱ）繼續(xù)培養(yǎng)24h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入 20μL 的 MTT 溶液繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出96 孔板，吸棄培養(yǎng)液，每孔加入150 μL 的 DMSO 反應(yīng) 10min。 使用酶標(biāo)儀在 570nm 處測(cè)定吸光度值。細(xì)胞增殖抑制率（%）=（1-試驗(yàn)組平均 OD 值/對(duì)照組平均 OD 值）×100%。

1.2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期變化 根據(jù)MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取異丙酚作用于心肌成纖維細(xì)胞的最佳抑制濃度。 將細(xì)胞分為3 組： 正常對(duì)照（Control）組、Ang Ⅱ 組和異丙酚（Propofol）處理組。取1×105/mL 處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的心肌成纖維細(xì)胞，接種于6 孔板。 在 37 ℃下的 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。 Ang Ⅱ組：含 1×10-6mol/L Ang Ⅱ的 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞 24h。 異丙酚組：使用 100μmol/L 的異丙酚(含有 1×10-6mol/L Ang Ⅱ)培養(yǎng)細(xì)胞 24h。 將上述各組細(xì)胞進(jìn)行消化離心， 加入10μl PI 充分混勻，室溫避光孵育10min 后，經(jīng)流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞的周期變化。

1.2.4 ELISA 法測(cè)定各組細(xì)胞中Ⅰ、Ⅲ型膠原含量細(xì)胞培養(yǎng)如1.2.3 中所述，當(dāng)培養(yǎng)結(jié)束后，將各組細(xì)胞進(jìn)行勻漿后離心， 吸取上清液待測(cè)。 采用ELISA 試劑盒法測(cè)定各組細(xì)胞中炎癥因子 Ⅰ、Ⅲ型膠原含量， 操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.5 蛋白免疫印跡（Western Blot）法 細(xì)胞分組及培養(yǎng)方法如1.2.3 中所述，將各組細(xì)胞分別收集到新的1.5mL EP 管中，加入一定體積的蛋白裂解液對(duì)組織進(jìn)行充分研磨，于冰上裂解30min 后，在4℃下、12000×g 離心 10min， 吸取上清液， 并使用BCA 蛋白濃度試劑盒對(duì)其進(jìn)行蛋白定量。選取5%的濃縮膠和10%的分離膠，取20μl 蛋白樣品進(jìn)行上樣，電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上。使用10%的脫脂乳粉溶液進(jìn)行封閉2h 后，一抗(1: 1000)4℃孵育過夜。使用TBST 洗膜三次，每次15min，二抗（1:4000）室溫孵育 2h，用 TBST 洗膜三次。 使用化學(xué)發(fā)光法對(duì)蛋白進(jìn)行顯色。

由于TGF-β1 屬于分泌性蛋白，細(xì)胞按上述鋪板后， 本實(shí)驗(yàn)采用TCA 法對(duì)培養(yǎng)基中蛋白進(jìn)行濃縮。 ⑴向蛋白質(zhì)樣品中加入等體積的20%TCA（三氯乙酸）。⑵在冰上孵育30 分鐘。⑶在4 度離心機(jī)中離心15 分鐘，2000rpm/min。 ⑷小心取出所有上清液。 ⑸加入～300μl 冷丙酮，4 度離心 5 分鐘。2000rpm/min。⑹去除上清液和干燥顆粒。⑺將樣品重懸于所需的緩沖液中。

1.2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)法 細(xì)胞分組及培養(yǎng)方法如1.2.3 中所述，將培養(yǎng)在6 孔板中的細(xì)胞爬片取出，棄去培養(yǎng)液。 經(jīng)PBS 洗滌后，使用4%多聚甲醛進(jìn)行固定。并使用山羊血清進(jìn)行封閉，采用p ERK1/2一抗工作液室溫孵育3h。孵育結(jié)束后，采用二抗工作液室溫孵育15min。顯色后，經(jīng)蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。 在熒光顯微鏡下觀察并分析。 同時(shí)膠原蛋白及cPKCα 免疫組化參考此方法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件(美國 IBM 公司)；計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，組間比較采用 χ2分析；P＜0.05 代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 心肌成纖維細(xì)胞的鑒定

圖1 心肌成纖維細(xì)胞Vimentin 免疫熒光鑒定

如圖1 所示，心肌成纖維細(xì)胞免疫熒光顯示。大鼠心肌組織提取的成纖維細(xì)胞陽性率達(dá)95%，符合后續(xù)試驗(yàn)應(yīng)用條件。

2.2 MTT 法測(cè)定不同濃度的異丙酚對(duì)各組細(xì)胞增殖抑制率 我們通過運(yùn)用100uM 、200 uM、500uM、1mM 濃度的異丙醇， 測(cè)不同濃度對(duì)成纖維細(xì)胞的影響。 通過實(shí)驗(yàn)我們可以發(fā)現(xiàn)100 uM 為本實(shí)驗(yàn)最佳濃度， 其他濃度不可避免了引起了成纖維細(xì)胞的藥物毒性。 隨后再次濃度下，如圖B.所示，實(shí)驗(yàn)表明異丙醇逆轉(zhuǎn)了AngⅡ?qū)τ诔衫w維細(xì)胞的增殖性效應(yīng)。 見圖2A.。

2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期變化 與正常對(duì)照組相比，Ang Ⅱ組細(xì)胞G0/G1 期細(xì)胞百分率降低 （P＜0.01），S 期和 G2/M 期細(xì)胞百分率升高 （P＜0.01）;而異丙酚處理組細(xì)胞的G0/G1期細(xì)胞百分率高于 Ang Ⅱ組 （P＜0.01），S 期和 G2/M 期細(xì)胞百分率低于 Ang Ⅱ組（P＜0.01），說明異丙酚處理后可阻滯心肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期。 見圖3。

圖2 CCK8 篩選異丙酚藥物劑量以及應(yīng)用異丙酚對(duì)Ang 誘導(dǎo)后的增殖性效應(yīng)

圖3 各組細(xì)胞周期變化

表1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期變化（±s）

表1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期變化（±s）

注：與 Control 組相比，**P＜0.01，與 Ang Ⅱ組相比，##P＜0.01

組別 G0/G1 Control 組Ang Ⅱ組異丙酚組S G2/M 71.74±2.19 62.44±2.69**72.18±2.37##15.73±1.13 21.87±1.26**14.24±0.89##14.79±2.69 18.85±1.13**15.14±0.97##

2.3 ELISA 法測(cè)定各組細(xì)胞中Ⅰ、 Ⅲ型膠原含量與正常對(duì)照組相比，Ang Ⅱ 組大鼠的心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原含量增加（P＜0.01）；而異丙酚處理組大鼠的心肌成纖維細(xì)胞 Ⅰ、Ⅲ型膠原含量低于 Ang Ⅱ組（P＜0.01），說明異丙酚處理后會(huì)緩解Ang Ⅱ誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞的心肌膠原沉積。同時(shí)圖4 免疫組化顯示異丙酚逆轉(zhuǎn)了Ang Ⅱ誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞的心肌膠原沉積。 見表2。

2.4 Western Blot 法測(cè)定各組細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量 與正常對(duì)照組相比，Ang Ⅱ組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中 TGF-β1 的蛋白表達(dá)量升高 （P＜0.01）， 而異丙酚處理組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量低于 Ang Ⅱ 組 （P＜0.01），說明異丙酚的處理可抑制大鼠心肌成纖維細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)，緩解了成纖維細(xì)胞纖維化的程度。 見圖5、表3。

表2 ELISA 法測(cè)定各組細(xì)胞中Ⅰ、Ⅲ型膠原含量（±s）

注：與 Control 組相比，**P＜0.01，與 Ang Ⅱ組相比，##P＜0.01

組別 Ⅰ型膠原（ng/mL）Control 組Ang Ⅱ組異丙酚組12.18±0.05 37.74±0.11**23.32±0.07##Ⅲ型膠原（ng/mL）14.15±0.03 49.57±0.09**27.23±0.03##

圖5 Western Blot 法測(cè)定各組細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量

表3 Western Blot 法測(cè)定各組細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量(±s)

表3 Western Blot 法測(cè)定各組細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量(±s)

注：與 Control 組相比，**P＜0.01，與 Ang Ⅱ組相比，##P＜0.01

組別 TGF-β1/β-actin Control 組Ang Ⅱ組異丙酚組0.18±0.06 1.24±0.12**0.52±0.11##

2.5 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中ERK1/2 蛋白表達(dá) 與正常對(duì)照組相比，Ang Ⅱ組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中 ERK1/2 的陽性表達(dá)增加（P＜0.01）；而異丙酚處理組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中ERK1/2 的陽性表達(dá)低于Ang Ⅱ 組， 這與Western Blot 實(shí)驗(yàn)相一致。 說明異丙酚抑制大鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖與下調(diào)ERK1/2 的表達(dá)相關(guān)。 見圖6、圖7、表4。

圖6 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中ERK1/2 蛋白表達(dá)

2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中cPKCα 蛋白表達(dá) 與正常對(duì)照組相比，Ang Ⅱ組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中 cPKCα 的陽性表達(dá)增加（P＜0.01）；而異丙酚處理組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中cPKCα 的陽性表達(dá)低于Ang Ⅱ 組， 這與Western Blot 實(shí)驗(yàn)相一致。 說明異丙酚抑制大鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖與下調(diào) cPKCα 的表達(dá)相關(guān)。 見圖8、圖9、表5。

圖7 Western Blot 測(cè)定各組細(xì)胞中ERK1/2 及P-ERK1/2 蛋白表達(dá)

表4 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中ERK1/2 蛋白表達(dá)（±s）

表4 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中ERK1/2 蛋白表達(dá)（±s）

注：與 Control 組相比，**P＜0.01，與 Ang Ⅱ 組相比，##P＜0.01

組別 灰度值Control 組Ang Ⅱ組異丙酚組112.16±7.03 135.76±8.14**119.34±7.46##

圖8 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中cPKCα 蛋白表達(dá)

圖9 Western Blot 測(cè)定各組細(xì)胞中cPKCα 蛋白表達(dá)

表5 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中cPKCα 蛋白表達(dá)（±s）

表5 免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定各組細(xì)胞中cPKCα 蛋白表達(dá)（±s）

注：與 Control 組相比，**P＜0.01，與 Ang Ⅱ 組相比，##P＜0.01

組別 灰度值Control 組Ang Ⅱ組異丙酚組104.13±6.64 147.62±7.14**123.52±6.37##

3 討論

心臟主要由成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞組成， 其中大部分是成纖維細(xì)胞[11]。心肌成纖維細(xì)胞的過度增殖以及膠原沉積是導(dǎo)致心肌纖維化的主要原因[12]。 研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）是促心肌纖維化的主要因子，可將心肌纖維細(xì)胞誘導(dǎo)為纖維化模型[13]。 異丙酚是常用的麻醉誘導(dǎo)藥物，因其對(duì)心臟的保護(hù)作用而廣泛受到關(guān)注[14]。 在本研究中，通過AngⅡ誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞，研究異丙酚抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制。 本研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的異丙酚對(duì)Ang Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖均具有一定的抑制作用， 并且100μmol/L 的異丙酚的抑制效果最明顯， 因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取100μmol/L 的異丙酚作用于Ang Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞。 同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)，Ang Ⅱ組的細(xì)胞G0/G1 期細(xì)胞百分率降低，S 期和G2/M 期細(xì)胞百分率升高，說明Ang Ⅱ可以促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞的增殖；而異丙酚處理組細(xì)胞的G0/G1 期細(xì)胞百分率高于 Ang Ⅱ組，S 期和 G2/M 期細(xì)胞百分率低于Ang Ⅱ組，說明異丙酚處理后可阻滯心肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期，抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞的增殖。

Ang Ⅱ不僅可以促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞的增殖，還可促進(jìn)其分泌Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維，從而導(dǎo)致心肌纖維化[15]。 因此，心肌成纖維細(xì)胞中膠原沉積是導(dǎo)致心肌纖維化的主要因素之一[16]。在本研究中發(fā)現(xiàn)，Ang Ⅱ組大鼠的心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ 型膠原含量均增加，說明Ang Ⅱ?qū)е铝诵募〕衫w維細(xì)胞中的膠原沉積，與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相一致。 而異丙酚處理組大鼠的心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原含量均低于Ang Ⅱ組， 說明異丙酚處理后會(huì)緩解AngⅡ誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞的心肌膠原沉積。

TGF-β1 是促進(jìn)細(xì)胞纖維化的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子，研究發(fā)現(xiàn)AngⅡ 可通過激活心肌成纖維細(xì)胞MAPK 蛋白， 從而增加 TGF-β1 的表達(dá)量， 因此，TGF-β1 的過度表達(dá)是心肌纖維化的重要標(biāo)志之一[17，18]。本研究發(fā)現(xiàn)，Ang Ⅱ組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量升高，說明Ang Ⅱ使心肌成纖維細(xì)胞中的TGF-β1 過度表達(dá)。而異丙酚處理組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)量低于Ang Ⅱ組， 說明異丙酚的處理可抑制大鼠心肌成纖維細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)，緩解了成纖維細(xì)胞纖維化的程度。

當(dāng)Ang Ⅱ作用于心肌成纖維細(xì)胞后，會(huì)活化細(xì)胞中甘油二酯結(jié)合激活蛋白激酶C（PKC）和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2），從而加速蛋白和生長(zhǎng)因子的合成與分泌，促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞的增殖和纖維化[19-21]。 在本研究中發(fā)現(xiàn)，Ang Ⅱ 組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中ERK1/2 和cPKCα 的陽性表達(dá)均增加， 說明Ang Ⅱ 通過激活 ERK1/2 和cPKCα蛋白，促進(jìn)心肌纖維細(xì)胞的增殖；而異丙酚處理組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中ERK1/2 和cPKCα 的陽性表達(dá)均低于Ang Ⅱ組，說明異丙酚抑制大鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖與下調(diào)ERK1/2 和cPKCα 的表達(dá)相關(guān)。

綜上所述，異丙酚能夠抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞的增殖和Ⅰ、 Ⅲ型膠原含量的增加，推測(cè)其可能的作用機(jī)制與其降低細(xì)胞中TGF-β1 的蛋白表達(dá)及抑制 ERK1/2、cPKCα 通路有關(guān)。