顯色培養(yǎng)基篩查無(wú)乳鏈球菌及藥物敏感性分析

耿伏生，蘇麗霞，馮寶芹

（安陽(yáng)市燈塔醫(yī)院1.檢驗(yàn)科；2.醫(yī)務(wù)科，河南 安陽(yáng) 455000）

近些年來(lái)，隨著醫(yī)療技術(shù)水平的提高，孕產(chǎn)婦越來(lái)越重視分娩質(zhì)量和安全，按照美國(guó)CDC《圍產(chǎn)期B 族鏈球菌感染篩查及防治指南(2010)》的推薦，對(duì)于每個(gè)即將分娩的孕產(chǎn)婦都應(yīng)進(jìn)行無(wú)乳鏈球菌篩查，防范可能存在的風(fēng)險(xiǎn)，減少對(duì)孕產(chǎn)婦和新生兒的危害。 對(duì)于無(wú)乳鏈球菌的篩查，實(shí)驗(yàn)室常用的方法有顯色培養(yǎng)基法、普通培養(yǎng)法、免疫層析法、PCR 法[1]等，陽(yáng)性檢出率各有差異，各地報(bào)道也有不同。 由于細(xì)菌培養(yǎng)為診斷感染性疾病的 “金標(biāo)準(zhǔn)”，故本實(shí)驗(yàn)室著重研究顯色培養(yǎng)基法與普通培養(yǎng)法的無(wú)乳鏈球菌陽(yáng)性檢出率情況。

無(wú)乳鏈球菌為觸酶陰性的革蘭陽(yáng)性球菌，顯微鏡觀察成對(duì)或鏈狀排列，Lancefield 血清分型為B 群，所以又稱 B 族鏈球菌[2]（GBS），接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，置于5～10%CO2條件下35℃培養(yǎng)24～48h 可有狹窄的 β 溶血環(huán)，1887 年被報(bào)道第一次獲得分離[3]，健康人群攜帶率為 15%～35%[4]，可定植于妊娠期婦女的泌尿道、腸道和生殖道[5]，易導(dǎo)致產(chǎn)婦感染或通過(guò)垂直傳播感染新生兒，引起新生兒敗血癥。

本研究旨在找出一種篩查陽(yáng)性檢出率高的方法，并對(duì)陽(yáng)性菌株進(jìn)行抗生素藥物敏感性試驗(yàn)，從而為臨床醫(yī)生提供可靠的治療依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2017 年1 月至2018 年1 月我院婦產(chǎn)科收治的行產(chǎn)前檢查的孕晚期孕婦，年齡在20～35 歲，隨機(jī)抽出1100 例作為研究對(duì)象。

1.2 篩查標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心《圍產(chǎn)期B 族鏈球菌感染篩查及防治指南(2010)》有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩查，以顯色培養(yǎng)基法作為試驗(yàn)組，以普通培養(yǎng)法作為對(duì)照組進(jìn)行比較。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 嚴(yán)重的肝、腎、肺功能不全；合并凝血功能障礙以及其他血液性疾病；合并惡性腫瘤；合并言語(yǔ)及意識(shí)障礙。

1.4 實(shí)驗(yàn)室檢查

1.4.1 方法 對(duì)送檢標(biāo)本均采用顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)法和普通培養(yǎng)法，5～10%CO2條件下 35℃培養(yǎng) 24～48h。

1.4.2 試劑 無(wú)乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基和哥倫比亞血平板均由鄭州安圖綠科生物有限公司提供。

1.4.3 藥敏試驗(yàn) 參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）制定的標(biāo)準(zhǔn)，使用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)； 質(zhì)控菌株和藥敏紙片由杭州天和生物有限公司提供。

1.4.4 樣本要求 孕35～37 周時(shí)從陰道下1/3 部取拭子或肛門取拭子標(biāo)本， 置于增菌培養(yǎng)基內(nèi)立即送檢培養(yǎng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)組與對(duì)照組比較采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與試驗(yàn)組篩查情況比較 于孕35～37周時(shí)采集陰拭子或肛拭子立即送檢，經(jīng)微生物實(shí)驗(yàn)室在嚴(yán)格質(zhì)量控制下接種于無(wú)乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基（試驗(yàn)組）和哥倫比亞血瓊脂平板（對(duì)照組）上，經(jīng)48h 培養(yǎng)觀察結(jié)果，對(duì)于可疑陽(yáng)性菌株進(jìn)一步鑒定確證。在1100 例研究對(duì)象中，試驗(yàn)組與對(duì)照組陽(yáng)性檢出率分別為 8.91%（98 株）和 5.91%（65 株），兩者相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明采用顯色培養(yǎng)基法篩查無(wú)乳鏈球菌陽(yáng)性檢出率明顯高于普通培養(yǎng)法。

2.2 陽(yáng)性菌株藥敏結(jié)果分析 將無(wú)乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)陽(yáng)性的98 株陽(yáng)性菌株轉(zhuǎn)種到哥倫比亞血瓊脂平板上繼續(xù)培養(yǎng)， 并采用K-B 法進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，研究表明陽(yáng)性菌株對(duì)青霉素、頭孢噻肟、萬(wàn)古霉素、美羅培南、替考拉寧的敏感率為100.00%，對(duì)苯唑西林的敏感率為91.00%，對(duì)左氧氟沙星、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素的耐藥率分別為 31.70%、56.00%、61.70%、85.90%， 對(duì)甲氧芐啶/磺胺甲唑的耐藥率為100.00%，見(jiàn)表1。

表1 98 株無(wú)乳鏈球菌藥物敏感試驗(yàn)

3 討論

目前來(lái)看，國(guó)內(nèi)大多實(shí)驗(yàn)室普遍采用細(xì)菌培養(yǎng)法用來(lái)篩查孕晚期無(wú)乳鏈球菌的感染情況，但普通細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率極低，容易出現(xiàn)假陰性，給臨床提供不可靠的參考依據(jù)，造成大量的漏診。 而無(wú)乳鏈球菌顯色培養(yǎng)基中添加了人工合成的特異性酶底物，經(jīng)無(wú)乳鏈球菌的酶解作用釋放出顯色原而顯色，無(wú)乳鏈球菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落為紅色或紫紅色，并且該培養(yǎng)基也具有一定抑制其他雜菌生長(zhǎng)的作用，使無(wú)乳鏈球菌菌落能夠在平板上更好地生長(zhǎng)，易于辨認(rèn)及分離。 本研究通過(guò)采用顯色培養(yǎng)基法與普通培養(yǎng)法相比較，發(fā)現(xiàn)顯色培養(yǎng)基法陽(yáng)性檢出率明顯高于普通培養(yǎng)法（P＜0.05），這可能由于顯色培養(yǎng)基相對(duì)于普通培養(yǎng)基具有結(jié)果直觀，且靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，便于實(shí)驗(yàn)室分離病原菌，從而提高了檢出率。

無(wú)乳鏈球菌屬于條件致病菌[6]，可定植男性和女性生殖道、腸道和尿道，可經(jīng)性傳播。 成人中無(wú)乳鏈球菌感染少見(jiàn)，以產(chǎn)婦為主，少數(shù)情況下亦可為免疫功能低下者，如糖尿病、慢性肝功能不全、HIV 感染、惡性腫瘤、接受免疫抑制劑治療等患者。無(wú)乳鏈球菌感染在圍產(chǎn)期感染中占有重要的位置[7]，當(dāng)機(jī)體微生態(tài)平衡被破壞、內(nèi)環(huán)境紊亂情況下，可發(fā)生 GBS 機(jī)會(huì)感染[8]。 可以導(dǎo)致產(chǎn)婦發(fā)生胎膜早破、絨毛膜炎、子宮內(nèi)膜炎、泌尿系感染、敗血癥。還可導(dǎo)致孕晚期流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎，還可傳播給新生兒導(dǎo)致敗血癥[9]，是新生兒敗血癥死亡的主要原因[10]。 嚴(yán)重影響孕婦和胎兒的生命健康。 無(wú)乳鏈球菌引起的產(chǎn)褥感染大多呈單一細(xì)菌感染，癥狀出現(xiàn)早，高熱、心動(dòng)過(guò)速等。無(wú)乳鏈球菌也是引起孕婦菌血癥和傷口感染的主要致病菌，還可發(fā)生鏈球菌性肺炎、腦膜炎、肝膿腫和敗血癥等，死亡率較高，有報(bào)道其死亡率可達(dá)29%～52%。 本研究通過(guò)分析陽(yáng)性菌株的藥物敏感性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌對(duì)青霉素、頭孢噻肟、萬(wàn)古霉素、美羅培南、替考拉寧高度敏感，對(duì)四環(huán)素、紅霉素、克林霉素耐藥，對(duì)甲氧芐啶/磺胺甲唑高度耐藥這與《指南》基本一致。 由于導(dǎo)致無(wú)乳鏈球菌感染的具體機(jī)制尚未明確[11]，為了減少無(wú)乳鏈球菌感染對(duì)孕產(chǎn)婦和胎兒造成嚴(yán)重的危害[12]，建議臨床醫(yī)師引起重視，把握時(shí)機(jī)，盡早篩查無(wú)乳鏈球菌，并根據(jù)抗生素藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，合理使用抗菌藥物。