ZEB2、SOX2 蛋白與乳腺癌發生發展的關系

魏婭，閆文鋒

（1.安陽市腫瘤醫院普外科，河南 安陽 455000；2.河南省人民醫院普外科，河南 鄭州 450003）

部分地區的流行病學研究表明，乳腺癌的發病率可超過596/10 萬人以上[1]，在部分高危地區或者高危人群中，乳腺癌的病死率和致殘率可進一步的上升[2]。 乳腺癌的發生，能夠導致患者無瘤生存時間的顯著下降， 促進患者近期病情進展速度的加快。 臨床上在探討乳腺癌患者病情發生機理的過程中，發現細胞因子或者腫瘤相關蛋白的改變，能夠在乳腺癌的整體性病情進展過程中發揮作用。 E盒結合鋅指蛋白2（ZEB2）是轉錄調控相關因子，其能夠通過提高癌基因上游轉錄啟動子的激活程度，進而促進乳腺癌細胞的持續性自我增殖[3]；性別決定相關基因簇2（SOX2）是干細胞調控相關因子，其能夠通過提高癌細胞的干細胞特性，增強癌細胞的核DNA 擴增的速度，進而促進乳腺癌的病情進展[4]。 為了揭示 ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者的病情關系，從而為乳腺癌患者的診療及臨床預后評估提供參考， 本次研究選取于2015 年3 月至2018 年3 月病理科收集90 例乳腺癌標本，探討了ZEB2、SOX2 的表達及其與乳腺癌患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取病理科收集90 例乳腺癌標本（2015 年 3 月至 2018 年 3 月）、90 例乳腺良性腫瘤切除組織標本。乳腺癌，年齡 28～58 歲，平均 47.6±7.2 歲，乳腺癌組織學分級：Ⅰ級20 例、Ⅱ級45 例、Ⅲ級 25 期；TNM 分期：Ⅰ期 22 例、Ⅱ期 34 例、Ⅲ期 28 例、Ⅳ期6 例；淋巴結轉移39 例；病灶直徑≥3cm49 例。良性組，年齡 26～59 歲，平均 45.2±10.5 歲，乳腺纖維瘤 36 例、乳腺腺病 45 例、其他 9 例。 兩組患者的年齡差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準： ⑴乳腺癌的診斷標準參考中華醫學會制定的相關標準[5]；⑵經乳腺彩超、X 線鉬靶初步診斷，經乳腺穿刺病檢或術后病理學檢查證實；⑶患者的術后病理學標本及患者的個人資料保存良好;⑷在獲取患者的病理學標本前患者無放化療病史、免疫學治療史。

排除標準：⑴病理學資料缺失；⑵合并其他部位的原發性腫瘤；⑶免疫功能疾病；⑷合并其他系統的重大疾病的患者。

1.2 檢測方法及評分方法 石蠟切片采用二甲苯進行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5min，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，5%的山羊血清抗體封閉10min，不沖洗，滴加一抗(購自 abcum 公司批號：20119304 濃度:1:500)，4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，滴加生物素標記好的二抗（購自北京康泰生物批號：20104856 濃度：1：1000），37℃孵育 30min，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，滴加第二代辣根酶標記的工作液體，37℃孵育 10min，蒸餾水沖洗 3 次，每次 5min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

免疫組化結果判定：ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性染色表達于細胞核和我細胞質中，兩種蛋白的陽性染色呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴依據染色的程度分為：未染色（0 分）、僅僅淡黃色染色（1 分）、棕黃色染色（2 分）、染色呈褐色、黑色（3 分）；⑵根據染色的細胞占比結果： 占比≤10%計分1 分、占比范圍11%～50%計分2 分、占比范圍51%～75%計分3 分、占比＞75%計分4 分，染色程度與陽性細胞計分之乘積＜3 分為陰性、≧3 分為陽性。

1.3 統計學方法 采用美國IBM SPSS 公司的統計軟件包SPSS21.0 版本對本研究的數據進行統計學處理，采用±s 表示符合正態分布的計量資料，應用t 檢驗分析兩組間差異；應用χ2檢驗分析計數資料的組間差異；P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組標本中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達率比較 乳腺癌組織中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達分別為68.89%、58.89%均高于良性組的 31.11%、24.44%，差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組標本中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達率比較[n(%)]

2.2 乳腺癌組織中的ZEB2 蛋白、SOX2 蛋白陽性表達率與患者病理學特征的關系 在是否發生淋巴結轉移、不同TNM 分期的乳腺癌組織中的SOX 2 蛋白、ZEB2 蛋白陽性表達率組間比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）；在是不同組織學分級、不同病灶直徑、不同ER 及PR 表達的乳腺癌組織中的SOX2 蛋白、ZEB2 蛋白陽性表達率組間比較，差異具不有統計學意義（P＞0.05）。 見表2，表3。

3 討論

乳腺癌導管上皮細胞的異常增殖或者分裂，能夠顯著促進乳腺癌的發生，在合并有性激素受體敏感性改變或者BRCA 基因突變的群體中，乳腺癌 的發病率可進一步的上升[6]。 臨床上的觀察分析發現，乳腺癌患者的5 年生存率不超過35%，不同措施治療后乳腺癌患者的總體生存時間或者中位生存時間仍然無明顯的改善[7，8]。對于乳腺癌患者的病情評估具有一定的臨床參考價值， 雖然CA125 等腫瘤標志物能夠在乳腺癌的病情評估過程中發揮作用。但部分研究者認為，依靠CA125 等指標評估乳腺癌患者臨床病理特征的靈敏度不超過30%，其評估的局限性較為明顯，評估的一致性率較低[9]。本次研究通過對于乳腺癌患者病灶組織中ZEB2、SOX2 的表達分析，不僅能夠揭示乳腺癌患者的內在病情進展原理，同時能夠為臨床上相關患者提供腫瘤分子學方面的參考指標。

表2 乳腺癌組織中的SOX2 蛋白陽性表達率與患者病理學特征的關系

表3 乳腺癌組織中的ZEB2 蛋白陽性表達率與患者病理學特征的關系

ZEB2 是鋅指蛋白家族成員，其能夠通過提高乳腺導管上皮細胞內的癌基因轉錄活性，進而提高癌細胞的異常分裂的風險。 ZEB2 能夠提高轉錄上游增強子的激活程度，提高紡錘體的分裂速度，進而促進早期癌細胞的發生過程。 相關臨床方面的研究也發現，ZEB2 的高表達能夠增加乳腺上皮細胞的浸潤和突破能力，導致中晚期惡性腫瘤的病情進展[10]；SOX2 是癌細胞干性調控因子，其能夠通過結合癌細胞膜上的糖蛋白配體， 激活癌細胞內MAPK 或者AKT 信號通路， 最終提高癌細胞的轉錄失常風險[11，12]。 SOX2 對于癌細胞形態學特征的修飾作用，能夠增加癌細胞的變形能力，最終促進腫瘤病情進展[13]。

本次研究通過免疫組化分析了ZEB2、SOX2的表達，發現在乳腺癌患者病灶組織中，ZEB2、SOX 2 蛋白的表達陽性率均明顯的上升，高于良性對照乳腺組織， 統計學差異較為明顯， 提示了ZEB2、SOX2 的高表達均能夠促進乳腺癌病情的進展。 匯總不同的相關文獻，考慮由于ZEB2、SOX2 的下列方面的病理性作用機理有關[14]：⑴ZEB2 能夠提高乳腺導管上皮細胞浸潤能力，促進上皮間質轉換的發生， 最終促進乳腺導管上皮細胞浸潤基底膜組織；⑵SOX2 的表達上升能夠降低凋亡相關因子的活性，抑制導管上皮細胞的凋亡，促進導管上皮細胞浸潤小葉及導管間質組織。姚晉林等[15]研究者也發現，在乳腺癌患者病灶組織中，SOX2 蛋白的表達陽性率可平均上升40%，在合并有較高浸潤深度或者局部淋巴結組織患者的患者中，SOX2 蛋白的表達陽性率可進一步的上升。 在探討ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者臨床病理特征的關系過程中，發現在臨床分期較晚或者發生鎖骨下等部位淋巴結轉移的患者中，ZEB2、SOX2 蛋白的表達陽性率較高，提示了ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要由于ZEB2 的表達上升，能夠提高導管上皮細胞的粘附能力，促進了其浸潤鎖骨下或者腋窩淋巴結組織，從而促進了淋巴結的轉移；而SOX-2 的表達上升，還能夠促進癌細胞間質成分的分解，從而為癌細胞的擴散和浸潤提高前提，并最終促進了TNM 臨床分期的進展。但本次研究中并未發現在不同組織學分級、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）等患者中 ZEB2、SOX2 的表達差異，提示ZEB2、SOX2 的表達與性激素受體并無明顯的關聯。

綜上所述，在乳腺癌患者病灶中，ZEB2、SOX2蛋白的表達陽性率明顯上升，同時ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關。 本次研究未能充分探討ZEB2、SOX2 的表達與乳腺癌患者治療結局或者臨床轉歸的關系。