大棗煅制前后主要活性成分含量變化研究

劉世軍，楊 銳，張 娛，宋忠興，崔春利，許洪波，劉紅波，張軍武，王少程

(陜西中醫藥大學/陜西省中藥資源產業化協同創新中心/秦藥特色資源研究開發國家重點實驗室(培育)/陜西省創新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083)

大棗為鼠李科植物棗ZiziphusjujubaMill.的干燥成熟果實[1]。具有補中益氣，養血安神，緩和藥性的功效。現代藥理研究表明大棗中所含的黃酮類化合物具有明顯的降壓、催眠和鎮靜作用；三萜類化合物具有抗腫瘤作用；生物堿類化合物也有良好的鎮靜催眠作用；多糖具有免疫調節、抗衰老、補血等生理活性；而環磷酸腺苷則能增強心肌收縮力、減輕疲勞[2, 3]。關于大棗的炮制方法具史料記載，有擘破，蒸制，炒制，而對煅制研究較少。由于大棗煅制之后可產生止血，收斂作用[4]，故課題組對大棗煅制后主要化學成分的變化進行研究，為揭示大棗煅制炮制原理提供一定的幫助。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

濃鹽酸(西安三浦化學試劑有限公司)、甲酸(天津市科密歐化學試劑有限公司)、碳酸鈉、甲醇、亞硝酸鈉、冰醋酸、氫氧化鈉、乙酸乙酯、高氯酸、石油醚、Folin試劑、甲苯(分析純，天津市天力化學科技有限公司)、硝酸鋁(分析純，成都市科隆化學品有限公司)、無水乙醇(分析純，安徽安特食品股份有限公司)；對照品：蘆丁(16122801)、齊墩果酸(16051205)(陜西樂博生化科技有限公司)、沒食子酸(B20851)、蓮心堿(B20730)(上海源葉生物科技有限公司)。

1.2 儀器

島津UV-2600紫外可見分光光度儀(日本島津公司)、101型電熱鼓風干燥箱、MH-500調溫型電熱套、KSW型電爐溫度控制器、KSW箱式電阻爐、DZKW-4電子恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)、FA2004B電子分析天平(上海佑科儀器儀表有限公司)、FW-400AD高速萬能粉碎機(天津鑫博得儀器有限公司)、KQ-300DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、C21-HT2109多功能電磁爐(廣東美的生活電器制造有限公司)、WFH-201B紫外透射反射儀(上海精科實業有限公司)。

2 方法

樣品制備：將0.5 g準確稱取的大棗樣品轉入50 mL離心管中，再分別加入80 %甲醇溶液5 mL，超聲提取(1 000 W)30 min，離心(4 000 r·min-1)10 min后收集上清液，殘渣以同樣方法再提取1次，合并兩次提取液，用80 %甲醇定容至10 mL。4 ℃冷藏備用[5]。

2.1 總酚含量的測定[6]

標準曲線的繪制：精密稱取1 mg沒食子酸對照品，用蒸餾水定容至10 mL，得標準液(濃度為0.1 mg·mL-1)，分別準確量取上述標準液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 ml容量瓶中，加蒸餾水6 mL，搖勻后加0.5 mL Folin酚試劑，搖勻，過1 min后加1.5 mL 20 %的Na2CO3溶液(質量分數)，混勻定容，在75 ℃恒溫水浴反應10分鐘，取出冷卻后，在760 nm波長處測定其吸光度。得標準曲線方程y=59.071x+0.0041，R2=0.9965。

測樣品定：準確移取大棗生品和扣鍋煅制大棗甲醇提取液(表1)，分別加入稀釋1倍的Folin酚試劑0.5 mL，混勻后再加入1.5 mL 10 %的Na2CO3溶液(質量分數)，然后用蒸餾水定容至10 mL，混勻，75 ℃恒溫水浴反應10 min，取出冷卻，在760 nm波長處測定其吸光值。

表1 樣品中總酚含量測定

2.2 總黃酮含量測定

標準曲線的繪制：準確稱取蘆丁對照品2 mg，用80 %甲醇溶液溶解并定容至10 mL，即得蘆丁標準液(0.2 mg·mL-1)，吸取蘆丁標準液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分別置于10 mL的容量瓶中，用80 %甲醇溶液補至5.0 mL，然后加入0.3 mL 5 %的NaNO2溶液，搖勻，放置6 min后，再加入0.3 mL 10 %的Al(NO3)3溶液搖勻，6 min后加入4 mL 1 mol·L-1的NaOH溶液，混勻，用80 %甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，10 min后在510 nm波長處測定吸光度[7]，得標準曲線方程y=13.234x-0.0025，R2=0.9994。

樣品測定：準確移取大棗生品和扣鍋煅制大棗甲醇提取液(表2)于10 mL的容量瓶中，將扣鍋煅制大棗甲醇提取液濃縮至5 mL，然后分別加入0.3 mL 5 %的NaNO2溶液，搖勻，放置6 min后加入0.3 mL 10 %的Al(NO3)3溶液，搖勻，6 min后加入4 mL 1 mol·L-1的NaOH溶液，混勻，用80 %甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，10 min后在510 nm波長處測定吸光度。

表2 樣品中總黃酮含量測定

2.3 總三萜含量的測定

標準曲線的繪制：精確稱取齊墩果酸對照品1 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，即得對照品溶液(0.1 mg·mL-1)。準確吸取對照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于10 mL的容量瓶中，水浴揮去溶劑后，加入0.4 mL 5 %的香草醛冰醋酸溶液，1.6 mL高氯酸試劑，混勻后于70 ℃水浴加熱反應15 min，冷卻至室溫，加乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻，在560 nm波長處測定吸光度[5]，得標準曲線方程y=92.243x-0.0137，R2=0.9988。

樣品測定：移取大棗生品和扣鍋煅制大棗甲醇提取液(表3)于10 mL容量瓶中[8]，稀釋至刻線，取1 mL水浴揮去溶劑后，加入0.4 mL 5 %的香草醛冰醋酸溶液，1.6 mL高氯酸試劑，混勻后于70 ℃水浴加熱反應15 min，冷卻至室溫，加乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻后在560 nm波長處測定吸光度[5]。

表3 樣品中總三萜含量測定

2.4 總生物堿含量測定

標準曲線的繪制：精密稱取2 mg蓮心堿對照品至10 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解定容[8]，得標準對照品溶液(0.2 mg·mL-1)。分別量取0.0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4 mL于10 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，于282 nm波長處測定吸光度，得標準曲線方程y=11.321x-0.0053，R2=0.9988。

樣品制備：配制1 %鹽酸溶液250 mL，1 %氫氧化鈉溶液300 mL備用。分別稱取各樣品0.5 g于離心管中，并貼好標簽。向每個離心管中分別加入10 mL的1 %鹽酸溶液，調節pH=2，浸泡2 h，使生物堿都形成生物堿鹽溶于酸水中。每個離心管中分別加入1%氫氧化鈉溶液，調節pH為9～10，使生物堿游離出來。分別加入無水乙醇15 mL，封住蓋，超聲處理40 min，取出離心管，準備下一步處理。過濾樣品溶液。將經過過濾的溶液用無水乙醇定容到50 mL的容量瓶中貼上標簽備用[9～10]。

表4 樣品中總生物堿含量測定

樣品測定：準確移取陜西和新疆的大棗生品與扣鍋煅制大棗樣品生物堿提取液(表4)于10 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻線，在282 nm波長處測定吸光度。

3 結論

該研究結果表明，煅制大棗總酚、總黃酮、總三萜含量明顯要比生品大棗的低，但是扣鍋煅大棗(新疆產)較生品大棗總生物堿含量升高。生品陜西產大棗要比新疆產大棗總黃酮、總三萜、總生物堿含量高，但生品陜西產大棗總酚含量比較低。其炮制品的含量也有差別，扣鍋煅新疆產大棗總酚、總黃酮、總三萜、總生物堿含量高于扣鍋煅陜西產大棗，這可能是因為產地不同，大棗果肉的緊密度和肥薄不同，導致煅制結果出現差異。大棗在煅制過程中，會發生無氧燃燒，一些化學成分在高溫條件下遭到破壞，但在扣鍋煅后，產生了止血、收斂作用，其機理有待進一步深入研究。