不同種源和不同肥料對前胡有效成分及產量的影響*

陳如兵 樓柯浪 吳曉俊 張春椿

1 浙江省中醫藥研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中醫藥大學 浙江 杭州 310053

前胡是傘形科前胡屬多年生草本植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的干燥根，其味苦、辛，微寒，具有降氣化痰，散風清熱。隨著臨床藥用逐漸加大，野生資源瀕臨枯竭。本研究旨在探究種源與肥料對前胡的影響，為探究更適合前胡的種植方式提供理論依據。

1 材料

1.1 儀器：Alliance e2695高效液相色譜儀（waters公司）；PDA FLR檢測器（waters公司）；KQ2200DA型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AR224CN型電子分析天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］。

1.2 試劑：白花前胡甲素、白花前胡乙素（純度均≥98.50%，購于曼思特生物科技公司）；甲醇（色譜純）；三氯甲烷、二乙胺等均為分析純，水為去離子。

2 方法

2.1 試驗設計：大田試驗于2018～2019年間進行，試驗田位于浙江省杭州市淳安縣臨岐鎮。試驗田按兩部分內容同時展開。第一部分：一年生抽薹前胡種子、兩年生抽薹前胡種子、野生前胡種子以及使用前胡殘留根；第二部分：CK（不施肥）、施復合肥、施有機肥。播種時間為2018年三月春播，播種方式為條播，播種時間為一年，采收時測定小區產量，轉換成每公頃產量。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的測定：分述如下。

2.2.1 色譜條件：C18色譜柱，柱溫為25℃，檢測波長為321nm，流動相為A（甲醇）及B（水）兩相等度（75：25）洗脫，流速為1.0ml/min，采用PDA FLR檢測器。理論板數按白花前胡甲素峰計算應不低于3000[1]。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取白花前胡甲素6mg，置于10ml棕色容量瓶中，加甲醇制成0.6mg/ml白花前胡甲素對照品的溶液；同上方法制備得到0.6mg/ml的白花前胡乙素對照品溶液，并都存于4℃冰箱備用。

2.2.3 線性關系考察：取標準溶液1ml，5ml，10ml，15ml，20ml分別置于20ml容量瓶中，加甲醇定容搖勻，按“2.2.1”色譜條件項下進樣測定。以峰面積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標繪制標準曲線。分別得到白花前胡甲素和白花前胡乙素的回歸方程：白花前胡甲素Y=22381X-233494，R2=0.9999，線性范圍 36～720μg/ml和白花前胡乙素Y=17048X-171386，R2=0.9999，線性范圍36～720μg/ml。

2.2.4 精密度考察：精密取對照品溶液，按“2.2.1”色譜條件項測定，連續進樣6次，結果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.16%和1.28%，表明儀器的精密度良好。

2.2.5 穩定性考察：取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24h時按“2.2.1”色譜條件項測定，結果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.52%和0.91%，表明樣品溶液在24h內穩定。

2.2.6 重復性考察：精密稱取前胡樣品6份，按“2.2.1”色譜條件項測定，結果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.27%和1.41%，表明該方法重復性好。

2.2.7 加樣回收考察：精密稱取前胡樣品6份，分別加入不同含量的白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品，制得3份不同濃度的樣品，并且每個平行3份，按“2.2.1”色譜條件項測定，結果白花前胡甲素和白花前胡乙素RSD分別為0.73%和1.46%，表明方法準確度好。

2.2.8 樣品含量測定：取干燥的前胡樣品細粉約0.50g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25ml，塞密，稱定重量，超聲處理10min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續濾液5ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。進樣前用0.45μm的微孔濾膜過濾，得供試品溶液。取供試品溶液10μl進樣，根據標準曲線計算各樣品中白花前胡甲素和白花前胡乙素的量。

2.3 數據處理：采用Excel2019、SPSS 25.0和Graph‐pad prism 8軟件分析作圖。

3 結果與分析

3.1 不同種源與不同肥料對前胡產量的影響：由圖1可以看出，野生組的產量明顯低于其他組別，其次是兩年生組，而一年生和殘留根無顯著性差異，可見還是正常一年生的前胡種子產量相對較大；不施肥的CK組產量明顯低于施肥組，復合肥產量稍低于有機肥組，可見施肥有助于提高前胡的產量，有機肥的產量提高相對較高。

圖1 不同種源與不同肥料對前胡產量的影響

3.2 不同種源與不同肥料對前胡有效成分含量的影響：結果見圖2。種子年限對白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量存在著一定的影響，年限增大兩者含量有相應的降低，其中對白花前胡乙素的影響較大。野生組白花前胡甲素的含量大于一年生組，同為一年生種子來源的殘留根組白花前胡甲素含量與一年生組無顯著性差異，CK組的白花前胡甲素含量遠高于施肥的兩組。殘留根組與兩年生組的白花前胡乙含量明顯低于低于其他組別。可見仿野生栽培能相對有效的增加前胡有效成分的含量，兩年生的種子與殘留根栽培的方式無利于前胡有效成分的積累，施肥也會一定程度降低前胡有效成分的積累。

4 討論

有效成分是評價中藥材質量優劣的中藥指標之一[2]，產量是影響中藥材經濟效益的重要因素，因此本文通過測量前胡的有效成分與產量探究不同種源以及不同肥料對前胡的影響，從而尋求一種相對合適的前胡種植方式。不同的種源以及不同肥料，都會對中藥材有效成分的合成產生一定的影響，導致中藥材質量產生差異。[3-6]本研究結果顯示，不同的種源對白花前胡乙素的影響較大，對有效成分總含量表現為野生＞一年生＞殘留根＞兩年生，其中一年生組與殘留根組無顯著性差異，野生組有效成分含量雖高但產量偏低，整體表現常規一年生種子仍然存在一定優勢，筆者推測前胡種子年限增加不利于有效成分積累以及產量的提高。本文還考察了不同肥料對前胡藥材的影響，結果還表明了，施不施肥對白花前胡乙素的含量無顯著性差異，不施肥情況下白花前胡甲素的含量卻又顯著性增高，但不施肥情況下產量卻不盡人意。筆者推測肥料的施加可能會影響白花前胡甲素的積累。綜上所述，針對野生種子組以及不施肥組的有效成分總含量都相對較高的情況，筆者推測仿野生栽培模式可能更有利于前胡藥材的質量的提升，對于仿野生栽培的研究需要更深一步的探討。

圖2 不同種源與不同肥料對前胡有效成分含量的影響