國產鹽酸奧洛他定口服制劑質量評價

王立峰，王新亮，張春鴻，劉堯，馬鄭

作者單位：1遼寧中醫藥大學附屬醫院藥學部，遼寧 沈陽110032；2大連市藥品檢驗所化學室，遼寧 大連116000

鹽酸奧洛他定為新型組胺受體阻斷劑。鹽酸奧洛他定片用于治療成人蕁麻疹、多種皮膚病引起的瘙癢及兒童的過敏性鼻炎等癥［1-2］。本品由日本協和發酵麒麟株式會社（Kyowa Hakko Kirin Co.，Ltd.）研制，2000年12上市，國家為日本。

本品的仿制藥已在我國上市。2018年大連市藥品檢驗所承擔了鹽酸奧洛他定片、膠囊、滴眼劑的國家藥品計劃抽驗課題。本研究評價了國產鹽酸奧洛他定口服制劑的質量，經調研，尚未見該制劑相關研究內容的報道。在研究中，我們發現現行質量標準中有關物質檢查法存在不科學及落后的缺陷，如未能控制特定雜質、檢測波長設置不合理等。為全面評估該仿制品種的安全性和有效性，2018年2—8月我們采用風險控制的理念［3］，首先建立了針對性的有關物質檢查法，確定并控制4 個特定雜質，明確雜質的結構和來源，并進一步開展了國產制劑與原研制劑的雜質譜的對比研究。除此以外，還開展了其他探索性研究工作，從而科學評估該國產鹽酸奧洛他定口服制劑的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695 高效液相色譜，配備四元梯度泵和自動進樣器；紫外檢測器（2489 型），并配備二極管陣列檢測器（2998 型，方法建立及強制降解時采用），美國Waters公司生產；MSA225s-100-DA型分析天平，德國Sartrious公司生產。

1.2 試藥 對照品：鹽酸奧洛他定（批號R058Q0，含量99.9%，美國藥典委員會）鹽酸奧洛他定雜質B（批號R077Q0，含量100.0%，美國藥典委員會）。鹽酸奧洛他定雜質C（批號R065M0，含量99.0%，美國藥典委員會）。鹽酸奧洛他定雜質甲醛衍生物（批號 1-VHP-134-4，含量 97.0%，Toronto Research Chemicals）。鹽酸奧洛他定雜質E（批號101099-200901，含量100.0%，中國食品藥品檢定研究院）。

國產鹽酸奧洛他定片、鹽酸奧洛他定原料（批號 17103006、17103007、17103009、17053010）。國產鹽酸奧洛他定膠囊、鹽酸奧洛他定原料（批號171001、170901、170903）。原研制劑：鹽酸奧洛他定片（日本協和發酵麒麟株式會社，批號257AGC、269AGG、257AGF、250AGA、246PFK），乙腈（色譜純，Merck公司生產），實驗用水為超純水，十二烷基硫酸鈉（分析純，河北百靈威精細材料有限公司），磷酸二氫鉀（分析純，國藥試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 辛基硅烷鍵合硅膠色譜柱（Intertsil C8，5 μm，4.6 mm×250 mm 或效能相當）；以0.5%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液和乙腈的混合溶液為流動相［取十二烷基硫酸鈉5.0 g，用0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（加10%磷酸溶液調節pH 至3.5）-乙腈（55∶45）的混合溶液溶解并稀釋至1 000 mL］，檢測波長為299 nm，柱溫為40 ℃。

2.2 供試品溶液的制備 取鹽酸奧洛他定片、膠囊內容物，研細，稱取粉末適量（約相當于10 mg），置50 mL 量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解，再稀釋至刻度，搖勻并濾過。取續濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液適量，用流動相定量稀釋成濃度為2μg/mL的溶液，作為對照溶液。

2.3 空白溶液的制備 按處方組成，取空白輔料，照“2.2”項制備方法，制備空白輔料溶液。

2.4 系統適用性溶液的制備 精密稱取“1.2”項下的各對照品適量，制成含鹽酸奧洛他定200μg/mL，鹽酸奧洛他定雜質C、鹽酸奧洛他定雜質E、鹽酸奧洛他定雜質甲醛衍生物均為2μg/mL 的溶液，作為系統適用性溶液。

圖1 高效液相色譜圖：A為系統適用性溶液，B為膠囊劑供試品溶液，C為空白溶液

2.5 測定法 精密量取對照溶液和供試品溶液各50μL，分別注入液相色譜儀，記錄至主成分保留時間的2 倍。供試品溶液色譜峰如有雜質峰，在相對保留時間為0.4 處的雜質（雜質A），應不得大于對照溶液主峰面積的0.4 倍（0.4%）；在相對保留時間為0.9 處的雜質（雜質C），應不得大于對照溶液主峰面積的0.4倍（0.4%）；在相對保留時間為1.5處的雜質（雜質E），峰面積乘以0.22，應不得大于對照溶液主峰面積的0.4 倍（0.4%）；鹽酸奧洛他定E-異構體（采用對照品定位），峰面積乘以0.77，應不得大于對照溶液主峰面積的0.4 倍（0.4%）；其他單個雜質面積不得大于對照溶液主峰面積的0.2 倍（0.2%），雜質總量不得大于對照溶液主峰面積（1.0%）。

2.6 色譜條件的建立 鹽酸奧洛他定原料藥的有關物質測定方法已有報道［4-6］。USP40［7］中收載了本品原料藥的有關物質方法，并控制了雜質B、雜質C、雜質E、雜質甲醛衍生物。但該法需分別在兩種色譜系統下測定，操作繁瑣。本研究建立了同時測定上述4種已知雜質的有關物質方法，4種已知雜質均能基線分離并準確定量。強制降解實驗研究進一步說明，4種雜質均為降解產物，因此建議增訂入制劑的質量標準中進行定量控制。系統適用性溶液圖譜見圖1。

2.7 方法學驗證

2.7.1 專屬性實驗 強制降解試驗：（1）酸破壞試驗：稱取鹽酸奧洛他定約5 mg，并置于25 mL 量瓶中，加 1 mL 的鹽酸溶液（0.01 mol/L），室溫放置0.5 h，加堿液中和處理，即得。（2）堿破壞試驗：取鹽酸奧洛他定約5 mg，并置于25 mL 量瓶中，加1 mL的氫氧化鈉（0.01 mol/L），室溫放置0.5 h，加酸液中和處理，即得。（3）氧化破壞試驗：取鹽酸奧洛他定約5 mg，并置于25 mL 量瓶中，加1 mL 0.5%過氧化氫溶液，室溫放置2 h，即得。（4）光照試驗：取本品裸片，置于4 500±500 lx 照度下放置5、10 d，照供試品溶液制備方法，即得。（5）高溫破壞試驗：取本品裸片，置于70 ℃空氣浴中分別放置5、10 d，精密稱取本品細粉（相當于本品5 mg）照供試品溶液制備方法，即得。（6）高濕試驗：取本品制劑，置于溫度25 ℃，相對濕度90%，分別放置5、10 d，照供試品溶液制備下方法。分別取上述溶液各50 mL，進樣分析。強制降解結果表明：在氧化條件下，雜質C與相鄰雜質分離度為1.2。在其他降解條件下，分離度均大于1.5，二極管陣列檢測器結果顯示各已知雜質純度角小于純度閾值，說明峰純度良好，并且各雜質不干擾主峰的測定。上述研究結果說明專屬性良好。

2.7.2 線性關系考察 精密稱取鹽酸奧洛他定對照品10.20 mg，置于25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，得線性關系溶液。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。結果表明：在0.254～254.2μg/L 的濃度范圍內，濃度與峰面積的呈良好的線性關系。線性方程：Y＝2.32×105X+6 462，r＝0.999 7。

2.7.3 定量限 取線性關系項下的對照品貯備溶液逐級稀釋，直至約為信噪比的10 倍，作為定量限濃度。測得定量限濃度為0.127μg/mL。

2.7.4 精密度實驗 取對照溶液連續進樣6 針，測得峰面積的RSD 值，結果RSD%小于0.8%，說明本法精密度良好。

2.7.5 穩定性實驗 將本品供試品溶液，室溫放置2、4、6、8、12、24 h后依法測定，供試品溶液四個已知雜質峰面積RSD 小于5.0%，主峰峰面積RSD 小于1.0%，也未發現其他新雜質。說明本品24 h內穩定。

2.7.6 測定結果 采用本研究實驗條件，對原研制劑及國產制劑有關物質進行檢測，進行雜質種類和數量的對比研究。結果見表1。結果表明，國產片劑與原研制劑的雜質水平基本一致，但國產膠囊劑雜質水平高于原研制劑。

表1 原研制劑及國產制劑有關物質測定結果/%

3 有效性、質量可控性評價

經文獻調研本品為BCS1 類或BCS3 類的藥物。在溶出度研究中，鹽酸奧洛他定片以水為介質，在槳法50 轉的條件下迅速崩解，基本在5 min 內可釋放85%以上，屬于非常快速溶出。膠囊劑在小杯法中的釋放稍慢，但在15 min內也可達到80%的溶出量。依據相關指導原則［8-9］，本品為速釋制劑，溶出不為本藥物吸收的“限速步驟”。因此，本研究將溶出度檢查項視為中低風險因素，未納入質量評價指標。但是為更好反應制劑廠家工藝水平，我們開展國產制劑的批間溶出度考察，并與原研制劑溶出曲線的對比研究，結果顯示國產片劑與原研制劑溶出曲線基本一致，批間溶出度差異較小。質量標準方面，仿制藥質量標準均存在一定缺陷。如有關物質檢查中未控制特定雜質、檢測波長設定不合理等。其中膠囊劑中的溶出度檢查法為小杯法，為我國藥典特有，且該法易受漏槽條件等因素影響。隨著我國加入ICH 及國際化的不斷深入，該檢查法應逐漸替代。因此本研究進一步開展了小杯法與槳法的對比研究，發現槳法同樣適合本品溶出度檢查，因此建議更改為槳法。

4 討論

4.1 雜質譜的分析 為更好闡述雜質的來源，我們開展了雜質的來源和降解途徑研究，結果見表2。研究表明，鹽酸奧洛他定具有比較好的化學性質穩定性。相對來說，光照條件對本品的降解影響最大，且以雜質E 的增加最大。光照同時還可產生雜質B、雜質甲醛衍生物以及未知雜質，提示本品的生產、檢測、貯藏、運輸等環節應注意光照的影響。強制降解試驗（氧化、酸、堿破壞）研究表明，本品在氧化條件下產生雜質C，提示本品的貯存條件應注意氧化。研究還發現雜質C 性質不穩定，容易發生二次降解。

表2 雜質的結構、來源、降解途徑分析

對原料藥的檢測發現了雜質E。進一步從工藝的角度判斷，該雜質也可在工藝中產生，即是工藝雜質也是降解產物，研究表明本品原料藥的標準也應注重該雜質的控制。

4.2 色譜條件的確定 在確定特定雜質后，建立方法時參考并重現了現行法定標準：國產片劑質量標準（標準號YBH04732014）；原研片劑質量標準（標準號JX20160058）；膠囊劑質量標準（標準號YBH2382005）；滴眼劑質量標準（標準號YBH06602008）；原研滴眼劑質量標準（標準號JX20130147）；USP40；JP17。通過對上述標準的重現，原研片劑質量標準能夠較好分離幾種雜質。但方法需加入內標物，未采用校正因子定量。本研究對方法進行了優化并采用加校正因子的定量方式。考察了C8和C18色譜柱對分離的影響，結果C8柱的保留時間較長，使得雜質C與主峰有更好的分離度。離子對試劑影響方法的選擇性，對分離效果有重大影響。研究考察了離子對試劑的種類和濃度，考察了庚烷磺酸鈉和十二烷基硫酸鈉對分離度的影響。結果表明十二烷基硫酸鈉的分離效果更好。又進一步比較了十二烷基硫酸鈉的生產廠家，發現進口試劑的分離效果優于國產制劑，增加十二烷基硫酸鈉濃度至0.5%時，特定雜質均實現了基線分離。為確定方法的檢測波長，我們測定了4 種特定雜質的最大吸收波長。分別為雜質B 300 nm，雜質C 271 nm，雜質E 299 nm，雜質甲醛衍生物296 nm，因此最終確定為299 nm。在該波長下，能夠兼顧各雜質靈敏度的要求。在限度的確定上，本研究參考USP40現行標準，符合FDA 相關指導原則［10-11］及ICH［12-13］，并結合法定檢驗數據結果。綜上，擬定限度能夠反應本品質量，保證本品安全性。

4.3 耐用性考察 采用Hypersil gold C8（4.6 mm×150 mm）色譜柱考察了系統適用性溶液，各雜質峰位未發生改變，但是分離效果不如250 mm 色譜柱。結果說明本法應使用250 mm 色譜柱。進一步考察了柱溫對分離的影響。當升高柱溫至45 ℃，保留時間有所縮短，但對分離度無明顯影響，為延長色譜柱壽命不采用高柱溫。

5 結論

本研究建立了鹽酸奧洛他定口服制劑的有關物質高效液相色譜方法。本法優勢為在同一條件下測定4 種已知雜質，具有方便、快速的特點。方法學驗證結果表明本法符合我國藥典技術要求［14］。通過強制降解及影響因素試驗，4 種雜質均為制劑的降解產物，因此建議在制劑標準中控制。通過與原研制劑進行雜質對比研究，結果表明國產片劑雜質種類和數量均不大于原研制劑，且未發現超過報告閾值的未知雜質。因此，國產片劑雜質譜與原研制劑一致。國產膠囊劑雜質水平高于原研制劑，說明應提高國產膠囊劑產品質量。通過開展有關物質的對比研究，能夠客觀揭示國產制劑的安全性。在有效性和質量可控性研究中，基于風險控制的理念，建議提升和統一有關物質的檢查法，并將膠囊劑中溶出度檢查法由小杯法改為槳法。

綜上，本研究表明：從雜質譜等方面考察，國產鹽酸奧洛他定片質量為“好”，國產鹽酸奧洛他定膠囊質量為“一般”。本研究結果及其他相關文獻表明［15］，現行膠囊劑質量標準應進行必要提升。