桂西北地區女性HR-HPV、HPVE6/E7mRNA感染調查及其與陰道微生態的關系

陳慧峰 潘琦文 李建湘

摘要：目的? 調查女性高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）及其早期基因（HPVE6/E7mRNA）感染情況，探究其與陰道微生態的關系。方法? 收集2018年7月～2020年6月于河池市人民醫院婦科就診的HPV病毒感染女性1000例，根據生殖道HR-HPV和HPV E6/E7mRNA實驗室檢測結果，分為對照組1（HR-HPV陽性、HPV E6/E7mRNA陰性）300例，對照組2（HR-HPV陰性、HPV E6/E7mRNA陽性）300例，實驗組（HR-HPV和HPV E6/E7mRNA均陽性）400例;另選取我院同期體檢健康婦女15例，作為空白組。分析四組HR-HPV、HPVE6/E7mRNA感染情況及HR-HPV感染與陰道微生態的關系。結果? 1000例HR-HPV陽性患者中單一型感染821例高于復合型感染179例，單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復合型感染以16+18型占比最多;空白組未檢出假菌絲陰道炎（VVC）、滴蟲陰道炎（TV）、需氧菌陰道炎（AV），對照組1、2與實驗組的VVC、TV、AV檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05）;四組清潔度異常、pH值異常、細菌性陰道炎（BV）、乳酸菌產H2O2陽性、菌群密度陽性、菌群多樣性陽性的檢出率比較，空白組<對照組1<對照組2<實驗組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論? HR-HPV單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復合型感染以16+18型占比最多，感染HR-HPV女性存在陰道微生態異常情況，與BV、乳酸菌異常、菌群密度及多樣性改變有關。

關鍵詞：桂西北地區;HR-HPV;HPVE6/E7mRNA;陰道微生態

中圖分類號：R737.33? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.20.036

文章編號：1006-1959（2020）20-0119-03

Investigation of Female HR-HPV and HPVE6/E7mRNA Infection in Northwestern Guangxi

and Its Relationship with Vaginal Microecology

CHEN Hui-feng，PAN Qi-wen，LI Jian-xiang

（Department of Gynecology，Hechi People's Hospital，Hechi 547000，Guangxi，China）

Abstract：Objective? To investigate the infection of female high-risk human papillomavirus （HR-HPV） and its early genes （HPVE6/E7mRNA）， and explore its relationship with vaginal microbiota.Methods? A total of 1，000 HPV-infected women who attended the Department of Gynecology， Hechi People's Hospital from July 2018 to June 2020 were collected. According to the laboratory test results of HR-HPV and HPV E6/E7 mRNA in the reproductive tract，they were divided into control group 1 （HR-HPV positive， HPV E6/E7mRNA negative） 300 cases， control group 2 （HR-HPV negative， HPV E6/E7mRNA positive） 300 cases， experimental group （HR-HPV and HPV E6/E7mRNA both positive） 400 cases; 15 cases of healthy women in our hospital during the same period of physical examination were selected as the blank group. Analyze the four groups of HR-HPV， HPVE6/E7mRNA infection and the relationship between HR-HPV infection and vaginal microecology.Results? Among 1000 HR-HPV-positive patients， 821 had single infections and 179 had multiple infections. Single infections accounted for the largest proportion of type 16， 52， 58， and 51， and multiple infections accounted for 16+18 most; no pseudohyphatic vaginitis （VVC）， trichomonas vaginitis （TV）， aerobic vaginitis （AV） were detected in the blank group， and the detection rates of VVC， TV， AV in the control group 1， 2 and the experimental group comparison， the difference was not statistically significant （P>0.05）; the four groups have abnormal cleanliness， abnormal pH， bacterial vaginitis （BV）， lactic acid bacteria producing H2O2 positive， flora density， and flora diversity detection rate in comparison， the blank group

Key words：Northwest Guangxi;HR-HPV;HPVE6/E7mRNA;Vaginal microecology

宮頸癌（cervical cancer）是婦科常見的惡性疾病，發病率居我國女性生殖系統惡性疾病之首。目前臨床認為反復感染高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）與宮頸癌發病密切相關，因此HR-HPV的檢測成為篩查宮頸癌的必要手段。由于現有的HPV檢測特異性不高，結果存在假陽性，可能導致不必要的治療和檢查增多，加重患者心理及經濟負擔。HR-HPV的早期基因E6/E7的原癌蛋白是引發宮頸癌變的重要因素，病毒基因在體內整合時出現調節異常，導致細胞內E6/E7過度表達，可針對細胞內HPV E6/E7mRNA的表達量進行檢測[1，2]。近年來與陰道微生態改變和HR-HPV感染相關的研究報道增多，但目前臨床尚未廣泛應用HPVE6/E7mRNA作為檢測方式。我院為桂西北地區最大型以及唯一開展HPV E6/E7mRNA檢測醫院，積累了大量的臨床檢測資料。本研究通過檢測桂西北地區就診女性高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）及其早期基因（HPVE6/E7mRNA）感染情況與陰道微生態，旨在探究女性HR-HPV、HPVE6/E7mRNA與陰道微生態的關系。

1對象與方法

1.1研究對象? 選擇2018年7月～2020年6月于河池市人民醫院婦科就診HPV病毒感染女性1000例，根據生殖道HR-HPV和HPV E6/E7mRNA實驗室檢測結果分為對照組1（HR-HPV陽性、HPV E6/E7mRNA陰性）300例，年齡20～53歲，平均年齡（40.05±5.79）歲;對照組2（HR-HPV陰性、HPV E6/E7mRNA陽性）300例，年齡22～55歲，平均年齡（40.15±5.14）歲;實驗組（HR-HPV和HPV E6/E7mRNA均陽性）400例，年齡23～52歲，平均年齡（40.21±5.29）歲。另選取我院同期體檢健康婦女15例作為空白組，年齡19～53歲，平均年齡（39.68±5.82）歲。納入標準：①有性生活史，月經規律;②既往或目前有HPV感染;③伴有接觸性出血、異常陰道出血、排液者。排除標準：①孕期、哺乳期或已絕經婦女;②全子宮切除者;③就診7d內有陰道沖洗、給藥、性生活或使用抗生素者;④伴有免疫系統或嚴重基礎疾病者。本研究已經過本院倫理委員會審批，研究對象知曉本次研究內容并簽字同意。各組年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），可比較。

1.2方法? 所有研究對象均先后進行HPV及陰道微生態檢測。①采用第二代雜交捕獲技術（HC2）法檢測14種HR-HPV（即16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、66型、68型）病毒感染情況，每份宮頸細胞標本均檢測兩次并取其平均值;②采用支鏈DNA（branch-DNA）技術定量檢測14種（即16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、58型、66型、68型）HR-HPV的E6/E7mRNA水平，每份宮頸細胞標本均檢測兩次并取其平均值;陰道微生態檢測使用4支拭子進行取樣：○a：1支用生理鹽水濕片，并在光鏡下進行清潔度檢測;○b：1支接種至CO2培養基中進行2 d厭氧培養，分離出乳酸菌后，將其接種至H2O2培養基進行功能鑒定;○c：1支涂片后采用Gram染色法，通過油鏡每視野中的平均菌數及菌群數將菌群密集度與多樣性進行分級;將油鏡下最多見的微生物歸為優勢菌;觀察有無芽生孢子、假菌絲等，并進行Nugent評分;○d：1支使用pH精密試劑檢測pH值。

1.3診斷標準? ①HR-HPV檢測RLU/CO>1.0即為陽性;HR-HPVE6/E7mRNA檢測Copies/cell>1.0即為陽性;②微生態正常指標[3]：清潔度Ⅰ～Ⅱ度，pH值3.8～4.5，菌群密集度及多樣性均為Ⅱ～Ⅲ級，優勢菌為乳酸菌，且乳酸菌產H2O2陰性;③Nugent評分7分及以上可診斷細菌性陰道炎（BV）;需氧菌診斷評分3分及以上可診斷為需氧菌陰道炎（AV）;檢測出滴蟲（TV）、假菌絲（VVC）則診斷為對應陰道炎[4]。

1.4統計學方法? 通過SPSS 19.0統計學軟件解析數據，計數資料使用（%）描述，組間比較行？字2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1 HR-HPV類型、檢出情況? 1000例HR-HPV陽性患者中單一型感染821例高于復合型感染179例，單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復合型感染以16+18型占比最多，見表1。

2.2四組HR-HPV感染與陰道微生態的關系? 空白組未檢出VVC、TV、AV，而對照組1、2與實驗組的VVC、TV、AV檢出率差異近乎相同（P>0.05）;清潔度異常、pH值異常、BV、乳酸菌產H2O2陽性、菌群密度陽性、菌群多樣性陽性的檢出率比較，空白組<對照組1<對照組2<實驗組，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

3討論

陰道微生態屬于女性生殖系統重要的屏障，是指陰道內微生物、免疫系統、正常解剖結構與內分泌變化等共同組成并相互制約協調的一種動態平衡。臨床常用優勢菌、菌群密度/多樣性、病原菌、炎性反應等反映微生態特征。正常優勢菌多為乳酸菌，乳酸菌消耗糖原產生乳酸從而穩定微生態的pH值及清潔度，并通過激活免疫系統、抑制病原體入侵及增殖等起到維持微生態平衡的作用[5，6]。HPVE6/E7mRNA由E6/E7促進癌基因與DNA聚合酶轉錄產生，是HPV病毒活躍期的標志。但由于HPV病毒需要在細胞內進行整合，導致癌變過程不穩定，易受微生態免疫調節影響，故大部分女性感染HR-HPV病毒呈一過性，即會被微生態及時清除[7-9]。

本研究結果顯示，桂西北地區1000例HR-HPV陽性患者中單一型感染821例高于復合型感染179例，單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復合型感染以16+18型占比最多。四組研究對象中，空白組未檢出VVC、TV、AV，對照組1、2與實驗組的VVC、TV、AV檢出率相近;清潔度異常、pH值異常、BV、乳酸菌產H2O2陽性、菌群密度陽性、菌群多樣性陽性的檢出率空白組、對照組1、對照組2、實驗組依次升高。說明HR-HPV感染者明顯存在微生態異常情況，HPVE6/E7mRNA感染者HPV病毒活躍，微生態異常更為突出。對照組1的微生態異常檢出率低于其他陽性組，可能與HR-HPV檢測只單一提示體內存在HPV-DNA，并未反映病毒活動及進展有關，與羅秀清等[10]研究結果一致。筆者分析其原因在于，HR-HPV感染者HPV病毒活躍，使陰道微生態改變，pH值異常加重陰道內環境失調，形成惡性循環，，女性年齡、生育狀況都會對陰道微生態內環境造成影響，但由于自身免疫系統調節，內環境發生輕微異常時，可通過自身菌群調節恢復正常，乳酸菌是陰道微生態中主要優勢菌群，其代謝產生的乳酸、細菌素等可維持陰道微生態正常生存運轉，并對陰道感染有一定的防御作用，但HPV病毒入侵機體，抑制乳酸菌及其他陰道微生態菌群正常代謝，導致菌群失調，病毒活躍性越高，微生態異常更為嚴重[11，12]。

綜上所述，HR-HPV單一型感染以16型、52型、58型、51型占比最多，復合型感染以16+18型占比最多，感染HR-HPV女性存在陰道微生態異常情況，與BV、乳酸菌異常、菌群密度及多樣性改變有關。

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收稿日期：2020-08-20;修回日期：2020-09-01

編輯/肖婷婷