消腫散外敷與冰敷對骨骼肌損傷模型大鼠中MDA含量和LDH活性的影響

王強 胡勁松 李飛躍

摘要 目的：探討消腫散外敷與冰敷對骨骼肌損傷模型大鼠中MDA含量和LDH活性的影響。方法：采用打擊造模的方法，將86只SD大鼠造成急性軟組織損傷模型。造模后將動物分為模型組20只、消腫散組20只、冰敷組20只、聯合組20只、本底組6只。觀察治療后1 d，3 d，7 d，14 d MDA含量、LDH活性變化情況。結果：1）造模1 d后，MDA含量差異有統計學意義（P<0.05），進一步進行q檢驗兩兩比較，冰敷消腫散聯合組的MDA含量低于損傷模型組（P<0.05）。造模3 d、7 d及14 d后，消腫散組、冰敷消腫散聯合組的MDA含量均低于損傷模型組（P<0.05）。2）造模3 d后，冰敷消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組（P<0.05）。造模7 d后，消腫散組、冰敷消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組（P<0.05）。造模14 d后，消腫散組、冰敷組和冰敷消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組（P<0.05）。結論：消腫散和冰敷消腫散聯合運用均能使損傷的軟組織中MDA含量減少和LDH活性降低，對骨骼肌損傷有一定抑制作用，能改善肌肉組織形態修復程度。

關鍵詞 冰敷;消腫散;骨骼肌;損傷;丙二醛;乳酸脫氫酶

Abstract Objective：To investigate the effect of Xiaozhong Powder and ice compress detumescence on MDA content and LDH activity in the model rats with injured skeletal muscle.Methods：By using the method of blow-up modeling，a total of 86 SD rats were made into acute soft tissue injury models.After modeling，the animals were divided into a model group of 20 animals，a Xiaozhong Powder group of 20 animals，a ice compress group of 20 animals，a combined group of 20 animals，and a background group of 6 animals.The changes of MDA content and LDH activity 1 d，3 d，7 d，14 d after treatment were observed.Results：1）After 1 day of model making，there was a statistically significant difference in MDA content，which was further compared by q test.The content of MDA in the combined ice compress Xiaozhong Powder group was lower than that of the injury model group（P<0.05）.After 3，7 and 14 days，MDA content in the Xiaozhong Powder group and the ice compress detumescence combined group was lower than that in the model group.After 3 days modeling，the LDH activity of the Xiaozhong Powder group and ice compress detumescence combined group were lower than the model group.After 7 days modeling，LDH activity in the Xiaozhong Powder group and the ice compress detumescence combined group was lower than that in the model group.After 14 days modeling，LDH activity of the Xiaozhong Powder group，the ice compress detumescence group and the combined group was lower than the model group（P<0.05）.Conclusion：Xiaozhong Powder and ice compress detumescence powder can reduce MDA content and LDH activity in injured soft tissues，inhibit skeletal muscle injury to a certain extent，and improve the repair degree of muscle tissue morphology.

Keywords Ice compress; XiaozhongPowder; Skeletal muscle; Injury; MDA; LDH

中圖分類號：R274.3 文獻標識碼：A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.20.006

骨骼肌損傷是臨床最為常見的軟組織損傷疾病，是常見病多發病。其中以急性損傷為多，現代醫學在治療上采用傳統的制動、冰敷及配合消腫藥物，其中冰敷的治療方法已是公認的行之有效的方法。而中醫多以早期外敷清熱消腫、活血化瘀止痛中藥加局部制動治療，臨床癥狀改善亦效如桴鼓。“消腫散”，又名“三圣散”，是瑞金醫院魏氏傷科名方，其全方藥物組成少，效宏力專，已具有40余年的臨床應用經驗，具有良好的清熱消腫、活血止痛作用和療效[1-2]。本研究通過觀察冰敷和消腫散對急性軟組織損傷模型大鼠的干預，測定其血清MDA丙二醛（Maleic Dialdehyde，MDA）含量和乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）的活性，以及對肌肉組織形態學的觀察，來探討冰敷和消腫散對大鼠骨骼肌的抑制肌肉損傷的作用以及改善矯揉做作形態修復程度的情況，以期進一步了解冰敷加用消腫散是否有協同增效作用，同時通過探討其作用機制為臨床提供一定實驗依據。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 委托上海中醫藥大學實驗動物中心購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司清潔級SD健康大鼠86只，體質量每只200 g左右。實驗動物飼養于上海中醫藥大學動物實驗中心SPF級動物房，室內溫度為恒溫（20 ℃±2 ℃），給予標準光照自動光-暗控制（LD12：12，即07：00～19：00光照，19：00～07：00暗置），相對濕度60% ～65%，動物攝食飲水自由。實驗動物中心許可證號：SYXK（滬）2013-0016。

1.1.2 藥物 消腫散（落得打、芙蓉葉、赤小豆等），本院提供，4 ℃保存備用。

1.1.3 試劑與儀器 異丙醇（國藥集團化學試劑有限公司，批號：分析純AR80109218）;無核酸酶水（麥約爾公司，批號：150728）;Trizol裂解液（Invitrogen公司，美國，批號：cat#15596-026）;DEPC水（SIGMA公司，美國，批號：Cas1609-47-8）;丙二醛（MDA）測試盒（南京建成生物工程研究所有限公司，貨號：A003-1）;乳酸脫氫酶（LDH）測試盒（南京建成生物工程研究所有限公司，貨號：A020-2）。

紫外分光光度計（Thermo公司，美國，型號：NanoDrop2000）;超凈工作臺（蘇州凈化公司，型號：sw-cj-2d）;水浴鍋（上海誠獻公司，型號：HWS-24）;超細勻漿機（上海標本模型廠，型號：FJ150）;固體木質圓柱體（自制，長20 cm，質量620 g）;Eppendorf管（AXYGEN公司，美國，批號：cat#MCT-150-C，cat#T-200-Y，cat#T-300，cat#T-1000-B）;臺式冷凍高速離心機（Sorvall公司，美國，型號：FrescoD-37520）;電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司，型號：DK-S26）;酶標儀（Thermo公司，美國，型號：ELX800）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 除空白對照組外，大鼠腹腔3%戊巴比妥鈉注射麻醉（30 mg/kg），以固體木質圓柱體從高處自由落下進行1次打擊傷，致傷位置在右小腿內側面（其為腓腸肌中段，打擊面φ為1 cm，下落物體長度為20 cm，重量為620 g，從40 cm高處落下，重力6.08N，動能2.43J）。先將造模后的動物隨機編成1—86號，再將1—86號實驗用動物隨機分為損傷模型組20只、消腫散組20只、冰敷組20只、冰敷消腫散聯合組20只、本底對照組6只。

1.2.2 干預方法 空白對照組大鼠不作任何處理，自由活動并常規飼養。消腫散組：將涂抹有消腫散的綿紙敷到致傷處，以透氣膠布包扎固定，隔天換1次膏藥，分別干預1 d、3 d、7 d、14 d。冰敷組：對大鼠致傷處外敷冰袋并膠布固定，30 min/d，1次/d，分別干預1 d、3 d、7 d、14 d。聯合組：先對大鼠致傷處進行冰敷30 min，然后再貼敷消腫散，隔天換1次膏藥。每次換藥前先對致傷處進行冰敷30 min，分別干預1 d、3 d、7 d、14 d。

分別于造模后5 min，1 d、3 d、7 d、14 d取材。造模后5 min為本底對照組，共6只大鼠取材。后4個時間點（1 d、3 d、7 d、14 d）每個時間點共20只大鼠取材（5只/組×4組）。取材部位為腓腸肌中段（致傷處）。樣本處理方法描述欠清晰：處死大鼠取其腓腸肌中段、清洗，切割，研磨，勻漿，保存，待測。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 血清MDA的含量檢測 漩渦混勻器混勻，試管口用保險薄膜扎緊，用針頭刺一小孔，95°C沸水浴40 min，取出后流水冷卻，然后3 500～4 000 r/min，離心10 min，離心半徑10 cm。取上清，置于分光光度計（532 nm）處，1 cm光徑，蒸餾水調零，測各管吸光度值。

1.2.3.2 血清LDH的活性檢測 按照試劑盒說明書的標準操作規程，將待測液體混勻，室溫放置5 min，波長450 nm，酶標儀測定吸光度。計算公式：血清中LDH活性（U/L）=（測定OD值-對照OD值）/（標準OD值-空白OD值）×標準品濃度（0.2 mmol/L）×1 000。

1.3 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件對研究數據進行統計分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩兩比較采用q檢驗，組間比較采用方差分析，以P<0.05表示有統計學意義。

2 結果

2.1 血清MDA的含量檢測結果 經過方差分析，各組之間造模1 d后，差異有統計學意義（P<0.05），進一步進行q檢驗兩兩比較，冰敷消腫散聯合組的MDA含量低于損傷模型組，差異有統計學意義（P<0.05）。造模3 d、7 d及14 d后，消腫散組、冰敷消腫散聯合組的MDA含量均低于損傷模型組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 血清LDH的活性檢測結果 經過方差分析，各組之間造模1 d后，差異有統計學意義（P<0.05），進一步進行q檢驗兩兩比較，各組大鼠的LDH活性差異無統計學意義（P>0.05）。造模3 d后，冰敷消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組（P<0.05）。造模7 d后，消腫散組、冰敷消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組（P<0.05）。造模14 d后，消腫散組、冰敷組和冰敷消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組（P<0.05）。見表2。

3 討論

3.1 消腫散外敷與冰敷對骨骼肌損傷模型MDA含量的影響 MDA的含量反映了體內脂質過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷程度[3]。MDA含量既可反映肌體內發生脂質過氧化的程度，也可反映生物膜的受損程度[4]。當劇烈運動時，體內的氧化與抗氧化作用將失衡并導致細胞損傷，MDA含量的多少也間接反映了組織的損傷程度[5-7]。

本研究顯示造模第1天后冰敷及消腫散聯合組的MDA含量低于損傷模型組，其他組與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。造模3 d、7 d及14 d后，消腫散組、冰敷及消腫散聯合組的MDA含量均低于損傷模型組。其中冰敷組的MDA含量造模前后均不低于損傷模型組，差異無統計學意義（P>0.05）。

由此可知，消腫散、冰敷及消腫散聯合應用可以使MDA的含量明顯降低，冰敷組中MDA的含量無明顯改變。損傷的骨骼肌內部的MDA的生成減少，清除增多，說明消腫散能在一定程度上改善機體骨骼肌氧自由基生成與清除之間的動態平衡，從而增強機體骨骼肌的抗氧化能力，減輕MDA引起的對骨骼肌損傷。

也就是說，消腫散組、冰敷及消腫散聯合組能使骨骼肌的損傷程度降低，即有一定抑制損傷的作用。而冰敷組并沒有抑制骨骼肌損傷的作用。同時，可以看出冰敷及消腫散聯合運用，冰敷也沒有抵消消腫散抑制損傷的作用。

3.2 消腫散外敷與冰敷對骨骼肌損傷模型LDH活性的影響 研究認為LDH活性的變化是肌肉損傷程度的重要指標，其活性可以也反映骨骼肌的損傷程度[4，8]。

本研究顯示，造模1 d后各組大鼠的LDH活性差異無統計學意義。造模3 d后，冰敷及消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組;造模7、14 d后，消腫散組、冰敷及消腫散聯合組的LDH活性低于損傷模型組;造模14 d后，冰敷組的LDH活性也低于損傷模型組。

LDH活性的降低，說明在各組治療急性骨骼肌損傷進程中，肌肉組織損害亦漸趨減輕，肌肉組織的修復漸趨增多。其中冰敷及消腫散聯合組在造模3、7、14 d后均出現LDH活性的降低，而消腫散組在造模后7、14 d出現LDH活性的降低;冰敷組僅在造模后14 d才出現LDH活性的降低。LDH的活性降低表明，骨骼肌的損傷程度降低。

由此可見，消腫散和冰敷消腫散聯合運用均能使損傷的軟組織中MDA含量減少和LDH活性降低，對骨骼肌損傷有一定抑制作用，能改善肌肉組織形態修復程度。而冰敷對骨骼肌損傷的抑制作用不明顯;冰敷及消腫散聯合運用，冰敷沒有抵消消腫散對骨骼肌損傷的抑制作用。

3.3 中藥外敷及冰敷治療骨骼肌損傷的認識 有臨床研究認為，冰敷聯合中藥外敷能很好地結合二者的良好功效，能夠通過抑制炎性反應細胞或炎性反應因子的滲出、浸潤，從而早期緩解疼痛，控制腫脹;同時還能通過改善損傷部位的局部微循環，促進病變的轉化吸收，從而促使損傷組織更快的修復[9-12]。

胡勁松等[13]研究發現，消腫散能促進對骨骼肌的修復;同時發現消腫散能使損傷的局部血管再生，能對肌肉組織形態的修復程度有一點改善。由此可見，消腫散既有促進骨骼肌修復的作用，又有一定抑制骨骼肌損傷的作用，雙管齊下，促使損傷的骨骼肌盡快恢復。

臨床上，對于軟組織損傷西醫從采用RICE（Rest，Ice，Compression，Elevation），到運動廣泛的PRICE原則（Protection，Rest，Ice，Compression，Elevation），發展到2012年英國《運動醫學》雜志上強烈建議的POLICE原則[14]，都用到冰敷。與中醫的理氣活血化瘀的治療原則不同，中醫認為寒性收引凝滯，不利于瘀血得化，宜活血為要。西醫的冰敷與中醫的活血化瘀的治療原則相矛盾。而冰敷和中藥外用對于軟組織損傷均有一定效果，均可緩解疼痛，消除腫脹，減少患者痛苦，提高患者生命質量。有研究表明[15]踝關節扭傷消腫止痛膏組與冰敷組的踝關節腫脹程度、VAS評分療效比較，差異無統計學意義（P>0.05）。有研究認為冷敷治療并未能獲得更大的終點效益，同時也沒有證據表明冷敷影響了關節功能的恢復[16]。有研究表明對于踝關節扭傷三色敷藥組治療比冷敷組治療效果更好，更好地改善患者的主觀疼痛和消除瘀斑等，說明活血化瘀的中藥有助于疼痛改善和瘀血消散[17-18]。

消腫散全方藥物組成少（芙蓉葉、赤小豆、落得打），效宏力專。其中主藥芙蓉葉，性味甘，微辛平，清熱解毒、消腫排膿。落得打，又稱積雪草，既有活血消腫止痛，又有清熱解毒利水的功效。赤小豆甘酸偏涼、其性下行，其效能專在利濕消腫、行血止痛。僅以幾味藥合用，共奏清熱消腫、行血止痛之效。有研究顯示，經芙蓉葉提取物治療后的大鼠，與糖尿病模型組比較，給藥組大鼠血清SOD、GSH-PX和肝臟SOD、GSH顯著升高，表明木芙蓉葉提取物能提高糖尿病大鼠的抗氧化能力，增強組織清除自由基的能力[19]。有研究者認為，積雪草具有抑制瘢痕增生、修復皮膚損傷、神經保護、調節免疫、抗潰瘍及抗菌、消炎等多種藥理作用[20]。赤小豆也含有多種活性物，其不同溶劑提取物都具有一定的抗氧化能力，只是各自抗氧化能力大小存在明顯差異[21]。消腫散對急性軟組織損傷能較快消除局部受損組織液滲出，抑制炎性反應，促使患部損傷組織修復，改善局部循環從而達到治療作用[2，22]。經消腫散治療后，對損傷的骨骼肌，能增強清除自由基的能力以及抗氧化能力，同時還可能有一定抗炎鎮痛的作用。

骨骼肌損傷及修復的病理生理機制尚不清楚，在一般以分為4個階段：壞死、炎性反應、再生和纖維化[23]。在對骨骼肌損傷的治療干預方面主要有3個方面，即控制炎性反應、提高再生和抑制組織纖維化[24-25]。因此治療骨骼肌損傷多以減輕炎性反應、增強肌肉再生、抑制纖維化，以提高或恢復肌肉功能并減少復發[13，26-27]。治療研究方面也大多圍繞促進恢復和抑制損傷展開。因此我們認為冰敷對軟組織損傷不一定能起到抑制的作用，促進恢復也無明確證據;而中藥外用對軟組織損傷確有一定抑制作用。

而本研究也存在一些不足，雖然冰敷臨床上對軟組織損傷有一定效果，但具體的病理生理機制仍尚不明確[14]。消腫散及冰敷消腫聯合應用雖然對損傷的骨骼肌組織有一定損傷抑制和修復的能力，但并不能確定作用在整個骨骼肌損傷的再生和修復過程中處于某個具體階段，即對于其外敷消腫散或冰敷作用的時間節點不能具體到某個階段。對改善癥狀如疼痛、腫脹及活動功能情況也未做進一步研究。急性骨骼肌損傷的修復本身是一個很復雜的過程，需要多種物質或細胞因子的參與，實驗研究需要更深入的探討。以期后續研究對疼痛閾值、骨骼肌周徑、活動度測量值，以及其他（如IL6、TNFα、CK、SOD、NFG、VEGF等）炎性反應因子、生長因子等深入探討，進而證實消腫散具有抗炎消腫、活血止痛等作用，更好的指導臨床。本實驗也為消腫散及其聯合冰敷的進一步臨床運用和提高奠定了良好的基礎，也為揭示消腫外敷治療急性軟組織損傷的作用機制提供一定依據，為臨床應用的有效性提供一定的有利依據。

綜上所述，消腫散和冰敷消腫散聯合運用均能使損傷的軟組織中MDA含量減少和LDH活性降低，對骨骼肌損傷有一定抑制作用，能改善肌肉組織形態修復程度。

參考文獻

[1]奚小冰，孫波，胡勁松，等.魏氏傷科驗方消腫散改良方（巴布膏劑型）治療97例急性軟組織損傷多中心臨床研究[J].中華中醫藥雜志，2011，26（10）：2463-2466.

[2]李飛躍，奚小冰，傅文彧，等.改良消腫散（巴布劑）治療急性軟組織損傷臨床研究[J].中成藥，2005，27（3）：68-70.

[3]王強，張一，李璐，等.丹參多酚酸鹽對大鼠腦缺血再灌注過氧化損傷的保護作用[J].右江醫學，2010，38（6）：665-667.

[4]侯改霞，楊建雄.連翹葉提取物對力竭及恢復小鼠血清SOD，LDH活性和MDA含量的影響[J].河南大學學報：自然科學版，2009，76（5）：509-511.

[5]吳秀琴，楊威，尹玉嬌，等.茶多酚對一次性力竭運動大鼠氧化應激和炎癥反應的影響[J].中國體育科技，2016，52（1）：92-95.

[6]Jówko E，Sacharuk J，Balasińska B，et al.Green tea extract supplementation gives protection against exercise-induced oxidative damage in healthy men[J].Nutrition Research，2011，31（11）：813-821.

[7]Jówko E，Dugocka B，Makaruk B，et al.The effect of green tea extract supplementation on exercise-induced oxidative stress parameters in male sprinters[J].European Journal of Nutrition，2015，54（5）：783-791.

[8]郁嘯云，趙佳盛，李瑾琰，等.桃紅四物湯對早期骨筋膜室綜合征模型家兔血CK、LDH、AST、SOD和MDA含量的影響[J].中醫藥導報，2015，21（22）：9-13.

[9]周力.早期冰敷聯合傷科散治療軍事訓練急性閉合性軟組織損傷的臨床研究[J].山西醫藥雜志，2013，42（9）：1040-1042.

[10]蘆斗苗.冷敷聯合中藥外敷治療急性軟組織損傷的效果[J].護理研究，2014，28（3）：349.

[11]吳想平，王裕輝，劉文豪，等.冰敷、消炎止痛膏聯合紅外線治療四肢急性軟組織損傷的臨床研究[J].齊齊哈爾醫學院學報，2017，38（11）：1307-1308.

[12]俞潔，金利家，萬小敏.消腫止痛散冷敷法治療四肢創傷早期腫脹疼痛100例觀察[J].浙江中醫雜志，2017，52（5）：346.

[13]胡勁松，李飛躍，陳博，等.冰敷和消腫散外敷對損傷骨骼肌IGF-1 m RNA表達及組織形態的影響[J].上海中醫藥雜志，2018，52（9）：74-81.

[14]Bleakley C M，O′Connor S，Tully M A，et al.The PRICE study（Protection Rest Ice Compression Elevation）：design of a randomised controlled trial comparing standard versus cryokinetic ice applications in the management of acute ankle sprain[J].BMC Musculoskeletal Disorders BioMed Central，2007，8（25）：1-8.

[15]趙勇，王鋼.消腫止痛膏治療踝關節扭傷疼痛與腫脹相關性的病例對照研究[J].世界中西醫結合雜志，2015，10，（3）：384-386.

[16]王燕，吳玉云，趙文瓊，等.冷敷對急性踝關節扭傷療效影響的病例對照研究[J].中國骨傷，2015，28（12）：1091-1094.

[17]胡勁松.三色敷藥與冷敷治療急性踝關節扭傷的療效研究[J].中國全科醫學，2010，13（30）：3450-3452.

[18]徐國華.冷敷和石氏三色敷藥外敷對急性踝關節扭傷的療效[J].當代醫學，2013，19（35）：158-159.

[19]王立勉.木芙蓉葉提取物對糖尿病大鼠抗氧化能力的影響[J].海峽藥學，2014，26（12）：28-30.

[20]項佳媚，肖偉，許利嘉，等.積雪草的研究進展[J].中國現代中藥，2016，18（2）：233-238.

[21]王桃云，周賽賽，王金虎，等.赤小豆不同溶劑提取物的抗氧化活性研究[J].食品工業，2015，36（8）：154-158.

[22]李飛躍，張弘，奚小冰，等.獨一味加消腫散治療急性軟組織損傷臨床研究[J].河北中醫，2005，27（6）：413-414.

[23]屈偉，傅繼華.骨骼肌損傷的病理進程及治療措施的研究進展[J].北方藥學，2015，12（3）：118-119.

[24]Miller KJ，Thaloor D，Matteson S，et al.Hepatocyte growth factor affects satellite cell activation and differentiation in regenerating skeletal muscle[J].Am J Physiol Cell Physiol，2000，278（1）：C174-C181.

[25]Fukushima K，Badlani N，Usas A，et al.The Use of an Antifibrosis Agent to Improve Muscle Recovery after Laceration[J].American Journal of Sports Medicine，2001，29（4）：394-402.

[26]Woods C.The Football Association Medical Research Programme：an audit of injuries in professional football--analysis of hamstring injuries[J].British Journal of Sports Medicine，2004，38（1）：36-41.

[27]Meeuwisse WH，Sellmer R，Hagel BE，et al.Rates and Risks of Injury during Intercollegiate Basketball[J].American Journal of Sports Medicine，2003，31（3）：379-385.

（2019-05-02收稿 責任編輯：王楊）