川椒炮制前后生物堿含量的變化

王 孟 石 鈺 董林娟

（陜西服裝工程學(xué)院 健康學(xué)院，陜西 咸陽712046）

花椒為蕓香科植物青椒或花椒的干燥成熟果皮[1]。花椒產(chǎn)地遍及全國，山西、陜西、甘肅、河北、河南、青海等地，其道地藥材產(chǎn)地位于四川省漢源、茂縣。花椒以野生為主，人工栽培品種有紅花椒和青花椒，不同產(chǎn)地品種花椒品質(zhì)，色澤，香氣差異較大。道地產(chǎn)地漢源一帶的川椒品質(zhì)最佳，顆粒略小而圓、色澤鮮艷、香味濃郁。川椒抗旱，適合生長在高溫、土壤貧瘠的地區(qū)，因此漢源一帶山區(qū)是川椒的適宜生長地。川椒生溫、有毒，外紫里白、氣味辛烈，濃厚。具有溫中止痛，祛濕止瀉，殺蟲止癢的功效。對(duì)于蛔蟲病、腳氣、皮膚瘙癢等疾病治療效果顯著。川椒具有很大的研究價(jià)值。通過一定的炮制方法，可以降低其毒副作用，增加療效，或產(chǎn)生新的治療作用[2]。通過查閱文獻(xiàn)和古書籍，發(fā)現(xiàn)花椒有清炒、醋制、鹽制、酒制等不同的炮制方法[3-4]。

川椒的主要有效成分為揮發(fā)油，川椒相對(duì)于一般花椒，香味更濃郁，其特殊的香味主要來源于揮發(fā)油，果皮中揮發(fā)油含量較高，川椒籽與川椒葉都是可利用的資源。川椒揮發(fā)油具有祛濕抗炎、抗菌、局麻止痛等藥理作用[6]，主要治療濕疹引起的皮膚瘙癢，另外還有蟲積腹痛、殺菌消炎等疾病。除了揮發(fā)油，還有生物堿、酞胺，以及木脂素等化學(xué)成分[5]。川椒中的生物堿成分主要是白屈菜紅堿，是川椒中的另一主要活性成分[7]，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用[8]，治療疥瘡、腹痛、胃寒冷痛等疾病，可見川椒中的生物堿具有較好的開發(fā)前景。本文通過對(duì)川椒炮制前后生物堿含量變化的研究，為花椒炮制前后生物堿成分的差異提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

表1 儀器設(shè)備

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1.2 試藥

表2 試藥

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2 方法

2.1 花椒的炮制

2.1.1 清炒法。取川椒放入炒鍋內(nèi)，用小火炒，直到出汗，滲油，呈現(xiàn)油亮光澤，顏色加深，有香氣逸出時(shí)，取出晾干晾涼，保存于干燥容器。

2.1.2 酒制法。取川椒置于盆中，加適量黃酒攪拌均勻，悶潤30min 后用紗布包裹蒸2h，放冷無氣后取出，在無風(fēng)的條件下晾干，即得花椒酒制品。

2.1.3 鹽制法。取川椒置于盆內(nèi)，置于炒鍋內(nèi)，用煤氣灶小火加熱，炒到有響聲時(shí)，再噴淋鹽水，繼續(xù)炒直至炒干，然后倒入盤內(nèi)放涼，再裝自封袋備用。花椒與食鹽比例為1：0.02。

2.1.4 醋制法。取川椒置炒鍋內(nèi)，使用燃?xì)庠钗幕鸪矗訜岷髧娏艽滓海粗链赘桑〕霾灧牛蛊浒l(fā)汗，再曬干，裝自封袋備用。花椒與食鹽比例為1：0.12。

2.2 酸提堿沉法提取總生物堿

取川花椒果皮500g，50℃低溫干燥后粉碎成粗粉，加入95%乙醇，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH（PH=3），60℃超聲提取45min，提取3 次，濾過后合并濾液，減壓抽濾，去掉濾渣，在濾液中加氨水調(diào)節(jié)PH 至中性，所得溶液為總生物堿提取液。

2.3 花椒中總生物含量的測(cè)定

2.3.1 光譜條件。采用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品為白屈菜紅堿波長：425nm。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。精密稱取5mg 白屈菜紅堿對(duì)照品放置于25ml 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻線，搖勻，白屈菜紅堿對(duì)照品的儲(chǔ)備液制備成。

2.3.3 樣品溶液的配制。吸取“2.2”項(xiàng)下的待測(cè)樣品1ml 于試管中，加入2ml 溴甲酚綠緩沖液和lOml 氯仿，振搖2min 充分反應(yīng)后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置1h，待其完全分層，取氯仿層置于錐形瓶中，加少量無水Na2SO4，充分振搖1 min，待氯仿層澄清后，在425nm 處測(cè)定其吸光度值。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。吸取白屈菜紅堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在425nm 處測(cè)定吸光度，繪制濃度- 吸光度曲線圖。以濃度C 對(duì)吸光度A 進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為C=1.01A+0.114，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993。線性范圍為0.2～0.6mg/mL，結(jié)果見表3 及圖1。

表3 不同濃度白屈菜紅堿對(duì)照品吸光度值

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圖1 白屈菜紅堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn)。配制低、中、高三個(gè)濃度的白屈菜紅堿對(duì)照品，采用紫外分光法，設(shè)定檢測(cè)波長值為425nm，測(cè)定三種不同濃度溶液的吸光度A 值，代入上述線性回歸方程計(jì)算濃度值。三種濃度樣品每天測(cè)定3 次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，作為日內(nèi)變異；連續(xù)測(cè)定3 天，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，作為日間變異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于2%，符合方法學(xué)要求。

2.3.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。精密稱取白屈菜紅堿適量, 按照上述紫外分光法測(cè)定其含量。制備不同濃度供試品溶液三份，1 天內(nèi)分別測(cè)5 次樣品；每天各測(cè)1 次，連續(xù)測(cè)5 天。結(jié)果顯示阿卡波糖原料藥RSD 均值為0.39%，可見建立的方法具有良好的重復(fù)性。

2.3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。配制濃度為0.2mg/mL 的白屈菜紅堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，于室溫下放置24h，分別在0，2，4，6，8，10，12 和24h 測(cè)定其吸光度，考察標(biāo)準(zhǔn)品溶液穩(wěn)定性，通過數(shù)據(jù)分析，可見RSD=0.88%，小于2%，表明白屈菜紅堿對(duì)照品溶液在24h 內(nèi)穩(wěn)定性符合要求。

2.4 川椒生品與炮制品生物堿含量的測(cè)定

根據(jù)“2.2”項(xiàng)下方法提取川椒中的生物堿，采用UV 法測(cè)定川椒生品及炮制品中生物堿的吸光度。川椒中總生物堿主要活性成分為白屈菜紅堿，白屈菜紅堿在乙醇中溶解度高，且具有抗菌、抑菌、驅(qū)蟲的等藥理活性[9]。以白屈菜紅堿為標(biāo)志物，測(cè)定生物堿的含量。根據(jù)“2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度值，將吸光度A值帶入上述線性回歸方程中，計(jì)算各樣品的白屈菜紅堿的含量及白屈菜紅堿得率（%）。

表4 川椒不同炮制品中白屈菜紅堿的含量

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根據(jù)以上數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)川椒生品與其他炮制品中白屈菜紅堿的含量變化，酒制品中白屈菜紅堿的含量最高，其次是清炒品和醋制品，鹽制品和生品中白屈菜紅堿的含量較低，生品中白屈菜紅堿的含量低于鹽制品，說明炮制品中生物堿的含量變化與炮制所用輔料關(guān)系密切，由于白屈菜紅堿易溶于乙醇中，因此酒制法能夠增加白屈菜紅堿的溶出，而鹽制法使川椒細(xì)胞縮水，不利于白屈菜紅堿的溶解與溶出，反而降低了其含量。

3 討論

花椒炮制前后生物堿含量變化明顯，表明炮制方法以及輔料的選擇，對(duì)于川椒中生物堿的溶出度有較大的影響。酒制法、醋制法、鹽制法以及清炒法這幾種炮制方法，在其炮制過程中，由于炮制方法和輔料的不同，使川椒的生物堿含量發(fā)生了改變。其中酒制法中，加入黃酒以及炒制加熱的原因，增加了白屈菜紅堿的溶出，這是由于白屈菜紅堿在乙醇能夠完成溶解。鹽制品的生物堿含量降低，這與鹽抑制生物堿的溶出關(guān)系密切。清炒品因加熱促進(jìn)了有效成分溶出，其含量略高于而醋制品，而醋的加入降低藥物pH 值，反而阻礙了白屈菜紅堿的溶出。