黑色素瘤相關抗原A10和樹突狀細胞在非肌層浸潤膀胱癌中的表達及其意義〔1〕

張建軍，蔡龍俊，晁流，孫永明，王祥宇，施龍，蔡維奇

(1.徐州醫科大學附屬宿遷醫院，南京鼓樓醫院集團宿遷市人民醫院，江蘇 宿遷 223800；2.江蘇師范大學科文學院，江蘇 徐州 221116)

膀胱癌是泌尿系統中常見的惡性腫瘤，是美國男性第4位、女性第11位惡性腫瘤[1]。在中國，近年來膀胱癌的發病率和病死率均呈逐步上升態勢，并且70%以上為非肌層浸潤膀胱癌[2]。黑色素瘤相關抗原A10(MAGE-A10)是一種腫瘤相關抗原，能引起細胞、體液免疫應答，是有望成為腫瘤疫苗的潛在抗原之一[3]。樹突狀細胞(DC)是功能最強大的專職抗原呈遞細胞，與腫瘤的發生發展關系密切，其數量的減少及功能的障礙是腫瘤細胞逃逸機體免疫監視的一個重要原因[4]。我們應用免疫組織化學法檢測MAGE-A10和DC在非肌層浸潤膀胱癌組織中的表達，并探討其與膀胱癌臨床病理特征及腫瘤復發、預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年1月—2015年2月徐州醫科大學附屬宿遷醫院行經尿道膀胱腫瘤電切術治療的非肌層浸潤膀胱移行細胞癌患者86 例，其中男63 例，女23 例，年齡(62.1±10.9) 歲。原發性膀胱癌44 例，復發性膀胱癌42 例；腫瘤直徑(2.0±1.5) cm；臨床TNM分期Ta期29 例，T1期57 例。病理分級Ⅰ級28 例，Ⅱ級58 例。標本切片行HE染色明確診斷后分別作MAGE-A10及DC染色觀察。隨訪至2020年2月，共獲隨訪病例77 例，失訪9 例，最長隨訪97 個月。本研究患者均知情同意，并通過醫院倫理委員會審批。

1.2 檢測方法

免疫組織化學檢測采用SP法。S100抗體、MAGE-A10抗體購買于Protein Tech Group公司(美國)，操作步驟按試劑盒說明進行。染色時用已知S100陽性的正常膀胱黏膜作陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定標準

MAGE-A10的陽性表達：顯微鏡下呈現棕黃色，染色于細胞核。DC的表達：DC表現為S100陽性，細胞漿和細胞核均著色，形態上呈樹突狀，核不規則。以正常膀胱黏膜組織中S100陽性DC表達為正常表達，腫瘤組織中S100陽性DC表達與之比較后確定為正常表達或低表達。

1.4 統計學方法

2 結 果

2.1 MAGE-A10及DC的表達

MAGE-A10蛋白在86 例非肌層浸潤膀胱癌組織中的表達率為36.05%。MAGE-A10蛋白的陽性表達與患者性別無相關性。而與腫瘤大小、分級及分期存在相關性。DC在86 例非肌層浸潤膀胱癌組織中的正常表達率為65.12%，其余均為低表達。DC的正常表達與患者性別、腫瘤大小無相關性，而與腫瘤的分級及分期有相關性(見表1)。

表1 MAGE-A10陽性及DC正常表達與患者臨床病理特征的關系 例(%)

2.2 MAGE-A10及DC的表達與腫瘤復發的關系

本組86 例膀胱癌中77 例獲得隨訪，9 例失訪。其中MAGE-A10陽性失訪3 例，MAGE-A10陰性失訪6 例；DC正常表達失訪5 例，DC低表達失訪4 例。獲得隨訪的77 例中有42 例復發。其中MAGE-A10陽性表達者的復發率較高，與MAGE-A10陰性表達者的復發率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。DC正常表達者的復發率與低表達者的復發率比較，差異有統計學意義(P<0.05)(見表2)。

表2 MAGE-A10陽性及DC正常表達與患者復發的關系 例(%)

2.3 MAGE-A10及DC的表達與腫瘤預后的關系

MAGE-A10陽性表達者預后差，其5 年生存率與陰性表達者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。DC正常表達者預后好，其5年生存率與低表達者比較，差異有統計學意義(P<0.05)(見表3)。

表3 MAGE-A10陽性及DC正常表達與患者5 年生存率的關系 例(%)

3 討 論

腫瘤疫苗是通過腫瘤抗原等激發機體自身免疫系統產生腫瘤特異性殺傷效應，是目前腫瘤治療研究的重要方向。選擇有效的腫瘤抗原對于腫瘤疫苗發揮抗腫瘤免疫至關重要。膀胱癌潛在的腫瘤抗原有：癌基因蛋白，如表皮生長因子受體2(HER2)；癌-睪丸抗原(CTAs)；腫瘤相關抗原，如癌胚抗原(CEA)等[5]。在目前報道的膀胱癌臨床試驗中，以HER2為作用靶點的腫瘤疫苗[6]、以細胞為基礎的疫苗vesigenurtacel-L及由DC驅動的疫苗lapuleucel-T[7]均取得了一定的療效。MAGE-A10是腫瘤和睪丸抗原(CT)家族的一個成員。CT抗原僅特異性表達于腫瘤和睪丸中，因而不會導致自身免疫性疾病。文獻表明[8]，MAGE-A10在黑色素瘤、膀胱癌和肺癌等腫瘤組織中存在陽性表達。Schultz-Thater等[8]報告癌睪丸基因在膀胱癌中有較高表達，同腫瘤等級相關，監測CTA的表達可以判斷膀胱腫瘤的預后和復發。開發以CTA為基礎的腫瘤特異性免疫治療有助于提高膀胱腫瘤的治愈率。Mengus等[3]發現MAGE-A10在1/3以上的非肌層浸潤性膀胱癌中表達，并且同腫瘤的分級明顯相關，一旦腫瘤向高級別進展，MAGE-A10表達明顯增高，等級越高表達越多。本研究發現，MAGE-A10蛋白在非肌層浸潤膀胱癌中腫瘤分級或分期越高，陽性表達率越高，并且陽性表達率高的患者復發率更高，預后更差。因此，我們認為，MAGE-A10可作為非肌層浸潤膀胱癌免疫學檢測新的分子標志物，并可作為膀胱腫瘤免疫治療的一個新靶點。DC既具有一定的吞噬、攝取、加工抗原能力，又具有抗原遞呈并刺激幼稚T細胞活化的功能[9]。S100是目前最常用的檢測DC的抗體。S100陽性DC具有活躍的免疫活性及明顯的抗腫瘤作用[10]。研究發現這種細胞在不同腫瘤組織內存在，并且其浸潤程度與患者的預后相關[11]。本研究結果顯示：非肌層浸潤膀胱癌患者腫瘤分級或分期越低，S100陽性DC正常表達越高，并且正常表達的患者復發率更低，預后更好，提示非肌層浸潤膀胱癌組織中S100陽性DC表達數量的多少與腫瘤的發展及預后有關。

綜上所述，MAGE-A10及DC的表達與非肌層浸潤膀胱癌分級及分期相關，并可影響非肌層浸潤膀胱癌患者的復發及預后。MAGE-A10可作為非肌層浸潤膀胱癌免疫學檢測的一個新的分子標志物。以上結果為我們下一步研制膀胱腫瘤的腫瘤疫苗提供了依據。