宮頸癌組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達變化及其臨床意義

楊麗菊，于克，朱云芳

揚州大學附屬醫院，江蘇揚州225000

宮頸癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤，可嚴重影響女性的身心健康，甚至危及生命[1]。近年來，隨著醫療水平的不斷發展，宮頸癌的治療方法越來越多，但其遠期效果并未明顯改善，宮頸癌依舊是女性癌癥相關死亡的第二大原因[2-3]。目前，宮頸癌確切的發病機制尚不清楚。因此，探索宮頸癌的發病機制，尋找特異性治療靶點，對其防治具有重要意義。微小RNA(miRNA)是一種內源性非編碼小分子RNA，長度為18～25個核苷酸，可參與多種生理和病理生理過程，如個體發育、免疫性疾病、腫瘤生成等[4-5]。有研究報道，miR-124-3p的啟動子在宮頸癌細胞中被高度甲基化，可能在宮頸癌的發生、發展過程中起促進作用[6]。但miR-124-3p在宮頸癌中的具體分子機制仍不十分清楚，尚需進一步研究。叉頭框蛋白(FOX)家族是一類DNA結合區具有翼狀螺旋結構的轉錄因子，能夠調節多種細胞過程，如細胞增殖、分化和凋亡等[7]。叉頭框蛋白Q1(FOXQ1)是FOX家族成員之一，具有調節細胞增殖、侵襲等生物學功能，其在結腸癌、肺癌、胃癌等細胞中均異常表達[8-9]。但目前FOXQ1在宮頸癌中的具體作用機制仍不清楚。2016年1月—2019年12月，本研究觀察了宮頸癌組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達變化，并分析二者表達與患者臨床病理特征的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 以同期在揚州大學附屬醫院住院并經術后組織病理檢查確診的83例宮頸癌患者為研究對象。納入標準：①符合宮頸癌診斷；②初次診治；③入院前未接受放化療、免疫或生物治療。排除標準：①合并其他宮頸疾病者；②有惡性腫瘤病史者；③伴心、肺、腎等臟器功能不全者。患者年齡33～66(55.27±3.1)歲，其中<55歲37例、≥55歲46例；腫瘤直徑：<3 cm 56例，≥3 cm 27例；腫瘤浸潤深度：T1、T2期53例，T3、T4期30例；組織分化程度：低中分化44例，高分化39例；FIGO分期：Ⅰ、Ⅱ期67例，Ⅲ、Ⅳ期16例；有淋巴結轉移38例，無淋巴結轉移45例。本研究經揚州大學附屬醫院倫理委員會審核，患者或其家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達檢測 取宮頸癌組織及癌旁組織(距腫瘤組織邊緣3 cm以上且經組織病理檢查證實為正常宮頸組織)，-70 ℃冰箱保存。取宮頸癌組織與癌旁正常組織各約50 mg，TRIzol法提總RNA。將總RNA逆轉錄為cDNA，逆轉錄條件：25 ℃ 10 min、50 ℃ 45 min、85 ℃ 5 min。以cDNA為模板，按Direct PCR Kit說明進行PCR擴增。所有引物由上海艾研生物科技有限公司設計合成。miR-124-3p上游引物5′-GGGTATTGAGGAAGGTGTT-3′、下游引物5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′，內參GAPDH上游引物5′-CGCAAAGGTCGGAGTCAACG-3′、下游引物5′-GCAGTTGTCATGGATGATCC-3′；FOXQ1上游引物5′-CGCGGACTTTGCACTTTGAA-3′、下游引物5′-AGCTTTAAGGCACGTTTGATGGAG-3′，內參U6上游引物5′-GAGCCACAGCGTAACG-3′、下游引物5′-CTAGCACATAGTACAGG-3′。PCR反應體系共20 μL：2×Direct PCR Mix 10 μL，DNA聚合酶1 μL，cDNA模板1 μL，上下游引物各1 μL，ddH2O補足至20 μL；反應條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min共40個循環。以GAPDH或U6為內參，采用2-ΔΔCT法計算目的基因相對表達量。

2 結果

2.1 不同組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達比較 宮頸癌組織miR-124-3p相對表達量低于癌旁正常組織，FOXQ1 mRNA相對表達量高于癌旁正常組織(t分別為82.192、85.643，P均<0.05)。見表1。

表1 宮頸癌組織與癌旁正常組織miR-124-3p和FOXQ1 mRNA相對表達量比較

2.2 宮頸癌組織miR-124-3p、FOXQ1 mRNA表達與患者臨床病理特征的關系 見表2。

2.3 宮頸癌組織miR-124-3p表達與FOXQ1 mRNA表達的關系 宮頸癌組織miR-124-3p表達與FOXQ1 mRNA表達呈負相關關系(r=-0.539，P<0.05)。

3 討論

宮頸癌是全球女性第三大常見惡性腫瘤。我國每年宮頸癌新發病例約13.2萬例，死亡達5.3萬例，已成為當前嚴重威脅我國女性健康的重要疾病之一[10]。目前，宮頸癌仍然以手術、放療、化療為主要治療手段，但治療效果并不能令人滿意[11]。分子靶向治療是近年發展起來的一種新的腫瘤治療方式。但宮頸癌發生、發展確切的分子機制尚不清楚，缺少相應的分子治療靶點。因此，深入研究與宮頸癌發生、發展相關的分子生物標志物，對其靶向治療具有重要意義。

近年研究表明，miRNA能夠參與腫瘤的發生、發展，可作為腫瘤早期診斷的生物標志物和潛在的治療靶點[12]。miR-124-3p是高度保守的miRNA，在動植物細胞中廣泛表達。研究表明，miR-124-3p

在多種腫瘤細胞中異常表達，如胃癌、結腸癌、乳腺等[13]。本研究發現，宮頸癌組織miR-124-3p低表達，并且其表達與腫瘤浸潤深度、組織分化程度、FIGO分期和淋巴結轉移密切相關，提示miR-124-3p可能參與宮頸癌的發生、發展。有研究報道，miR-124-3p表達缺失可導致SphK1介導的卵巢癌細胞侵襲和遷移，使腫瘤惡性程度進一步增加[14]，本研究結論與其相似。miR-124-3p可能通過下調靶基因星形細胞上調基因1表達，對腫瘤細胞增殖和分化產生抑制作用，從而延緩腫瘤惡性進展[13]。有研究發現，miR-124-3p表達上調的HeLa、SiHa細胞遷移能力明顯降低，對腫瘤細胞的侵襲和遷移具有一定抑制作用；同時，宮頸癌細胞E-鈣黏蛋白、β-連環蛋白過表達，而N-鈣黏蛋白、MMP-9低表達[14]。提示miR-124-3p能夠通過抑制宮頸癌細胞上皮間質轉化，間接抑制宮頸癌的侵襲和轉移。

FOX家族是一種功能廣泛的轉錄因子家族。FOXQ1是FOX家族的重要成員之一，具有多種生物學功能，如調節腫瘤細胞增殖、侵襲、遷移等[15]。KANEDA等[16]研究發現，FOXQ1在結腸癌組織中表達上調，可通過調控下游靶基因E-鈣黏蛋白表達，促進結腸癌進展。有研究報道，胃癌組織FOXQ1表達上調，其表達上調能夠降低p21表達，導致腫瘤細胞惡性增殖以及凋亡受阻[17]。本研究發現，宮頸癌組織FOXQ1 mRNA高表達，其表達與腫瘤浸潤深度、組織分化程度、FIGO分期和淋巴結轉移有關，提示FOXQ1可能參與宮頸癌的發生、發展。有研究報道，FOXQ1實質上是一種癌基因，能夠通過調節轉化生長因子β表達，進而影響惡性腫瘤進展[18]。上皮間質轉化是腫瘤轉移的關鍵步驟。FOXQ1在調節上皮間質轉化過程中起重要作用。FOXQ1蛋白與E-鈣黏蛋白的啟動子區域相互作用可促進上皮間質轉化，繼而促進宮頸癌細胞的侵襲和遷移。此外，FOXQ1還可抑制細胞凋亡、延長細胞生長周期、上調靶基因細胞周期蛋白D表達，進而促進腫瘤的發生、發展。本研究相關分析發現，在宮頸癌組織中miR-124-3p表達與FOXQ1 mRNA表達呈負相關關系。其原因可能是FOXQ1是miR-124-3p調控的下游靶基因，miR-124-3p可能通過負向調控FOXQ1促進宮頸癌進展。

綜上所述，宮頸癌組織miR-124-3p低表達、FOXQ1 mRNA高表達，二者表達變化與腫瘤惡性進展密切相關，并且二者表達呈負相關關系。但二者在宮頸癌發生、發展過程中的具體分子機制還需要進一步探索。