基因檢測對G6PD 酶活性正常女性的臨床診斷價值分析

王秋華 陳麗竹 劉曉麗 黃鈞 羅世強 張玲 謝莉 暢榮妮 唐寧( 通訊作者)

( 柳州市婦幼保健院醫學遺傳科 廣西 柳州 545001)

葡萄糖-6- 磷酸脫氫酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency，G6PD）缺乏癥是世界上最常見的單基因病之一，也是一種X 性染色體不完全顯性遺傳性溶血性紅細胞酶缺陷病。我國的發病率為4.4%～16.6%，而廣西的發病率則達到10.75%[1]。G6PD缺乏癥的實質是G6PD基因發生突變，患者在臨床上有多種表現，嚴重時可導致新生兒期核黃疸引起永久性神經系統的損傷或死亡。

目前G6PD 酶活性的檢測是最常用的篩查方法，由于女性雜合子的酶活性具有較大的異質性，該方法容易發生漏診[2-3]，故建立有效的基因檢測方法對于明確診斷疾病，臨床合理用藥，處理新生兒黃疸及完善人類遺傳學資料來說具有重大意義。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取2016 年6 月—2020 年2 月在我院進行G6PD 基因型及G6PD 酶活性檢測的260 例女性樣本。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取 采用廈門致善生物科技有限公司Lab-Aid 820 全自動核酸提取儀及配套的磁珠法核酸提取試劑盒對血濾紙片樣本進行核酸提取。

1.2.2 G6PD 基因型檢測 采用廈門致善生物科技有限公司生產的核酸提取試劑盒，檢測中國人中常見的12 個位點的基因突變及對應的野生型，結果參照試劑盒說明書進行樣本基因型判讀。

2.結果

203 例酶活性異常的女性樣本中檢測出180 例基因突變（88.67%），其中復合雜合突變75 例，純合突變23 例，雜合突變82 例；57 例酶活性正常的女性樣本中檢測出48 例基因突變（84.21%），其中復合雜合突變2 例，雜合突變46 例，雜合突變占突變類型的95.83%。在260 例樣本中檢測出最常見的突變依次為95A ＞G（19.30%），1388G ＞A（18.86%），1376G＞T（20.61%），具體分布情況見表1。

3.討論

G6PD 酶活性降低是由于G6PD 基因發生變異導致G6PD 酶結構改變引起的，目前發現的G6PD 基因變異絕大多數為點突變，即1 個或2 個堿基替換，極少數為基因片段缺失，暫未發現諸如啟動子突變、框架突變及多聚A 位點突變等突變類型。迄今全世界已報道180 多種G6PD 基因突變類型，在我國已發現35種點突變[4]，在260 例樣本中檢測出最常見的突變為95A ＞G（19.30%），1388G ＞A（18.86%），1376G ＞T（20.61%），與文獻報道一致[5]。酶活性異常的女性樣本中G6PD 基因突變檢出率為88.67%，仍有23 例未檢測出突變，有可能是屬于12種以外的突變類型，需要進一步測序驗證。

G6PD/6PGD 比值法、高鐵血紅蛋白還原試驗、硝基四氮哇藍法（NBT）、熒光斑點法等是臨床上最基本、最常用的篩查G6PD 酶活性的方法，這些方法均不能有效準確檢出紅細胞G6PD缺乏的雜合子。而在57 例G6PD 酶活性正常的女性患者中檢測出48 例基因突變，漏診率（48/57，84.21%），這提示應用傳統的酶活性檢測方法可能漏檢女性雜合子，導致漏診率高可能有以下幾種原因：

1）常用的篩查方法是基于G6PD 酶活性的測定方法，該方法的參考值只是用（±s）表示。對于酶活性缺乏程度未劃分出明確的界限值，而女性雜合子的酶活性可以呈多樣性表現。由于表型與基因型不完全一致，使得女性雜合子個體的準確診斷相當困難。現在很多研究者進行大規模新生兒G6PD 酶活性篩查切值的探討，尤其是女性雜合子切值確定[6-9]，若能通過基因檢測與酶活性檢測的對比獲得女性雜合子的酶活性切值，可通過酶活性檢測提高女性雜合子的檢出率。2）根據Lyon 假說，女性的兩個G6PD 等位基因，有一個處于隨機失活狀態，女性雜合子實際上含有酶活性正常和缺乏的兩類紅細胞，兩者的比例決定酶活性的檢測結果。若女性雜合子中酶活性正常的紅細胞比例大于缺乏的紅細胞，其酶活性可接近正常；反之則顯著缺乏，所以酶活性的檢測方法容易出現漏診。3）G6PD 缺乏癥患兒在急性溶血期新生幼稚紅細胞增多，新生紅細胞酶活性較高，因此在急性溶血期G6PD 重度缺乏者可能酶學檢測結果僅輕度缺乏，女性雜合子酶活性可正常。4)G6PD 基因突變類型因素，G6PD 基因突變具有高度的遺傳異質性。有研究表明女性雜合子的G6PD 酶活性含量可能與G6PD 基因甲基化的水平有關[10]。此外有研究發現，基因突變類型影響G6PD 酶的功能結構域，從而導致不同水平的酶缺乏癥和疾病表現[11]。

表1 260 例女性樣本檢測出基因突變的分布情況[n(%)]

國內外已廣泛證實G6PD 缺乏雜合子可發病，且G6PD 缺乏癥雜合子是新生兒高膽紅素血癥發生的獨立危險因素之一，女性雜合子也極有可能發展為有癥狀的G6PD 缺陷，漏檢G6PD 缺乏癥雜合子可能對新生兒高膽紅素血癥的診斷治療，人體生命健康等方面有極大影響。G6PD 缺乏雜合子的表型變化大，但其基因突變類型相對確定，不受表型變化和酶活性干擾，嚴提珍等[12]運用多色探針熒光PCR 熔解曲線法對G6PD 基因突變檢測，這種方法簡易操作，準確度高，快速靈敏。本結果提示利用多色探針熒光PCR 熔解曲線的基因突變檢測方法可以有效的檢出女性雜合子，而傳統的酶學檢測極易漏檢G6PD 酶活性正常的女性雜合子。為避免漏診或誤診，應重視基因檢測對G6PD 酶活性正常女性的臨床診斷價值，將其廣泛應用到臨床診斷中，與G6PD 酶活性檢測相結合，共同指導未來的遺傳咨詢及精準診斷工作。