重組人2型松弛素對人支氣管上皮Bease-2B細胞上皮-間質轉化的抑制作用的時間相關性研究

劉國清 馬繼龍 謝立波

摘 要：目的：通過體外細胞實驗探索重組人2型松弛素（RLN2）參與抑制轉化生長因子-β1（TGF-β1）誘導支氣管上皮細胞Bease-2B細胞的上皮-間質轉化（EMT）過程。方法：本研究選取Bease-2B細胞株作為模式細胞，體外培養。1）通過觀察細胞形態變化初步確定TGF-β1誘導濃度以及RLN2對TGF-β1誘導的Bease-2B細胞EMT的有效干預濃度;2）RLN2抑制TGF-β1誘導Bease-2B細胞EMT的時間：將細胞分別于TGF-β1誘導的同時和誘導24小時后加入RLN2培養24小時，及在TGF-β1誘導24小時后加入RLN2組分別作用24小時和48小時后：①通過觀察細胞遷移能力推測RLN2不同作用時間對TGF-β1誘導的細胞EMT抑制效果;②通過Western bloting法檢測各組間質標志ACTA2，上皮標志E-Cadhrin表達情況分析抑制效果與作用時間的關系。結果：1）觀察細胞形態變化：與正常組比，10ng/mL TGF-β1誘導組Bease-2b細胞由鋪路石狀上皮形態逐漸變成梭形、針葉型，且細胞之間的間隙變大，胞間的連接變得松散;加不同濃度的RLN2抑制細胞48小時后，與單純TGF-β1組相比，梭形形態的細胞減少，部分恢復鋪路石狀上皮形態，但細胞間連接仍然松散，其中TGF-β1同時加RLN2 80ng/mL組表現明顯。2）遷移能力，各組與單純TGF-β1誘導組比較平均遷移距離均減小，誘導24小時后加RLN2抑制組比誘導抑制同時進行的組的遷移距離大，誘導24小時后加RLN2培養48小時組比抑制24小時組遷移距離小。3）Western bloting檢測分析抑制效果與時間的關系：單純RLN2組和正常組比較E-Cadhrin和ACTA2蛋白的表達均無顯著性差異;各組與單純TGF-β1組比較E-Cadhrin表達量均增加，ACTA2蛋白的表達減少;誘導抑制同時進行的組與誘導24小時后加RLN2抑制組比較E-Cadhrin表達量增加，ACTA2蛋白的表達減少;誘導24小時后加RLN2培養48小時抑制組比抑制4小時組ACTA2蛋白的表達少，E-Cadhrin表達量無差別。……