血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相關性分析

張一琳　楊震

[摘要] 目的 探討血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相關性分析。 方法 方便選取2018年11月—2019年6月該院婦科門診及男科門診收治的首次確診梅毒且未經治療干預的梅毒患者110例，根據梅毒滴度水平分為高滴度組和低滴度組，各55例。同期收集來該院進行體檢的健康職工志愿者60名。檢測各組患者血清IL-2、IL-10及IL-32水平，比較和分析其水平與梅毒RPR滴度的相關性。 結果 高滴度組和低滴度組梅毒患者血清IL-2、IL-10、IL-32水平均明顯高于正常對照組 （t高滴度組=13.561、15.267、18.220，P<0.05;t低滴度組=7.123、8.596、9.651，P<0.05）;高滴度組患者血清IL-2、IL-10、IL-32水平亦明顯高于低滴度組（t=10.261、11.787、12.872，P<0.05）;IL-2、IL-10、IL-32在梅毒患者和正常人群中的表達水平進行ROC曲線分析，IL-2：AUC=0.967，診斷靈敏度為92.3%，特異度為88.6%;IL-10：AUC=0.925，靈敏度為83.6%，特異度為87.2%;IL-32：AUC=0.767，靈敏度為70.5%，特異度為74.1%。 結論 梅毒患者具有較高的血清IL-2、IL-10及IL-32 水平，尤以高滴度患者的血清水平更高，提示血清水平與滴度存在正相關性，可用于梅毒的診斷。

[關鍵詞] IL-2;IL-10;IL-32;梅毒RPR滴度;相關性分析

[中圖分類號] R4 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-0742（2020）10（a）-0020-04

Correlation Analysis of Serum IL-2， IL-10 and IL-32 Levels and Syphilis RPR Titer

ZHANG Yi-lin1， YANG Zhen2

1.Department of Laboratory Medicine， Shenyang Maternity and Infant Hospital， Shenyang， Liaoning Province， 110011 China; 2.Hand and Foot Microsurgery， Shenyang Red Cross Hospital， Shenyang， Liaoning Province， 110011 China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between serum IL-2， IL-10 and IL-32 levels and syphilis RPR titer. Methods Convenient selected 110 patients with syphilis who were diagnosed with syphilis for the first time and without treatment intervention， admitted to the gynecological clinic and male clinic of the hospital from November 2018 to June 2019. According to the syphilis titer level， they were divided into high titer group and low titer group， 55 cases in each group. During the same period， 60 healthy volunteers who came to the hospital for physical examination were collected. The serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32 in each group were detected， and the correlation between their levels and the syphilis RPR titer was compared and analyzed. Results The levels of serum IL-2， IL-10， and IL-32 of syphilis patients in the high titer group and low titer group were significantly higher than those in the normal control group（tthigh titer group=13.561， 15.267， 18.220， P<0.05; ttlow titer group=7.123， 8.596， 9.651， P<0.05）; The serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32 in the high titer group were also significantly higher than those in the low titer group（t=10.261， 11.787， 12.872， P<0.05）; ROC curve analysis was performed on the expression levels of IL-2， IL-10， and IL-32 in syphilis patients and normal people. IL-2： AUC=0.967， the diagnostic sensitivity was 92.3%， and the specificity was 88.6%; IL-10： AUC=0.925， the sensitivity was 83.6%， the specificity was 87.2%; IL-32： AUC=0.767， the sensitivity was 70.5%， and the specificity was 74.1%. Conclusion Patients with syphilis have higher serum levels of IL-2， IL-10 and IL-32， especially those with high titers， which indicate a positive correlation between serum levels and titers， which can be used for the diagnosis of syphilis.

[Key words] IL-2; IL-10; IL-32; Syphilis RPR titer; Correlation analysis

梅毒是目前臨床較為常見的慢性傳染性疾病和性病，由于梅毒螺旋體感染所致，其主要傳播途徑包括性行為、血液制品及母嬰垂直傳播所致的先天性梅毒。梅毒的臨床表現復雜多樣，病程漫長，分為1期、2期和3期梅毒[1]。1期和2期梅毒屬于早期梅毒，可致硬下疳、皮膚斑疹和黏膜損傷，而3期梅毒屬于晚期梅毒，可侵及心血管系統等全身各大重要臟器，導致梅毒性主動脈炎、主動脈瓣關閉不全、梅毒性心肌炎和神經梅毒等危重疾病[2]。而且感染梅毒的孕婦具有較高的流產、死胎及新生兒梅毒發生率，故嚴重影響和威脅患者及其下一代的健康安全。根據臨床流行病學途徑，梅毒患者的每年全球新發病例數高達1 100萬，因此，由于梅毒患者巨大的新發病例數，針對可疑患者的臨床檢查診斷和普通人群的篩查具有極為重要的意義[3-4]。該研究方便選取2018年11月—2019年6月該院婦科門診及男科門診收治的首次確診梅毒且未經治療干預的梅毒患者110例，基于梅毒發生的免疫學反應，觀察和分析血清IL-2、IL-10及IL-32 水平與梅毒RPR滴度的相關性，以期為臨床治療提供指導。現報道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

方便選取該院婦科門診及男科門診收治的首次確診梅毒且未經治療干預的梅毒患者110例，根據梅毒滴度水平分為高滴度組和低滴度組，各55例。高滴度組：男30例，女25例;年齡20～60歲，平均年齡（37.6±10.2）歲;病程1～12月，平均病程（3.3±2.5）個月。低滴度組：男31例，女24例;年齡20～60歲，平均年齡（37.1±10.5）歲;病程1～12月，平均病程（3.5±2.7）個月。同期收集該院進行體檢的健康職工志愿者60名，男34名，女26名;年齡20～60歲，平均年齡（37.2±10.3）歲。3組研究對象的年齡、性別比較，高滴度、低滴度組研究對象的病程時間比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。該研究經該院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 ?納入與排除標準

納入標準：①患者有感染史，有硬下疳、患處淋巴結腫大等臨床表現;②實驗室檢查：皮損組織液或淋巴結穿刺液可見梅毒螺旋體，或快速血漿反應素診斷試驗（RPR）及梅毒螺旋抗體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）雙陽性;③梅毒螺旋體滴度診斷標準：高滴度：梅毒抗體滴度（RPR）>1∶4，低滴度：梅毒抗體滴度（RPR）<1∶4;④患者及家屬認可研究方案，愿意配合研究，并簽署知情同意書。排除標準：①非首次確診梅毒患者，既往已確診并接受相關治療;②伴有慢性炎癥、全身性感染或腫瘤等可對血清炎性因子水平產生影響的疾病;③伴有肝、腎、心、肺等重要臟器功能障礙或其它器官內外科嚴重疾病。

1.3 ?方法

經確診后的梅毒患者及健康志愿者立即進行相關指標檢測，抽取患者和志愿者外周肘靜脈血5 mL，首先于室溫下靜置20 min待血液凝固，隨后置入離心機中，以3 000 r/min續離心20 min，取上清液即為該患者血清，分為4等分，采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清IL-2、IL-10及IL-32 水平。然后采用梅毒螺旋體試劑盒檢測RPR滴度，首先將血清依次稀釋至：1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，然后進行滴度檢測，判斷患者RPR滴度，根據滴度水平分為高滴度組和低滴度組，比較和分析血清IL-2、IL-10及IL-32水平與梅毒RPR滴度的相關性。

1.4 ?統計方法

采用SPSS 25.0統計學軟件進行數據分析，計量資料的表達方式為（x±s），采用t檢驗;計數資料的表達方式為[n（%）]，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。針對血清IL-2、IL-10及IL-32水平在梅毒高滴度和低滴度患者中的表達水平進行受試者工作曲線分析（ROC），曲線下面積（AUC）>0.7視為具有診斷預測意義和價值。

2 ?結果

高滴度組和低滴度組梅毒患者血清IL-2、IL-10和IL-32水平均明顯高于正常對照組，分別經t檢驗比較，差異有統計學意義（P<0.05）。高滴度組患者上述血清水平亦明顯高于低滴度組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

以IL-2、IL-10和IL-32的表達水平為檢驗變量，是否梅毒患者為檢驗變量，進行ROC曲線分析。結果顯示：IL-2：AUC=0.967，診斷最佳靈敏度為92.3%，特異度為88.6%;IL-10：AUC=0.925，靈敏度為83.6%，特異度為87.2%;IL-32：AUC=0.767，靈敏度為70.5%，特異度為74.1%。可以認為，IL-2、IL-10和IL-32對梅毒患者有顯著診斷價值，差異有統計學意義（P<0.05）。見圖1。

3 ?討論

梅毒是近年來我國臨床發病率最高的慢性傳染性疾病和性病之一，居乙類傳染病的第3位，由于梅毒的社會屬性，不僅嚴重威脅患者的健康安全，而且給患造成巨大的精神心理負擔并且影響生活質量，因此早期發現和治療梅毒顯得尤為重要[5]。在梅毒確診的傳統檢查方法中，TPPA屬于梅毒螺旋體抗原血清檢測，是目前最常用的確診實驗技術，但檢查過程較為復雜，檢查時間長，檢查費用較高，不適用于常規患者和大規模人群的初篩以及治療效果的評估[6]。TRUST和RPR屬于非梅毒螺旋體抗原血清檢測，目前主要用于普通人群的梅毒篩查和療效觀察，但存在較高的漏診率或誤診率[7]。因此，選擇簡單、易操作的梅毒臨床篩查指標對于早期發現和治療梅毒具有重要的意義和社會價值。

該研究采用了RPR對初次發病的確診梅毒患者進行滴度定量評價，分為高滴度和低滴度組，基于梅毒進展過程中發生的免疫反應，選擇血清白介素分子（IL-2、IL-10及IL-32）水平進行檢測，觀察其在不同梅毒RPR滴度患者和正常人群中的表達差異，分析其與滴度的相關性。

該研究發現IL-2在梅毒患者中存在較高的表達，尤其高滴度患者的表達明顯高于低滴度患者，ROC曲線分析發現AUC=0.967，符合預期結果，證實IL-2在梅毒中高表達，與梅毒RPR滴度存在正相關性。這與其他學者[8-9]的研究結果相似，這是因為在梅毒的病理生理反應中，梅毒螺旋體感染后進入機體可激活多種免疫應答反應，以Th1型細胞免疫反應為著[8]。Th1型細胞免疫反義可有效抵抗和清除包括梅毒螺旋體在內的多種入侵病原體，同時可大量合成和分泌IL-2、TNF、IFN-γ等Th1型細胞因子[9]。基礎研究發現IL-2具有顯著激活 CD4+T細胞活性作用，進一步促進和加強殺傷性T細胞、NK細胞，其它天然殺傷性細胞對梅毒螺旋體等侵入的病原體的殺傷作用[10]。而且已有臨床實驗發現肌肉注射梅毒螺旋體的疫苗Tp92蛋白可誘發強烈的體液免疫和細胞免疫反應，并出現IL-2水平的持續升高[11]。

該研究發現IL-10在梅毒患者中亦存在較高的表達，高滴度患者的表達亦高于低滴度患者，ROC曲線分析發現AUC=0.925，證實IL-10在梅毒中存在高表達，與梅毒RPR高滴度存在正相關性，同時可能暗示患者存在較高的慢性化轉化風險。這可能因為Th2型細胞免疫是導致梅毒慢性化和病程遷延不愈的重要因素，并有研究[12]提出了Th1/Th2 漂移假說的觀點，針對大量梅毒患者隨訪觀察均發現隨著病程的進展，存在不同程度的Th1型反應減弱和Th2型反應增強。IL-10是參與Th2型細胞免疫的重要細胞因子，可由單核細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞和B 淋巴細胞等多種免疫細胞分泌，具有抑制T淋巴細胞，而促進B淋巴細胞作用[13]。

IL-32是近年來新發現的促炎細胞因子，參與了多種炎癥反應和自身免疫反應，可由單核細胞、T細胞、NK細胞及部分上皮細胞等分泌，而且IL-2、IL-12、IL-18、IFN-γ等細胞因子均可進一步促進IL-32的合成和分泌[14-15]。該研究發現血清IL-32水平隨RPR滴度升高而有所升高，差異有統計學意義（P<0.05），ROC曲線分析發現AUC=0.767，靈敏度為70.5%，特異度為74.1%，其原因可能是IL-32可參與調解單核細胞、巨噬細胞和NK細胞的殺傷作用，并通過調節樹突狀細胞的成熟，同時加強 Thl 和 Th2 免疫反應[16]。由于同類相關研究報道較少，故IL-32的效能尚需未來進一步探討。

綜上所述，梅毒患者相較于正常人群具有較高的血清IL-2、IL-10及IL-32 水平，尤以高滴度患者的血清水平顯著，血清水平與滴度存在正相關性。因此，在梅毒疑似患者的常規診斷中，通過檢測IL-2、IL-10及IL-32 的表達，有助于進一步指導梅毒診斷，同時其表達水平有助于評估梅毒確診患者的療效。

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（收稿日期：2020-07-06）