一例豬圓環(huán)病毒2 型與豬偽狂犬病毒混染實驗室診斷

堯國民 王湘 白玲 侯強紅

（懷化職業(yè)技術(shù)學(xué)院 418000）

豬圓環(huán)病毒2 型（PCV2）是引發(fā)仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎與腎病綜合征及母豬繁殖障礙性疾病的主要病原之一[1]。偽狂犬病毒（PRV）對我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展影響巨大，其感染不同發(fā)育階段豬群出現(xiàn)臨床癥狀有所差異，其中繁殖母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎等，種公豬出現(xiàn)睪丸炎、精子活力差等，仔豬出現(xiàn)腹瀉、嘔吐和神經(jīng)癥狀等，而育肥豬感染該病主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀[2-3]。懷化市某散養(yǎng)場中育肥豬群近期出現(xiàn)較嚴(yán)重的皮炎綜合征，且出現(xiàn)癥狀較輕的呼吸綜合征，經(jīng)過實驗室診斷結(jié)果，確診為其主要由PCV2 和PRV 混合感染所致，經(jīng)過治療后疫病得到有效控制。

1 發(fā)病豬場及臨床癥狀

湖南懷化某散養(yǎng)戶飼養(yǎng)育肥豬30 余頭，未對豬群免疫接種PCV2、PRV、藍(lán)耳病毒等常見傳染病疫苗，其飼養(yǎng)方式為從外地購買保育豬或斷奶仔豬育肥，非自繁自養(yǎng)模式。2019 年10 月初，該場部分豬群陸續(xù)出現(xiàn)咳嗽、精神沉郁、體溫升高、采食量下降等臨床癥狀，發(fā)病期間養(yǎng)殖戶對發(fā)病豬群使用不同種類抗生素，但疫情未見好轉(zhuǎn)。待到中旬，豬群發(fā)病癥狀嚴(yán)重，發(fā)病豬群皮膚表現(xiàn)出現(xiàn)大小不一紅色斑塊，但無瘙癢癥狀，雖然未出現(xiàn)豬群死亡現(xiàn)象，但育肥效果很差。

2 實驗室診斷

由于發(fā)病豬群未死亡，無法對其進(jìn)行病理變化剖檢，遂采集發(fā)病明顯豬群靜脈血5 頭份，刮取紅色斑塊等病變明顯部位組織樣品和新鮮糞便樣品各5 份，適當(dāng)處理后帶回懷化職業(yè)技術(shù)學(xué)院病原檢測實驗室進(jìn)行實驗室診斷。

2.1 ELISA 檢測結(jié)果

靜脈血液樣品于室溫靜置4～6h 后吸取上清入潔凈離心管內(nèi)，將離心管以低速（2500 rpm）離心10min，吸取上清保存于潔凈離心管內(nèi)。根據(jù)武漢科前生物制品有限公司生產(chǎn)的偽狂犬病毒（gE 蛋白）、豬圓環(huán)病毒2 型、豬鏈球菌2 型、豬藍(lán)耳病毒（PRRSV）血清抗體ELISA 診斷試劑盒提供說明書分別對5份血清樣品進(jìn)行檢測，其結(jié)果顯示：以上5 份樣品均為PRV 野毒和PCV2 抗體陽性，但豬鏈球菌2 型和PRRSV 抗體均為陰性。

2.2 分子生物技術(shù)檢測結(jié)果

將樣品處理后，分別采用組織DNA 提取試劑盒和酚氯仿法對10 份樣品（組織樣品和糞便樣品各5 份）進(jìn)行基因組DNA 和RNA 提取，其后按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明對基因組RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)實驗室提供的PCV2-Cap 基因、PRV-gE基因和PRRSV-N 基因引物分別對以上病原進(jìn)行PCR/RT-PCR檢測。其檢測體系為20ul：10ul 2×easy taq mix、上下游引物各1.0ul（10umol/l）、基因組模板2.0ul 和雙蒸水6ul；擴(kuò)增條件均為94℃5min；94℃30s、56℃30s、72℃30s，共30 個循環(huán)，72℃10min。反應(yīng)結(jié)束后，取5ulPCR 產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，觀察檢測結(jié)果。結(jié)果顯示：10 份樣品中檢測出PCV2、PRV 和PRRSV 陽性樣品分別為7 份、3 份和0 份，提示該豬場所發(fā)生的疫情主要是由PCV2 和PRV 混合感染引起。

3 緊急措施

對全場進(jìn)行衛(wèi)生打掃，同時加強消毒頻率；對該場所有豬群免疫接種偽狂犬病基因缺失疫苗和豬圓環(huán)弱毒疫苗；在飼料中添加適量恩諾沙星和黃芪多糖，防止繼發(fā)感染，同時提高豬群免疫力；對部分發(fā)病嚴(yán)重豬群進(jìn)行對癥治療，如降溫與止咳等。經(jīng)過積極治療，發(fā)病豬群逐漸健康，豬群的育肥效果有較大提高。

4 討論

本次案例中由于育肥豬僅出現(xiàn)皮炎及咳嗽等癥狀，而且由于無法對豬群解剖進(jìn)行病理變化觀察，只能通過實驗室診斷方法對病原進(jìn)行檢測。由于養(yǎng)殖戶對豬群進(jìn)行抗生素治療，但發(fā)病情況未見好轉(zhuǎn)，所以我們初步判定細(xì)菌感染幾率較小，可能是病毒性疾病導(dǎo)致疫病發(fā)生。為了提高結(jié)果可靠性，采用ELISA 檢測技術(shù)對血清抗體進(jìn)行檢測，同時采集病變組織與糞便樣品進(jìn)行病原檢測。實驗室檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬群發(fā)病主要原因是PCV2 和PRV 混合感染所致，育肥豬感染PCV2 后可出現(xiàn)較為嚴(yán)重的皮炎腎病綜合征，同時免疫力下降，容易繼發(fā)性感染其它病原，但死亡率較低；育肥豬感染PRV 后不表現(xiàn)明顯臨床癥狀，可出現(xiàn)呼吸道癥狀，但可長期帶毒，感染其他健康豬群，同時導(dǎo)致育肥豬料肉比升高，給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對于病毒性疫病的防控，主要依靠疫苗免疫接種和提高豬群飼養(yǎng)管理水平為主，平時的血清學(xué)監(jiān)測也是十分必要的。