布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗的影響因素及注意事項

劉坤洋

（遼寧省農業發展服務中心，遼寧 沈陽 110164）

目前，布魯氏菌抗體檢測仍是我國布病診斷最常用、最主要的檢測方法。其中虎紅平板凝集試驗（RBPT）具有試驗試劑成本低廉、操作簡便、快速、檢出率高等優勢，被廣泛應用于布病的大規模篩查，同時由于本方法不需要特殊的試驗設備，更適于基層實驗室和現場試驗。現將RBPT中的影響檢測結果的因素及應注意的問題進行簡要分析。

1 RBPT的影響因素

1.1 RBPT抗原

RBPT抗原的質量是影響布病血清學試驗結果準確性的關鍵性因素之一，不同廠家的抗原對同一批血清樣本的檢測結果存在不同程度的差異，如果RBPT的假陽性率過高，不僅造成工作量加大，也會造成不必要的經濟損失。

1.2 血清

血清質量也是影響布病血清學試驗結果準確性的重要因素之一，而采集的時間與分離方式直接影響血清的質量。用于RBPT的血清最好是新鮮、清亮透明、無溶血、防止細菌污染，并且避免反復凍融。纖維蛋白原能與虎紅抗原產生非特異性凝集反應，而且纖維蛋白原含量越高凝集反應發生的越快、越強。因此，如果待檢血清中含有纖維蛋白原也會出現RBPT假陽性結果，嚴重影響檢測結果的準確性。

1.3 溫度

試驗時，RBPT抗原與被檢樣品的溫度、環境溫度對試驗結果的準確性也有很大影響。RBPT用的抗原需要恢復至室溫（22±4℃），并且使用前要充分混合均勻。血清與溫度和時間成反比關系，放置血清的時間越短，溫度越低，假陽性率越高。由此可見，在一定溫度范圍內，溫度越高，血清學反應進行的越快。本試驗要求在室溫下進行，因此，在試驗前要注意觀察環境溫度是否適合進行本試驗。

1.4 藥物

血清中的藥物濃度也會干擾檢測結果的準確性，在經過治療后或治療期間血清凝集不明顯。因此，在血液樣品采集前除了要查明動物的免疫背景，還要查清動物的患病及治療情況，以免出現誤診、漏診現象。

1.5 試驗操作

RBPT雖然操作簡便，但在試驗過程中操作是否規范、抗原及血清加入的量是否準確并混勻、結果判定的時間是否準確等因素也會影響試驗結果的準確性。

2 注意事項

2.1 對照的設立

每次試驗時必須設立標準陰性、陽性血清對照，用以判斷試驗是否成立。同時在試驗前應使用弱陽性對照血清確定試驗條件的敏感性。

2.2 試劑的保存及使用

RBPT抗原應用OIE標準血清校準過的血清進行最后標化，于4℃暗處保存，避免凍結和污染。試驗時使用的抗原應與用0.5%石碳酸生理鹽水1/45稀釋的OIE標準陽性血清出現清晰的陽性反應，而不與1/55稀釋的血清反應。為了避免RBPT抗原被污染，降低溫度變化對抗原靈敏度的影響，可以每次試驗前只取出足夠本次試驗用的抗原量。

2.3 血清

采集的血液樣本在分離血清之前，避免長時間晃動以及與冰袋接觸，以免發生溶血。為了分離到合格的血清樣本，最好在早晨喂料前或停食后6小時進行采血，將裝有血液的注射器或采血管擺成斜面，以促進血清更好的析出。除特殊要求外，用于血清學試驗時采集血液樣本時不要加抗凝劑，以免影響對檢測結果做出正確的判定。血清樣品在使用前一定要上下顛倒混勻，對于冰凍保存的血清樣品應充分融化后再進行試驗。

2.4 試驗操作

雖然RBPT操作易于掌握，結果判定直觀，但在試驗過程中所用抗原和血清量都很少，試驗時加入的量一定要準確。抗原與血清混合均勻后室溫輕微搖晃4分鐘后立即判定結果，若抗原抗體反應超過4分鐘后也會產生假陽性結果。

3 討論

RBPT作為快速、準確篩查布魯氏菌病特異性抗體的簡便方法，不僅反應敏感穩定，同時由于抗原的pH為3.65±0.05，可抑制引起非特異性反應的IgM、增強特異性IgG的活性，也具有較好的特異性。但在試驗操作過程中要嚴格按照標準的操作規程進行，注意影響試驗的各種因素，降低各種因素對試驗結果準確性的影響。