甲狀腺細針穿刺細胞學聯合BRAF 基因檢測的診斷價值

王旭紅,趙宏彩

（山西省腫瘤醫院，山西 太原）

0 引言

2012 年中國甲狀腺結節與分化型甲狀腺癌診治指南中指出，在對良惡性甲狀腺結節進行術前評估時，具有最高靈敏度和特異度的方法為甲狀腺細針穿刺細胞學（推薦級別A）。超聲引導下甲狀腺細針穿刺細胞學有利于成功取材和做出準確診斷（推薦級別B）。當前，在甲狀腺癌診斷中主要采取高分辨率超聲和甲狀腺細針穿刺細胞學的方法,但是，由于本身存在一定局限性及受技術水平的限制，對于本病患者來說，約1/5不能通過此手段進行準確定性[1]。臨床分析甲狀腺乳頭狀癌，鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌基因同源體B1V600E 具有較高的突變率，應采用BRAF 基因聯合檢測，有利于鑒別患者疾病良惡性。本文對甲狀腺細針穿刺細胞學聯合BRAF 基因檢測的診斷效果進行了整體分析，入組患者28 例。現將相關情況匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇經過手術病理確診的28 例患者，均經過術前超聲引導細針穿刺細胞學檢查以及BRAFV600E 基因檢測，共計30個甲狀腺結節，男女分別是10 例及18 例，年齡區間在22-71歲，經過計算，患者的平均年齡為44.5 歲，其中有2 例患者存在雙側甲狀腺結節，均自愿入組。患者的基本資料差異較小，可忽略不計，具有較高的相似性，符合研究條件，能夠進行下面的分析研究。

1.2 方法

甲狀腺細針穿刺細胞學聯合BRAF 基因檢測：（1）常規超聲掃查甲狀腺，穿刺定位可疑病灶，將最佳穿刺切面找出并實施甲狀腺橫切面穿刺，利用頸中線向外側穿刺處理病灶在外側患者，利用頸外側向內側穿刺，在探頭邊緣，利用PTC 介入穿刺針，在超聲實時引導下進針，沿著探頭長軸，迅速穿刺，至患者甲狀腺包膜上方并做好停頓調整，病灶、針尖顯示在同一切面，迅速進針，至患者病灶內，在病灶區后清晰顯示針尖，將針芯拔出少許，構建人工負壓，在不同針道，做好來回5-7次提插處理，將穿刺針拔出，利用注射器（5ml），充滿空氣后，在載玻片上推注細針內細胞，開展實時涂片處理，浸泡固定過程中，使用95%乙醇，固定5min，穿刺針數是2 針。（2）利用相同辦法穿刺1 針，在細胞液基瓶內推注細針內細胞團，拔針處理后，利用無菌敷貼覆蓋穿刺點并開展5min 加壓壓迫處理，利用巴氏染色法處理固定涂片，做好診斷，根據甲狀腺細胞病理學Bethesda 分類法，將細胞學診斷工作做好，采取組織提取試劑盒、巢式PCR，將DNA 提取以及擴增操作完成，利用QIAamp DNA Mini Kit 試劑盒提取基因組DNA，從細胞液基瓶中，相關操作需根據試劑盒說明書要求完成[2]，提取DNA后，實施PCR 擴增，實驗室自行設計引物，25ul 是PCR 反應體系，對于PCR 產物來說，鑒定過程中采用瓊脂糖凝膠電泳，然后純化處理，測序純化PCR 產物，利用Sequencer 軟件，做好初步分析操作，NCBI 是序列參考來源，軟件分析完成后，人工應對樣品測序圖譜進行再審查，將突變位點、類型進行最后確定，存在突變時，雙向測序結果可確認，做好報告工作[3]。

1.3 統計學方法

將術后組織病理學結果作為診斷甲狀腺結節性質的金標準。實施統計學分析的軟件選擇SPSS18.0，計數資料的表示采用例數、率的形式，以χ2檢驗，將得到的P 值作為判斷是否有統計學差異的標準，若P＜0.05，則代表有。

2 結果

手術治療后，經檢測發生BRAFV600E 突變的結節共有20 個，術后病理結果顯示甲狀腺乳頭狀癌19 個，結節性甲狀腺腫1 個。利用FNAB 診斷，在發生突變的結節中，良惡性分別是4 個、10 個，共計6 個無法確定性質。沒有檢測到BRAFV600E 突變的共有10 個，利用FNAB 診斷，良惡性分別是2 個、3 個，沒有辦法對性質加以確定的有5 個。術后病理結果：甲狀腺乳頭狀癌、結節性甲狀腺腫、亞急性甲狀腺炎、甲狀腺腺瘤分別是6 例、2 例、1 例、1 例。共計25 個甲狀腺乳頭狀癌。共計19 個BRAFV600E 基因突變，突變率63.33%（19/30）。與病理結果進行對比，聯合檢測對良惡性甲狀腺結節進行判斷的正確率較高，為89.29%（25/28）。

3 討論

當前，臨床在診斷甲狀腺結節的過程中，有著較高診斷價值的為超聲引導下甲狀腺細針穿刺細胞學檢查，然而，因檢查方法有一定的局限性以及受技術水平的限制，對于一些結節的性質還是很難做出準確判斷，這大約占到20%，而鑒于甲狀腺乳頭狀癌具有較高的鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌基因同源體B1V600E突變率，在甲狀腺細針穿刺細胞學的基礎上行 BRAFV600E 基因檢測，對于良惡性甲狀腺結節的診斷有重要的輔助作用。

對于甲狀腺結節來說，術前對良惡性進行評估十分必要，推薦級別A 的診斷辦法是甲狀腺細針穿刺細胞學，特異度較高，靈敏度較高，可促使診斷準確率顯著提高，可明顯提高取材成功率。

目前，臨床診斷甲狀腺癌過程中，一般采用甲狀腺細針穿刺細胞學及高分辨率超聲，可確診多數甲狀腺癌患者，但是，仍然存在部分患者缺乏細胞成分以及不確定性，不能對性質進行明確，依靠術后病理，才能將診斷結果明確，容易導致患者發生過度手術現象[4]。

利用甲狀腺細針穿刺細胞學檢測判斷甲狀腺結節患者，準確性較高，但是，在鑒別患者良惡性方面，存在假陰性[5]，因此，臨床上提出了將此種方法與BRAF 基因聯合檢測，可促使靈敏度顯著提高。

本組數據：采用上述兩種方法聯合檢測對良惡性甲狀腺結節進行診斷的正確率為89.29%（25/28）。結果證實，兩種方法聯合檢測值得臨床參考[6,7]。

綜上，甲狀腺細針穿刺細胞學、BRAF 基因聯合檢測，可明顯提高疾病準確診斷率。后續分析研究中，可開展大樣本實驗[8]。