微柱凝膠技術在新生兒ABO-溶血病檢測中的應用價值

付清文

【摘要】目的：分析微柱凝膠技術在新生兒溶血病檢測中的應用價值。方法：選取本院接收的疑似新生兒溶血病患兒檢測樣本100例，抽取入院患兒血液標本，分別采用微柱凝膠技術、傳統試管法檢測，比較檢測結果。結果：微柱凝膠技術檢出陽性率98.84%高于傳統試管法檢出陽性率74.42%，具顯著性差異（P<0.05）;微柱凝膠技術敏感性、特異性分別為97.65%、85.71%，均高于傳統試管法檢測的61.18%、20.0%，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論：對新生兒溶血病采取微柱凝膠技術檢測，可提高檢測結果的穩定性及準確性，臨床價值高，值得推廣。

【關鍵詞】微柱凝膠技術;新生兒溶血病;傳統試管法;血型檢測

[中圖分類號]R722.18 [文獻標識碼]A[ 文章編號 ]2096-5249（2021）21-0189-02

新生兒溶血病是因母嬰血型不合導致，常見類型為ABO 溶血，一般母親血型為 O 型，患兒血型為A 型或 B 型，母體內IgG血型抗體通過胎盤進入胎兒體內，造成同種免疫性溶血[1]。新生兒溶血病患兒體內存在母親抗體，無法按照常規方式輸血，不當輸血則會加重溶血反應[2]。因此對新生兒溶血病，需早期診斷，為臨床輸血治療提供參考依據。既往是采用試管抗人球蛋白試驗，但檢測時間長、操作復雜，造成檢測結果偏差，影響疾病治療[3]。微柱凝膠技術是現今檢測新生兒溶血病的新型技術，檢測快、操作簡單，筆者特對新生兒溶血病采取微柱凝膠技術檢測。

1 資料與方法

1.1一般資料選取我院在2019年 10月至2020年 10月接收的疑似為新生兒溶血病患兒100例，患兒出現黃疸或進行性黃疸加重;男嬰52例，女嬰48例;日齡1～12d，平均（4.83±1.35）d;母親均為O 型血，Rh 陽性;排除存在凝血機制異常、血液疾病、全身感染者。

1.2方法檢測儀器與檢測試劑：TD-2Y 型微柱凝膠卡式專用離心機（中山生科試劑儀器有限公司生產）、FYQ 免疫微柱孵育器（長春博研科學儀器有限責任公司生產）、久保田 ka-2200免疫血液學專用離心機、37℃水浴箱、56℃水浴箱、抗 A 抗 B 血清和ABO 標準紅細胞均購自上海血液生物醫藥有限責任公司。（1）微柱凝膠技術：用EDTA 管抽取患兒血液樣本2mL 后，離心2min，3500r/min，分離血清及紅細胞;將微柱凝膠檢測卡進行離心1min，3000r/min。直接抗人球蛋白試驗：取一滴紅細胞配成1% 懸液加入50μL 于檢測卡，置離心機1800r/min 1min，2500r/min 1min，取出，判定結果;游離試驗：將ABO 標準紅細胞加入微柱凝膠檢測卡三孔中各10μL，分別標明A、B、O 細胞，每孔加患兒血清40μL，37℃孵育器孵育15min，置離心機1800r/min 1min，2500r/min 1min，取出，判定結果;放散試驗：取壓積紅細胞400 至500μL 用生理鹽水洗滌6次（約1：8稀釋洗），每次低速離心2min，2000r/min，棄去上清液;取同體積的壓積紅細胞（300μL） 和生理鹽水（300μL）混勻，置于56℃水浴箱孵育10min，期間不斷搖動，然后離心3min，2000r/min，取上清液即為放散液;將 ABO 標準紅細胞加入微柱凝膠檢測卡，各孔分別加入10μL，分別標明A、B、O 細胞，每孔加放散液40μL，37℃孵育器孵育15min，置離心機1800r/min 1min，2500r/min 1min，取出，判定結果。（2）傳統試管法：抽取患兒靜脈血3mL 作為血液樣本，離心，分離血清及紅細胞，使用生理鹽水清洗紅細胞，連續清洗6次，配制成5%懸液。于1滴懸液內加入2滴廣譜抗人球蛋白試劑，離心，觀察結果。取兩組三支分別標明A、B、O 細胞的試管，分別加入患兒血清及放散液，在對應試管內加入標準紅細胞;放置37℃水浴箱，孵育30min，用生理鹽水洗滌3次，加入抗人球蛋白試劑離心，觀察結果。

1.3觀察指標觀察新生兒溶血癥三項試驗陽性的檢測率，分析微柱凝膠技術、傳統試管法檢測敏感性及特異性，敏感性= 真陽性/（真陽+假陰性），特異性=真陰/（真陰+假陽性）=d/（b+d）;參照《兒科急診科學》第4版[4]中新生兒溶血病診斷標準。

1.4統計學方法采取 SPSS23.0統計學軟件包處理研究數據。數值變量資料經（ x ±s）表示，采取 t 檢驗;無序分類資料經百分比率（%）表示，采取χ2檢驗; P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

（1）新生兒溶血病檢出率100例疑似新生兒溶血病患兒，共有86例確診為新生兒溶血病，其中ABO 溶血80例，占93.02%;微柱凝膠技術檢出陽性率85例，占98.84%;傳統試管法檢出陽性率64例，占74.42%;差異具有統計學意義（χ2=20.076， P=0.000）。（2）微柱凝膠技術、傳統試管法檢測敏感性及特異性分析微柱凝膠技術敏感性、特異性分別為97.65%、85.71%，均高于傳統試管法檢測的61.18%、20.0%，差異具有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

新生兒溶血病是新生兒時期常見疾病，常見貧血、黃疸等癥狀，病情進展可繼發膽紅素腦病，危及新生兒正常成長發育。當胎兒遺傳了母體不存在的抗原，該抗原刺激母體產生抗體，而母體 IgG 抗體通過胎盤進入胎兒體內，抗原抗體不相容，引起胎兒免疫反應，導致紅細胞破壞，誘發新生兒溶血病。一般新生兒溶血病與血型關系密切，母體妊娠20周后，主要是由 IgG 抗 A/B 抗體進入胎兒體內，一般溶血反應程度是與母體內免疫抗體進入胎兒體內量的水平相關[5]。臨床治療新生兒溶血病時，多選擇輸血方案，但在輸血時，需考慮患兒體內是否存在游離抗體，以免不合理的同型輸血，加重溶血反應。因此早期診斷、及時治療，為臨床輸血治療提供參考依據。

傳統試管法是檢測新生兒溶血病患兒血型血清學三項試驗的主要技術，但傳統試管法操作環節多，操作時間長，重復水平低，靈敏度差，容易出現漏診[6]。微柱凝膠技術首次應用時間為上世紀90年代，具特異度高、靈敏度高、標本量少等優勢。對新生兒溶血病患兒采取微柱凝膠技術，選取符合相應的稀釋液，合理配制為一定濃度的紅細胞懸液，隨后開展微管柱灌注。通過離心機離心，在微柱中凝膠顆粒的分子篩作用下，使單個紅細胞經過其間，對已形成凝膠的紅細胞無法通過，形成不同的凝集反應。采用微柱凝膠技術檢測新生兒溶血病，檢測結果觀察無需使用顯微鏡?？稍谥币曄掠^察檢查結果，檢測陽性為紅細胞于凝膠上層分散或中間分散，陰性為紅細胞于凝膠底部;通過微柱凝膠技術檢測結果穩定，重復性好[7]。本組研究中，微柱凝膠技術檢出陽性率98.84%高于傳統試管法檢出陽性率74.42%，具顯著性差異（P<0.05）。研究發現，與傳統試管法檢測相比，微柱凝膠技術檢測新生兒溶血病，可準確鑒定患兒血型，降低血型漏檢率，其原因為新生兒血型抗原發育較低，容易出現弱A 型或弱 B 型，導致血型漏檢或誤報，若血型漏檢或誤報，會導致錯誤輸血，進而加重溶血反應，因此微柱凝膠技術可作為檢測新生兒血型的常規技術。本組研究發現，微柱凝膠技術對新生兒溶血病采用的三項試驗檢測，其敏感性均高于試管法檢測，微柱凝膠技術可提高新生兒溶血病檢出率，具較高應用價值。

直接抗人球蛋白檢測、游離抗體試驗及抗體放散試驗三項試驗是檢測新生兒溶血病的常用試驗方法，而三項試驗方法存在一定差異性，一般是抗人球蛋白試劑檢測結果較弱，多是因ABO 系統的新生兒溶血病，患兒體內抗原尚未發育完善，抗原位點較少，在進行直接抗人球蛋白試驗時，使體內抗原抗體復合物難以與抗人球蛋白試劑產生凝集，造成抗人球蛋白試驗檢測結果假陰性，但與其他兩種試驗方法相比并無統計學意義。因此在檢測新生兒溶血病時，無法單純依賴一項試驗方法，需結合三項試驗法，以此提高新生兒溶血病檢出率。對婦產科醫生而言，應進行當前女性優生優育宣教，開展產前夫妻血型鑒定;尤其是對O 型孕婦，丈夫非 O 型，進行IgG 抗 A、抗 B 效價測定并開展孕婦免疫性抗體篩查，尤其是對死胎、流產、早產等孕婦，更應加強產前檢查，以此減少新生兒溶血病的發生，并為早期新生兒溶血病診斷及干預提供有價值參考依據。

綜上所述，與傳統試管法相比，對新生兒溶血病采取微柱凝膠技術檢測，具有檢測結果的穩定性好及準確性高，可提高新生兒溶血病檢出陽性率，臨床價值高，值得推廣應用。

參考文獻

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