復方丹參片含量測定與化學模式識別研究

崔新剛 王穎瑩 王新勝

【摘 要】 目的：通過化學模式識別研究，評價復方丹參片的質量。方法：采用HPLC法對復方丹參片中丹參酮IIA、丹酚酸B、三七皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1及人參皂苷Re進行含量測定，結合聚類分析、主成分分析及正交偏最小二乘判別分析對復方丹參片質量進行評價。結果：主成分分析和聚類分析結果基本一致，正交偏最小二乘判別分析法結果表明不同廠家復方丹參片的指標成分含量存在差異。結論：化學模式識別為不同廠家復方丹參片的質量控制提供參考。

【關鍵詞】 HPLC;指標成分;化學模式識別

【中圖分類號】R284.3?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）21-0062-05

Chemical Component Analysis and Chemical Pattern Recognition from Compound Danshen Tablet

CUI Xingang1 WANG Yingying2 WANG Xinsheng3

1.Luoyang Maternal and Child Health Hospital，Luoyang 471023，China;2.School of Chemical Engineering and Pharmaceuticals， Henan University of Science and Technology， Luoyang 471023，China;3.Luoyang Food and Drug Inspection Institute，Luoyang 471023，China

Abstract：Objective The quality of compound Danshen tablets from different manufacturers was evaluated using chemical pattern recognition.Methods The contents of tanshinone IIA， salvianolic acid B， and panax notoginseng saponins were determined using HPLC method. Principal components analysis， cluster analysis and orthogonal partial least square-discriminate analysis were performed using IBM SPSS 18.0 Statistics software and SIMCA-P 14.5 software.Results The results of principal components analysis and cluster analysis showed that the samples from the same manufacturer could be clustered into one category. The results of orthogonal partial least square-discriminate analysis showed the contents of index compounds were different from different manufacturers.Conclusions The results of chemical pattern recognition can offer reference for quality control of compound Danshen tablet.

Key words：HPLC;Index Component;Chemical Pattern Recognition

復方丹參片系由丹參、三七、冰片組成的中藥復方制劑，具有活血化瘀、理氣止痛作用，為《中國藥典》2015版收載的成方制劑[1]。主治氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛[2]。我國有數(shù)家藥廠的復方丹參片投放市場，但臨床反映不同廠家復方丹參片的療效存在明顯差異。化學成分研究[3-4]顯示，不同廠家復方丹參片中有效成分含量差異顯著。為了評價不同廠家復方丹參片的質量差異，陳永等[5]測定三七中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量，評價復方丹參片質量。馬啟武[6]測定復方丹參片中丹參酮IIA、丹酚酸B的含量，比較其質量差異。現(xiàn)有報道中提到的評價方法常以其中一味藥評價其質量，通常為方中的君藥或臣藥，不能全面反映其質量差異。本研究參考《中國藥典》2015年版中對復方丹參片的檢測方法，在《中國藥典》檢測方法的基礎上對檢測條件進行了優(yōu)化，將丹參酮IIA、丹酚酸B及三七總皂苷含量作為質量評價指標。為了更好的綜合比較、評價不同廠家復方丹參片的質量，本研究以復方丹參片中丹參酮IIA、丹酚酸B、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1及人參皂苷Re為指標，進行聚類分析、主成分分析和正交偏最小二乘判別分析，旨在為其質量控制提供依據(jù)和參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀（包括G1315B型二極管陣列檢測器、自動進樣器，美國安捷倫科技有限公司）;KQ-100ES超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;賽多利斯BSA8201電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）;易普易達Smart-S2型超純水機（南京易普易達科技發(fā)展有限公司）。

1.2 藥品與試劑 丹參酮ⅡA（批號：110766-201816）、丹酚酸B（批號：111562-201702）、人參皂苷Rg1（批號：l10703-201728）、人參皂苷Rb1（批號：110704-201722）、三七皂苷R1（批號：110745-201614）、人參皂苷Re（批號：110754-201823）等對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。樣品分別購于不同廠家共10批次，每個廠家購買2個批次，分別為北京A公司（批號：20190933;20190331，編號S1、S2）、廣州的B公司（批號：L18A011;L18A017，編號S3、S4）、云南C公司（批號：201811;201910，編號S5、S6）、湖北D公司（批號：20190910;20190814，編號S7、S8）、上海的E公司（批號：201906107;201811027，編號S9、S10）。甲醇、乙腈為色譜純（天津天津市科密歐化學試劑有限公司）;甲酸為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 丹參酮ⅡA的含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;柱溫：25 ℃;流速：1.0 mL/min;流動相：甲醇-水（73∶27）;進樣量：10 μL;檢測波長：270 nm。

2.1.2 對照品制備 精密稱取丹參IIA對照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含對照品40 μg的溶液，即得對照品溶液。

2.1.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細粉，取約1 g細粉，置于具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量。將所制得供試品溶液進行超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）15min，放冷，再次稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，置棕色瓶中，即得供試品溶液。

2.1.4 方法學考察[1]2.1.4.1 重復性試驗 取復方丹參片（批號：20190933、L18A011、201811、20190910、201906107，即S1、S3、S5、S7、S9）按供試品溶液的制備方法分別平行制備6份供試品溶液，按2.1.1色譜條件檢測丹參酮IIA的平均含量，結果見表1，表明本方法重復性良好，精密度較高。

2.1.4.2 穩(wěn)定性試驗 取復方丹參片（批號： 2019 0933、L18A011、201811、20190910、201906107）供試品溶液，按本試驗色譜條件分別于0、2、4、6、8 h進行檢測，計算丹參酮IIA峰面積RSD，結果見表1，表明本方法穩(wěn)定性良好。

2.1.4.3 加樣回收率試驗 取已知含量復方丹參片樣品（批號：20190933、L18A011、201811、20190910、201906107），分別加入一定量的對照品溶液后，測定含量，計算回收率，結果見表1，回收率良好。

2.1.5 樣品測定 按2.1.3制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液和對照品溶液各10 μL，按2.1.1色譜條件，分別測定10個樣品中的丹參酮IIA，以外標法計算含量。色譜圖如圖1所示，測定結果見表1。

2.2 丹酚酸B的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;柱溫：25 ℃;流速：1.0 mL/min;流動相：乙腈-甲醇-甲酸-水（10∶30∶1∶59）;進樣量：10 μL;檢測波長：286 nm。

2.2.2 對照品制備 精密稱取丹酚酸B對照品適量，置于棕色量瓶中，加水制成每1 mL含對照品60 μg的溶液，即得對照品溶液。

2.2.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細粉，取0.15 g細粉，置于50 mL棕色量瓶中，加水適量，將所制得供試品溶液進行超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz）30min，放冷，加水至刻度，搖勻，離心機離心，取上清液，即得供試品溶液。

2.2.4 方法學考察 按照2.1.4.方法，結果見表1，表明本方法重復性良好，精密度較高，穩(wěn)定性良好，回收率良好。

2.2.5 樣品測定 按2.1.4樣品測定方法。色譜圖如圖2所示，測定結果見表1。

2.3 三七總皂苷的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;柱溫：25 ℃;流速：1.0 mL/min;流動相：以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按規(guī)定條件進行梯度洗脫，詳見表2;進樣量：10 μL;檢測波長：203 nm。

2.3.2 對照品制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品、三七皂苷R1對照品及人參皂苷Re對照品適量，加70%甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1各0.2 mg，三七皂苷R1及人參皂苷Re各0.05 mg的混合溶液，即得對照品溶液。

2.3.3 供試品制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細粉，取約1 g，精密稱定，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量，將所制得供試品溶液進行超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3.4 方法學考察 按照2.1.4.方法，結果見表1，表明本方法重復性良好，精密度較高，穩(wěn)定性良好，回收率良好。

2.3.5 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定。色譜圖如圖3所示，測定結果見表1。

2.4 主成分分析 以10批復方丹參片中的指標成分含量測定結果為變量，運用SPSS Statistics 18.0軟進行主成分分析，計算成分特征值、貢獻率及累計貢獻率，前2個主成分累計貢獻率為96.692%，可以反映復方丹參片質量，結果見表3。將10批復方丹參片中指標成分含量結果導入SIMCA-P 14.5軟件，得分矩陣圖如圖4所示。S1-2為一類，S3-6為一類，S7-10為一類。

2.5 聚類分析 以復方丹參片的指標成分含量結果為變量，運用SPSS Statistics 18.0統(tǒng)計軟件，采用組間連接法，以歐式平方距離為度量標準進行系統(tǒng)聚類分析，結果如圖5所示。由圖可知在組間距為25時，10批樣品分為3類，S1-2為一類，S3-6為一類，S7-10為一類，該結果與主成分分析結果一致。

2.6 正交偏最小二乘判別分析 以含量測定結果為變量，導入SIMCA-P1 14.5軟件，進行正交偏最小二乘判別分析，模型參數(shù)為R2X為1，R2Y為0.892，Q2為0.312，說明矩陣良好，得分矩陣圖如圖6所示。分類結果與主成分分析、聚類分析結果一致。以VIP值大于1位標準，篩選得到指標成分三七皂苷R1、丹酚酸B和人參皂苷Re為復方丹參片的差異組分。見表4。

3 討論

復方丹參片為中藥復方制劑，是常用臨床藥。由表1可知，不同廠家生產(chǎn)的復方丹參片都符合《中國藥典》2015版標準，每片含丹參酮ⅡA不得少于0.20 mg，丹酚酸B不得少于5.0 mg，人參皂苷Rg1、人參皂苷 Rb1、三七皂苷R1及人參皂苷Re的總量不得少于6.0 mg。但主成分分析和聚類分析結果表明，不同廠家生產(chǎn)的復方丹參片間存在一定的差異，正交偏最小二乘判別分析結果表明三七皂苷R1、丹酚酸B和人參皂苷Re是控制復方丹參片的關鍵成分。

基于主成分分析和聚類分析結果，同一廠家不同批次的樣品聚為一類，說明同一廠家化學組分差異較小，質量較穩(wěn)定。由圖4-5可知，不同廠家如兩個廠家編號S3-4與S5-6，廠家S7-8與廠家S9-10復方丹參片聚為一類，結果表明這些生產(chǎn)廠家可能在原料來源和生產(chǎn)工藝具有類似之處[7]。本研究獲得的結果為復方丹參片的質量控制提供依據(jù)。

參考文獻

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（收稿日期：2021-03-22 編輯：陶希睿）