綿羊鏈球菌病病例的診治

沈辰峰， 陳世軍， 夏 俊， 王 杰， 韓 濤， 參都哈西， 哈力旦木， 樊 華， 楚高潔

(1.新疆畜牧科學院獸醫(yī)研究所， 新疆烏魯木齊830000 ； 2. 新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院， 新疆烏魯木齊830000)

羊鏈球菌病，即羊敗血性鏈球菌病[1]，以敗血癥、頜下淋巴結(jié)腫大、咽喉腫脹、大葉性肺炎、臟器出血、膽囊腫大為主要臨床特征。綿羊易感性高，山羊次之，一年四季均可發(fā)生，冬春季多發(fā)。新發(fā)病區(qū)常呈地方性流行，老疫區(qū)則多為散發(fā)[2]。本病主要經(jīng)呼吸道、消化道和損傷的皮膚感染，病羊和病死羊是本病的主要傳染源[3]。本文介紹了一起羊鏈球菌病病例，對其發(fā)病情況、臨床癥狀、病理剖檢、實驗室診斷以及防治結(jié)果進行了總結(jié)，供同行參考。

1 發(fā)病情況

新疆呼圖壁雀兒溝鄰近的3家養(yǎng)殖戶，共有小尾寒羊成年母羊150只，羔羊130只。2018年3月20日，3家養(yǎng)殖戶的羔羊陸續(xù)發(fā)病，主要表現(xiàn)為高熱、精神不振、急性死亡，3 d左右發(fā)病羔羊達80只，發(fā)病率61.5%，病死羔羊30只，病死率37.5%。成年羊發(fā)病13只，但未見死亡，主要病癥為發(fā)熱，咳嗽，下頜淋巴結(jié)腫大，表現(xiàn)出肺炎癥狀。

2 癥狀

病初體溫高達41 ℃，精神沉郁、呼吸困難、咳嗽、不愿行走；飲食欲減退或廢絕；眼部有少量分泌物；口腔流涎，鼻腔流出漿液性或膿性分泌物；咽喉部及下頜淋巴結(jié)腫大，部分病例可見眼瞼、口唇、面頰腫脹；有的糞便稀軟，帶有黏液或血液；病死前常有磨牙、呻吟及頭頸歪斜或抽搐等現(xiàn)象。病程大多2～3 d，急性死亡病羔無明顯臨床癥狀。

3 剖檢變化

病死羔羊淋巴結(jié)腫大，出血，壞死；鼻腔、咽喉、氣管黏膜水腫、充血；心包大量積液，心臟瓣膜出血；肺臟大面積淤血呈暗紅色，出現(xiàn)肝變區(qū)，有的肺臟與胸膜粘連；肝臟稍腫，表面有少量出血點，膽囊腫大明顯，充滿墨綠色膽汁；脾臟腫大，有小出血點；腎臟質(zhì)脆腫脹；有的胃腸黏膜腫脹，充血出血。

4 實驗室檢驗

4.1 血液常規(guī)檢查 病羊頸靜脈無菌采血4份，實驗室送檢。結(jié)果顯示：主要變化為白細胞(WBC)、中性粒細胞百分比(Neu%)升高，淋巴細胞百分比(Lym%)下降，核左移(Band.N%/Neu%>0.1)，提示細菌感染性疾病；嚴重病羊紅細胞(RBC)降低，提示發(fā)生貧血；血小板(PLT)下降，提示凝血功能降低，機體存在多臟器出血性傾向。病羊血液常規(guī)結(jié)果見表1。

4.2 染色鏡檢 取病死羔羊的肺臟、肝臟、脾臟、心血等觸片，干燥、固定、瑞氏染色后，顯微鏡下觀察，可見成對排列或個別呈短鏈狀排列的球菌。

4.3 過氧化氫酶試驗 挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內(nèi)，滴加30%的雙氧水2 mL。結(jié)果顯示：30 s內(nèi)沒有產(chǎn)生氣泡(氧氣)，為陰性，說明此菌株不含過氧化氫酶，不是葡萄球菌或微球菌，而是鏈球菌。

表1 病羊血液常規(guī)檢測結(jié)果

4.4 細菌分離培養(yǎng) 無菌采集血液、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)等病料，接種在葡萄糖胱氨酸鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，于37 ℃培養(yǎng)24 h，可見灰白色、圓形、隆起、光滑、半透明、露滴狀的小菌落，直徑0.5～1.0 mm，多數(shù)在菌落周圍出現(xiàn)明顯β型溶血環(huán)。勾取小菌落涂片染色鏡檢(革蘭染色)，可見大部分呈長短鏈狀排列的革蘭陽性球菌。該菌不形成芽孢，無鞭毛不運動。

4.5 PCR擴增鑒定

4.5.1 引物設計與合成 細菌鑒定通用引物：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；5′-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成[4]。

4.5.2 16S rRNA 基因的PCR擴增 在葡萄糖胱氨酸鮮血瓊脂培養(yǎng)基上無菌挑取單個菌落直接加入到反應體系中進行菌落PCR 擴增。反應體系(25 μL)： 2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，引物各1 μL， 超純水補至25 μL；反應條件：94 ℃預變性5 min； 94 ℃循環(huán)變性30 s，56 ℃退火復性30 s，72 ℃延伸40 s，進行30個循環(huán)；72 ℃終延伸10 min，最后4 ℃保存。反應結(jié)束后產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，用瓊脂凝膠回收試劑盒。將PCR產(chǎn)物回收后，送生工生物工程(上海)股份有限公司測序。

4.5.3 PCR擴增結(jié)果 對測序結(jié)果進行BLAST分析， 顯示該菌16S rRNA基因序列與鏈球菌16S rRNA 基因序列的同源性為99%，確定分離菌為鏈球菌。

圖1 分離株16S rRNA的PCR電泳M：DL-2 000 DNA marker； 1～5：分離株； 4、5：4號病例的分離株； 6：陰性對照

5 診斷

該病通過病菌分離、菌體形態(tài)特征(革蘭陽性、呈長短鏈排列的球菌)及細菌PCR鑒定，最終確診為綿羊鏈球菌病。

6 防治

6.1 預防 (1)加強飼養(yǎng)管理，重視環(huán)境衛(wèi)生，做好圈舍及場地、用具的消毒工作。(2)做好夏、秋抓膘，冬、春保膘防寒、保暖工作[5]。(3)堅持自繁自養(yǎng)，禁止從疫區(qū)引進羊只以及購入羊肉及皮毛產(chǎn)品。需引種時，應按照畜禽檢疫規(guī)范進行檢疫，并隔離21 d，檢疫合格后方可混群。(4)在疫區(qū)，用羊敗血性鏈球菌病活疫苗(按瓶簽注明頭份)進行普遍預防注射，經(jīng)尾根皮下(不得在其他部位)注射接種[6]。

6.2 治療

6.2.1 抗菌治療 靜脈滴注：(1)0.9%氯化鈉50 mL +頭孢噻呋鈉50 mg；(2)0.9%氯化鈉50 mL+維生素B625 mg+維生素C 0.25 g；(3)5%葡萄糖50 mL+乳糖酸紅霉素50 mg[劑量以紅霉素計5 mg/(kg·bw)]， 連用3～5 d。

6.2.2 輔助治療 肌內(nèi)注射：(1)抗炎：地塞米松0.1～0.2 mg/(kg·bw)，1 次/d，連用3～5 d；(2)解 熱鎮(zhèn)痛：選用對乙酰氨基酚注射液10～15 mg/(kg·bw)； 注意：病羊體溫不高于40 ℃，可不用解熱藥；(3)減輕臟器出血：維生素K3。

6.2.3 增強免疫的特殊方法 全群口服：鹽酸左旋咪唑 2.5 mg/(kg·bw)，1次/d，連用5～7 d。

7 討論

羊鏈球菌病是近年來庭院養(yǎng)殖過程中的常見病和多發(fā)病，屬于條件致病菌。在農(nóng)區(qū)，養(yǎng)殖戶防疫意識淡薄，基本不采取消毒措施，因此盡快改善飼養(yǎng)環(huán)境和強化飼養(yǎng)條件，改變防疫意識是減少發(fā)病的重要手段。

鏈球菌病嚴重威脅羊群的生命，所以初期選藥尤為重要，很容易錯過最佳治療及時機，通過采取上述治療及防治措施，病情會得到有效控制。

鏈球菌極易形成生物被膜(為細菌提供一種保護性生活方式)產(chǎn)生耐藥性，一般抗生素對該菌治療效果不佳。在該病的治療過程中，選擇了一個藥理拮抗的用藥組合(頭孢噻呋配合乳糖酸紅霉素)，雖然從藥理學分類上講，頭孢菌素類(繁殖期殺菌劑)與大環(huán)內(nèi)酯類(快效抑菌劑)聯(lián)用時存在拮抗作用，但是通過時間差給藥，頭孢菌素類可以先破壞細菌細胞壁功能和結(jié)構(gòu)的完整性，起踹門作用，而大環(huán)內(nèi)酯類藥物可順勢大量進入細菌細胞內(nèi)，形成較高的胞漿藥物濃度，從而產(chǎn)生更好的臨床效果。人醫(yī)中大量的臨床試驗證明，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素可以抑制細菌生物被膜的形成，有利于β-內(nèi)酰胺類抗生素直接作用于細菌菌體，既可提高治愈率，又能縮短療程[7-10]。

左旋咪唑?qū)儆谶溥虿⑧邕蝾惪咕€蟲藥，除了具有驅(qū)蟲活性外，還能明顯提高機體免疫反應，它能夠恢復外周T淋巴細胞介導的免疫功能，興奮單核細胞的吞噬作用。所以在治療的同時應用鹽酸左旋咪唑全群口服，對提高羔羊整體的機體免疫力有促進作用，降低了發(fā)病率和死亡率。

現(xiàn)階段，PCR檢測在基層獸醫(yī)臨床的應用率極低，但隨著PCR檢測技術的發(fā)展，其高度的靈敏性和特異性，將被廣泛應用于畜禽疾病診斷，目的是簡便快速的獲得診斷結(jié)果，確定病原，為臨床合理用藥提供科學依據(jù)。