一起肉雞滑液囊支原體病的診斷

陳云霞， 張煥容， 李 凡

(西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 四川成都610041)

2018年11月27日，四川彭山某存欄量為2 000 羽的三黃品種肉雞場，70日齡左右部分雞的腿關(guān)節(jié)陸續(xù)出現(xiàn)異常，主要表現(xiàn)為跗關(guān)節(jié)、爪墊、龍骨滑液囊腫脹、皮下組織增厚，有的雞跗關(guān)節(jié)周圍長出大小不一的水泡，導(dǎo)致雞不能正常站立和行走，至90日齡，發(fā)病率達(dá)12%，但死亡率較低。主訴：該雞場未免疫滑液囊支原體疫苗。曾懷疑是由大腸桿菌、沙門菌、葡萄球菌等細(xì)菌，以及雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒引起的關(guān)節(jié)炎，用抗菌素治療發(fā)病雞，雖有輕微好轉(zhuǎn)，但陸續(xù)有新的病例出現(xiàn)。

2 臨床癥狀

病雞主要表現(xiàn)為明顯的跛行，跗關(guān)節(jié)和爪墊腫脹，觸之有熱感和波動感，部分雞胸部出現(xiàn)囊腫；整體采食下降，喜臥，消瘦，羽毛松亂，死亡率低，個別雞因病程較長，極度衰弱，不能站立。

3 剖檢變化

切開跗關(guān)節(jié)、爪墊及胸部龍骨腫脹處，有黏稠淡黃色滲出液，個別可見黃色干酪樣物質(zhì)；肝脾輕微腫大；心肺正常；腸內(nèi)無內(nèi)容物；腎臟無肉眼可見異常。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 染色鏡檢 取關(guān)節(jié)內(nèi)淡黃色滲出液涂片，結(jié)晶紫染色鏡檢，油鏡下未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌。將關(guān)節(jié)滲出液接種到TSA培養(yǎng)基上，經(jīng)過37 ℃培養(yǎng)24 h，無菌落生長。

4.2 病料采集與處理 取典型癥狀病雞腿關(guān)節(jié)滑液囊新鮮內(nèi)容物，加入適量生理鹽水研磨，吸取上清200 μL提取DNA。

4.3 核酸提取及PCR檢測結(jié)果 用酚-氯仿法提取4.1中上清液中DNA作為模板，PCR擴(kuò)增檢測滑液囊支原體vlhA基因片段。引物序列[1]如下：上游5′-TTAGCAGCTAGTGCAGTGGCC-3′，下游 5′-GTAACCGATCCGCTTAATGC-3′；預(yù)期目的片段大小為300 bp，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系為：PremixTaq12.5 μL，模板DNA 2 μL，上下游引物各1 μL，加dd H2O補(bǔ)足至總體積20 μL。PCR反應(yīng)條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，53 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共30個循環(huán)；72 ℃ 10 min。1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，并將PCR產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司測序，測序結(jié)果經(jīng)BLAST序列比對后，確定擴(kuò)增片段為滑液囊支原體的vlhA基因片段。

圖1 疑似滑液囊支原體病樣品PCR電泳圖M：DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 1：陽性對照； 2～3：臨床樣本； 4：陰性對照

5 診斷結(jié)果

根據(jù)發(fā)病特點(diǎn)、臨床癥狀、剖檢變化及實(shí)驗(yàn)室診斷，最終確診為滑液囊支原體感染。

6 討論

滑液囊支原體病是由滑液囊支原體(Mycoplasmasynoviae,MS)引起的一種急性或慢性傳染病，常造成雞群增重下降、跛行、產(chǎn)蛋量大幅下降，屠體廢棄率升高，給家禽養(yǎng)殖場造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。關(guān)節(jié)腫脹、跛行是滑液囊支原體病的特征性癥狀之一，若出現(xiàn)跛行，并伴有呼吸道癥狀，配合其他臨床癥狀，如消瘦、胸部起水皰等可考慮MS感染。在臨床上，本病應(yīng)與金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌等病原菌引起的關(guān)節(jié)炎及病毒性關(guān)節(jié)炎相區(qū)別，應(yīng)根據(jù)病情的急、慢及各自的臨床癥狀進(jìn)行區(qū)別，必要時做病原分離鑒定；在呼吸道癥狀方面，應(yīng)與雞毒支原體(MG)所致的疾病進(jìn)行區(qū)別。

在預(yù)防滑液囊支原體病方面應(yīng)做到：從源頭上培育無MS感染的健康種雞群；做好雞舍通風(fēng)換氣工作，合理控制飼養(yǎng)密度，選擇營養(yǎng)全面的飼料以提高雞群免疫力；還可使用疫苗對MS感染進(jìn)行預(yù)防，目前我國尚無MS疫苗上市，澳大利亞已有商品化MS-H疫苗。藥物治療能有效減輕MS感染，但沒有抗生素能根除雞體內(nèi)的MS。在治療發(fā)病雞時，最好用本場分離的MS作藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，使用高敏感藥物對發(fā)病雞進(jìn)行治療。

(參考文獻(xiàn)略)