規(guī)模化豬場采樣檢測流程

迂斌，曾榮，張運強(qiáng)，顏運秋

（1.浙江惠嘉生物科技股份有限公司，浙江 湖州 313000；2.四川省成都市高新區(qū)動物防疫檢疫監(jiān)督所，四川 成都 610041；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410128）

1 送檢樣品分類與采樣要求

1.1 唾液檢測 適用于大欄飼養(yǎng)檢測，選擇吸水儲水能力強(qiáng)的全麻粗繩，準(zhǔn)備一次性手套、自封袋若干。將麻繩一端固定在圍欄上，另一端與豬頭等高即可，在欄外喚醒豬只，略微晃動棉繩吸引豬只咬食，過段時間后戴上一次性手套將麻繩取下，擰壓，將擠出的唾液存放于自封袋內(nèi)，密封送檢。每次可檢測一個大欄，需要對多個大欄檢測時，每個大欄應(yīng)至少使用一根麻繩。宜在進(jìn)食前2 h或進(jìn)食后2 h采樣。

1.2 豬鼻拭子或口腔液樣品檢測 保定豬只，先將豬鼻孔周圍擦干凈，再使用新棉簽與豬鼻中隔呈45°角輕輕插入，與鼻中隔平行方向插入約2 cm，輕輕轉(zhuǎn)動棉簽一周，停2～3 s，再輕輕轉(zhuǎn)動棉簽一周，拔出棉簽，置于加有無菌生理鹽水的離心管中（確保生理鹽水能浸沒棉頭），密封冷藏送檢。

1.3 組織檢測 要求在病豬死后即行采樣，最好不超過2h。剖開胸腹后取脾、淋巴結(jié)、肺等，取病變嚴(yán)重組織100g左右即可。如非必要，對于異常豬只不推薦解剖取組織樣，以免造成不必要的污染。

1.4 血液檢測 血樣采集后及時分離血清，每份血清樣品不低于500 μL。

1.5 棉拭子檢測 以棉拭子涂抹采樣表面為主，取樣面積以5 cm×5 cm為準(zhǔn)。取樣時用無菌生理鹽水濕潤過的干凈棉拭子邊旋轉(zhuǎn)邊涂抹采樣面，隨后掰斷棉簽將前端棉花部分浸泡在含有無菌生理鹽水的離心管內(nèi)，蓋緊后用自封袋封存，盡快送檢。

所有采樣必須戴手套操作，不可直接接觸采樣對象。麻繩采樣時，采一欄換一副手套；鼻腔、肛門或全血采樣時，采一頭豬換一副手套。

2 不同檢測需求的樣品采集

2.1 正常豬群檢測 對種豬場及肥豬場整個豬群的抗體情況進(jìn)行普查時，可采集血樣檢測。對于大欄飼養(yǎng)生豬，可以采集唾液檢測。

2.2 異常豬只檢測 可采集血樣進(jìn)行檢測。采集異常豬只的血樣時，應(yīng)戴上一次性手套，采樣后迅速用棉球按壓止血。采集中使用的手套、棉球或紙巾都需要統(tǒng)一收集后做無害化處理。也可采集口腔液或鼻腔液樣本進(jìn)行檢測。異常豬只的血樣檢測需經(jīng)生物安全總監(jiān)同意方可進(jìn)行。

2.3 豬場檢測 采樣區(qū)域包含豬場內(nèi)外路面、門衛(wèi)臟區(qū)和凈區(qū)表面、進(jìn)場物料、人員外露皮膚和衣物表面、料塔表面、豬舍欄位（產(chǎn)床、定位欄或大欄地面等）、轉(zhuǎn)豬臺欄位和地面、病死豬冷庫內(nèi)表面、中轉(zhuǎn)平臺、場內(nèi)運輸車輛、洗澡間、食堂、住宿區(qū)、衛(wèi)生間。正常場區(qū)每周采樣一次，異常場區(qū)或清欄待進(jìn)豬場區(qū)在空舍后3個月開始每14 d取樣一次。每個位置表面至少取2個樣本，大單元或高風(fēng)險區(qū)（如轉(zhuǎn)豬臺、中轉(zhuǎn)平臺）應(yīng)取更多樣本。

2.4 環(huán)境檢測 主要檢測飼料、水樣、泥土等。正常場區(qū)每周采樣一次，異常場區(qū)或清欄待進(jìn)豬場區(qū)在空舍后3 個月開始每14 d 取樣一次。其中，飼料應(yīng)覆蓋各種料號，從料塔下直接采集，每次采集100 g，裝于自封袋內(nèi)；水樣應(yīng)從豬場的水泵房或供水主管道采集，選用干凈滅菌處理過的塑料瓶等收集100 mL，密封送檢；對場區(qū)內(nèi)生物坑外圍泥土檢測時，應(yīng)采集地表10 g左右泥沙，裝于自封袋內(nèi)送檢。此外，對飼料廠原料的采樣應(yīng)每月一次。

2.5 車輛檢測 車輛檢測以棉拭子采樣為主，洗消中心可配合3M的ATP熒光檢測儀對洗消效果進(jìn)行檢驗。車輛采樣重點采集轉(zhuǎn)豬車、飼料車、配送車輛，重點采集部位為車輪（與地面接觸的車輪面），轉(zhuǎn)豬車還應(yīng)重點采集車廂內(nèi)表面。每輛車洗消烘干或晾干后，需要采集車輪樣品2份，駕駛室地墊1 份，轉(zhuǎn)豬車還需要增加車廂內(nèi)表面棉拭子2 份。所有車輛都需要采樣，每周抽檢其中各類車輛的1份代表檢測，如1份飼料車和1份轉(zhuǎn)豬車等。

3 采樣保存及運輸注意事項

物品準(zhǔn)備：精液運輸箱、生理鹽水、一次性注射器、采樣棉簽、一次性手套、記號筆、采樣管、儲物盒、冰塊、自封袋。以上物品要分區(qū)擺放整齊。

采樣保存：采完樣的采樣管要做好標(biāo)記，統(tǒng)一放到自封袋里邊，且應(yīng)與沒有用過的采樣物品分區(qū)擺放，防止污染。

注意事項：每周二、周五定期對采樣箱內(nèi)外壁清洗與消毒；箱子內(nèi)不要放置太多的物品；精液運輸箱內(nèi)要放置冰塊，如果長途運輸?shù)脑捫枰胖?～3 塊冰塊，保證箱子中的溫度保持在2～8 ℃。冰塊用完后及時消毒，并放冰箱中保持冷凍狀態(tài)，方便下次使用。

4 采樣后實驗室及器材的消毒

器材消毒：操作臺、移液器、離心機(jī)每次使用后用75%酒精擦拭或者用1%次氯酸鈉擦拭消毒或浸泡。

廢棄物消毒：使用后的所有廢棄物（樣本和槍頭）全部使用5%火堿溶液浸泡30 min。

實驗室消毒：每天確保實驗室通風(fēng)，房間地面使用1∶200 過硫酸氫鉀或戊二醛擦拭消毒，每次實驗結(jié)束后使用紫外線燈消毒30 min，存放樣品的冰箱應(yīng)每周用75%酒精擦拭消毒2次。