多壁碳納米管小柱-液質聯用法測定豬肉中地美硝唑的不確定度評定

楊俊 管彬彬 何薛純 周楠 陳煜

摘要：豬肉樣品經酸化乙腈提取、多壁碳納米管小柱凈化，采用液質聯用法測定豬肉中地美硝唑含量，并根據建立的數學模型對各分量進行不確定度評定。結果表明，利用多壁碳納米管小柱-液質聯用法測定豬肉中地美硝唑，其不確定度的主要來源為標準曲線的配制及曲線擬合。當豬肉中地美硝唑含量為4.87 μg/kg時，擴展不確定度為0.36 μg/kg（k = 2）。

關鍵詞：多壁碳納米管；液質聯用法；地美硝唑；不確定度

中圖分類號：TS251.7 文獻標識碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20210524

基金項目：南通市科技項目基礎科學研究（JC2020113）。

地美硝唑是硝基咪唑類藥物，對滴蟲、原蟲病和厭氧菌有良好的預防和治療作用，同時還具有抗結核、抗病毒、抗病毒腫瘤等作用[1-4]，常作為獸藥用于畜禽類疾病的預防和治療。但是，地美硝唑作為藥物在動物體內會有一定的殘留，會引起人體致突變和致癌等副作用，對人體的健康造成影響[5-7]。因此準確測定豬肉中的地美硝唑含量，了解測定地美硝唑的不確定度及來源，對提高分析的準確性有十分重要的意義。

目前測定豬肉中地美硝唑含量的凈化方法有液-液萃取法、分散液液微萃取法、固相萃取法、分子印跡法、QuEChERS法等[8-11]，而多壁碳納米管濾過型（m-PFC）凈化小柱的方法鮮見報道，該方法操作簡單、快捷、準確度高。

本研究采用多壁碳納米管小柱-液質聯用法測定豬肉中地美硝唑含量，根據JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》[12]建立實驗方法的數學模型，并對實驗過程中引入的各不確定度分量進行評定，以期為采用該法測定豬肉中地美硝唑含量的質量控制提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Vanquish/Altis型超高壓液相色譜-串聯質譜儀：美國賽默飛世爾公司；SECURA225D-1CN型電子天平（精度0.01 mg）、BSA224S型電子天平（精度0.1 mg）：德國賽多利斯公司；VM-2500型多管旋渦混合儀：廣東安勝儀器有限公司；TGL-16M型臺式高速冷凍離心機：上海盧湘儀離心機儀器有限公司；Xcelvap型氮吹濃縮儀：美國Horizon公司；Milli-Q Reference型實驗室超純水儀：美國Millipore公司。

1.2 耗材與試劑

乙腈（色譜純）：德國Merck公司；正己烷（色譜純）、98%無水甲酸（分析純）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；無水硫酸鎂、氯化鈉（分析純）：國藥集團化學試劑有限公司；QuickProQuEChERS-VD凈化柱：河南華仁健康科技有限公司；0.22 μm微孔濾膜：上海安譜實驗科技股份有限公司；地美硝唑（純度99.46%）：英國LGC公司。

1.3 前處理方法

稱取5 g試樣于50 mL離心管中，加入3 mL水，5 mL 1%的甲酸乙腈，渦旋提取5 min，加入4 g無水硫酸鎂、1 g氯化鈉，快速振蕩混勻，渦旋3 min，6 000 r/min離心5 min。上清液轉移到15 mL離心管中，加入5 mL正己烷，渦旋2 min，6 000 r/min離心5 min，棄去上層液體。吸取下層澄清液經多壁碳納米管小柱凈化，氮吹濃縮至近干，加入1 mL含0.1%甲酸的水+甲醇（70+30）振蕩溶解殘渣后，濾液再經0.22 μm微孔濾膜過濾，上機。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Accucore RP-MS柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）；柱溫為30 ℃；進樣量為2 μL；流動相為0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸乙腈（B），流速0.3 mL/min；采用梯度洗脫程序：0.0～6.0 min，95% A～5% A；6.0～8.0 min，5% A；8.0～8.1 min，5% A～95% A；8.1～10.0 min，95% A。

1.4.2 質譜條件

采用電噴霧電離（ESI）正離子掃描；噴霧電壓3 500 V；鞘氣流量4.1 L/min；輔助氣流量5.1 L/min；吹掃擋錐氣流量1.5 L/min；蒸發溫度450 ℃；離子傳輸管溫度200 ℃；碰撞氣壓0.2 Pa。檢測方式為選擇反應監測（SRM）。SRM條件見表1。

1.5 標準溶液的配制

標準儲備溶液：稱取10.1 mg地美硝唑，用甲醇定容至100 mL，質量濃度為100 μg/mL；標準中間溶液：吸取0.1 mL標準儲備液定容至10 mL容量瓶，質量濃度為1 μg/mL；吸取1 mL標準中間溶液定容至10 mL，質量濃度為0.1 μg/mL；標準工作曲線系列溶液：分別準確吸取地美硝唑標準中間液0.01、0.05、0.100、0.250、0.500 mL，用基質提取液定容至1 mL，質量濃度為1、5、10、25、50 ng/mL。

2 結果與分析

2.1 數學模型的建立

3 測量結果及其不確定度報告

多壁碳納米管小柱-液質聯用法測定豬肉中地美硝唑含量，當稱樣量為5 g時，k = 2（置信度為95%），測定結果為（4.87±0.36） μg/kg。

4 結 論

本研究采用多壁碳納米管小柱-液質聯用法測定豬肉中地美硝唑含量，建立實驗方法的數學模型，通過對實驗過程中引入的各不確定度分量進行不確定度評定。結果表明，標準溶液配制、曲線擬合對不確定度的影響最大。在實驗過程中，標準溶液配制涉及的計量器具和配制步驟多，各個步驟的不確定度累計，導致該分量的不確定度較大。實驗中選擇合適的標準溶液，在定量準確的前提下減少中間配制的步驟，降低測定的不確定度；曲線的擬合對結果的不確定度也有很大的影響，因此，在實驗中標準曲線的范圍要與樣品中的濃度匹配，盡可能提高曲線擬合相關系數。

參 考 文 獻

[1] 田海嬌，張府君，武婷.UPLC-MS/MS法測定飼料級獸藥中甲硝唑和地美硝唑的含量[J].廣州化工，2020，48（12）：82-83+133.

[2] 劉燕，胡苑玲，韓秀芬，等.超高效液相色譜-四級桿-靜電場軌道阱高分辨質譜法篩查測定飼料中16種硝基咪唑類藥物[J].廣東飼料，2019，28（5）：41-46.

[3] 朱珊珊，吳澎，徐雙雙，等.基于色譜-質譜法分析食品中硝基咪唑類藥物殘留的研究進展[J].食品工業科技，2020，41（22）：326-334.

[4] 王延映，彭麟，余祖功.高效液相色譜法測定飼料中甲硝唑、地美硝唑和異丙硝唑[J].南京農業大學學報，2014，37（5）：123-127.

[5] MUDRY M D， CARBALLO M， LABAL DE VINUESA M， et al. Mutagenic bioassay of certain pharmacological drugs： III Metronidazole（MTZ）[J]. Mutat Res， 1994， 305（2）： 127-132.

[6] VOOGD C E， VAN DER STEL J J， JACOBS J J J A A. The mutagenic action of nitroimidazoles IV： A comparison of the mutagenic action of several nitroimidazole and some imidazoles[J]. Mutat Res， 1979， 66（3）： 207-211.

[7] CAVALIERE A， BACCI M， AMOROSI A， et al. Induction of lung tumors and lymphomas in BALB/C mice by metronidazole[J]. Tumori， 1983， 69（5）： 379-382.

[8] 賈瑋，王菡，石琳，等.基于色譜-質譜法的肉類食品中大環內酯類藥物殘留及其代謝產物分析方法研究進展[J].分析測試報，2018，37（8）：981-988.

[9] 王春，顧傳坤，馬強，等.超分子溶劑分散液液微萃取/超高效液相色譜-串聯質譜法測定魚血中13種硝基咪唑類藥物殘留[J].分析測試學報，2019，38（3）：263-269.

[10] ZHANG C Y， DENG Y C， ZHENG J F， et al. The application of the QuEChERS methodology in the determination of antibiotics in food： A review[J]. TrAC Trends in Analytical Chemistry， 2019， 118： 517-537.

[11] HU Y L， PAN J L， ZHANG K G， et al. Novel applications of molecularly-imprinted polymers in sample preparation[J]. TrAC Trends in Analytical Chemistry， 2013， 43： 37-52.

[12] 國家質量監督檢驗檢疫總局.測量不確定度評定與表示： JJF 1059.1—2012[S].北京：中國質檢出版社，2012.

Evaluation of Uncertainty in the Determination of Desenidazole in Pork by Multi-walled Carbon Nanotube Column-liquid Mass Spectrometry

Yang Jun， Guan Binbin， He Xuechun， Zhou Nan， Chen Yu

（ Nantong Food and Drug Supervision and Inspection Center， Nantong， Jiangsu 226006 ）

Abstract： Pork samples were extracted by acidified acetonitrile and purified by multi-wall carbon nanotube column. The content of temenidazole in pork was determined by liquid mass spectrometry. The uncertainty of each component was evaluated according to the established mathematical model. Results： The main source of uncertainty is the preparation of standard curve and curve fitting. When the content of desenidazole in pork was 4.87 μg/kg， the extended uncertainty was 0.36 μg/kg （k=2）.

Key words： multi-walled carbon nanotubes， liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry， desenidazole， uncertainty