蛹蟲草的優化栽培及其成分分析

王 哲 王升厚 柳葉飛 王 澤 趙洪新 趙曉云 徐方旭

（1.沈陽師范大學生命科學學院，遼寧沈陽 110034；2.沈陽師范大學實驗教學中心，遼寧沈陽 110034；3.浙江理工大學生命科學與醫藥學院，浙江杭州 310018；4.沈陽藥科大學生命科學與生物制藥學院，遼寧沈陽 110016）

野生蛹蟲草主要分布在我國的東北地區及河北、廣西等省區，遼寧省在1986 年便發現蛹蟲草[1]，其化學成分和藥理作用與冬蟲夏草相近，是冬蟲夏草的最理想替代品[2]。近年來，蛹蟲草經過人工馴化培育，技術手段趨向成熟，已經實現規模化生產。沈陽市是我國最早人工栽培蛹蟲草的地區[3]，經分析證實，人工培育的蛹蟲子實體中含有豐富的：蟲草素、腺苷等活性物質，蟲草素作為一種核苷類似物，有著廣泛的生物學功能，不僅可以作為抗癌的藥物[4]，還對治療白血病有顯著功效[5]，目前開發前景廣闊[6]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料供試菌種的編號為C02，是實驗過程中篩選出來的菌種之一，由沈陽市農業科學院食用菌研究所提供。培養基分為3 種，即母種培養基、液體菌種培養基和栽培種培養基。

1.2 測定方法

1.2.1 母種制作 （1）將新鮮無芽無病變的馬鈴薯去皮，切成0.3 ～0.8 cm 的條狀，加水煮汁，約10 min 后，煮至熟而不爛狀，用8 層紗布進行過濾。

（2）將濾液定容后加入瓊脂粉攪拌均勻，再加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、無水硫酸鎂、維生素B1 等，加熱煮沸，分裝到試管中。

（3）在121℃的環境中，高壓滅菌25 min，滅菌結束溫度降至80℃以下，趁熱取出試管擺斜面，培養基稍低于試管的2/3 處即可（切勿沾到棉塞，防止雜菌滋生），冷卻凝固后備用。

（4）接種，將10 種 編 號 為C01、C02、C03、C04、C05、C06、C07、C08、C09、C10 的母種分別繼代，用無菌接種鏟在母種最前端取黃豆粒大小，接種到新的培養基上，在20℃的環境中避光黑暗培養，空氣濕度控制在65%左右，10 d 后見自然光，共培養15 d，觀察其長勢及轉色情況。

1.2.2 液體菌制作 （1）將玉米粉充分溶于水后，再加熱煮沸。

（2）定容后，加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、無水硫酸鎂，蛋白胨、維生素B1碾碎煮沸，攪拌均勻后分裝到250 mL 的三角瓶中，裝液量占三角瓶的1/3 ～1/2，迅速封口。

（3）裝入立式高壓滅菌鍋中，在123℃的環境中滅菌40 min，冷卻后備用。

（4）接種，將剩余8 種編號為C02、C03、C05、C06、C07、C08、C09 和C10 的母種進行液體種接種，在超凈工作臺上將母種試管取0.5 m3大小的菌塊，接種于液體培養基中，溫度控制在21℃，搖床頻率120 r/min，培養6 d，觀察菌球生長速度及菌球是否均勻一致。

1.2.3 瓶載培養基制作 （1）將14 種雜糧（燕麥、小米、高粱米、玉米、糙米、黃豆、蕎麥、薏米、綠豆、紅豆、黑豆、黑米、大米和小麥），分別裝入750 mL的罐頭瓶中，每瓶35 g。

（2）按常見小麥培養基的料水比1 ∶1.6 加清水，即56 mL/瓶，封口。

（3）水平裝入立式高壓滅菌鍋中，在123℃的環境中滅菌2 h，待冷卻后備用。

（4）在超凈工作臺上接種，取8 種液體菌種，用無菌水將菌種稀釋，稀釋倍數為1 ∶5，每瓶接種稀釋液5 mL。

1.2.4 出草管理 （1）出草室消毒。發菌前，對出菇室進行消毒。1 m3空間用15 mL 的40%甲醛加入14 g 高錳酸鉀消毒45 min，開窗通風24 h 后可進入發菌。

（2）發菌溫度保持在18℃，當菌種萌發后升至20℃，將空氣相對濕度控制在60%左右，避光黑暗培養7 d。

（3）當菌絲長滿料面、穿透底面近2/3 后，見光培養，每天光照18 ～20 h，白天散射自然光，夜晚采用日光燈補充光照。溫度控制在20℃，空氣濕度控制在80%，每天通風0.5 h。當原基出現后，將瓶口塑料膜封口膜扎眼通氧，加強瓶內外氣體交換，溫度保持在22℃，待草芽長出3 ～4 cm 后補充水分，空氣濕度調為85%，每天通風2 ～3 次，每次30 ～50 min，連續培養60 d 左右，觀察子實體的長勢及商品性。收獲后，將其在55℃的恒溫箱中干燥至恒重，干重稱重，并計算生物轉化率。

1.2.5 優化料水比 當料水比為1 ∶1.6 時，觀察14 種碳源的發菌情況、轉色情況、原基形成情況等，觀察結束后記錄其長勢情況，并對不適宜的料水比進行調整，直至調整到適宜蛹蟲草生長為止。

2 結果與分析

2.1 發菌轉色結果由圖1 可知，培養基F 發菌比較緩慢，見光后邊緣輕微轉色，料面中心內不發菌；培養基I 和培養基J不轉色；培養基K僅邊緣發菌，見光轉色不均勻，菌絲不吃料。圖2 發菌均勻，見光轉色快，菌絲吃料。

圖1 未發菌及發菌不轉色的碳源培養基

圖2 發菌及轉色正常的碳源培養基

2.2 料水比優化栽培試驗結果通過多次栽培，觀察發菌、轉色及原基情況，根據實際情況調節料水比，得到表1。

表1 料水比調節表

由表1 可知，第一批料水比為1 ∶1.6，發現培養基F、I、J、K 未發菌或發菌少，故直接淘汰，其他除培養基D 水分偏少外，其余水分都偏多；根據第一批栽培結果進行料水比調整，直至得到最適料水比。通過圖3 可知，菌絲要平鋪料面，無氣生菌絲及厚菌皮，培養基不能太干燥，發菌后不能露出雜糧顆粒等。

圖3 優化料水比后發菌情況

3 結語

通過優化試驗得到適宜的料水比：A 為1 ∶1.4，B 為1∶1.1，C為1∶1.4，D為1∶1.7，E為1∶1.1，G為1∶1.4，H 為1 ∶1.6，L 為1 ∶1.1，M 為1 ∶1.1，CK 為1 ∶1.6。研究結果能夠為蟲草產業發展奠定基礎。