維吾爾藥大戟脂中2個新的三萜

趙寧東，宋 玉，楊寶嘉，郝小江*，李順林*

1.文山學院化學與工程學院，云南 文山 663000

2.中國科學院昆明植物研究所 植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201

大戟脂（euphorbium）為多脂大戟Euphorbia resiniferaBerg.的樹脂狀分泌物，干燥后成暗黃色或黃棕色，其粉末具有強烈的刺激性。《注醫典》記載異名為排日非云。《中華草本》新疆維吾爾藥卷中記載大戟脂用于癱瘓、面癱、昏迷、抽搐、顫動、坐骨神經痛、關節疼痛、腹水、腸梗阻、白內障等疾病的治療[1]。大戟脂主要的化學成分為大環二萜和三萜，大環二萜包括瑞香烷型、續隨子烷型、巨大戟烷型和12-去氧的巴豆烷型；三萜主要的類型為大戟烷型、甘遂烷型及相應的降三萜；另外還發現了二降倍半萜等類型[2-11]。其中大環二萜生源途徑由焦磷酸香葉基香葉酯通過首尾環合而成，相比于三萜，大環二萜在大戟科中含量較低[12]。為了進一步研究大戟脂的化學成分，利用現代分離技術和光譜分析方法對其進行化學成分研究。從大戟脂中分離得到了2 個化合物（圖1），分別鑒定為大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮（eupha-8-ene-3,25-diol-24-chloro-7-one，1）和22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮（22,23,24,25,26,27-sexnoreupha-8-ene-20-ol-3,7-dione，2）。其中化合物1 為新的三萜，命名為euphoritriol A，化合物2 為新的降三萜，命名為euphoritriol B。

圖1 化合物1 和2 的結構式Fig.1 Chemical structures of compounds 1 and 2

1 儀器與材料

Jasco P-1020 旋光儀、Aglient 1290 UPLC/6540 Q-TOF 液相色譜/四極桿/飛行時間質譜儀（美國安捷倫科技公司）；Shimadzu UV-2401A 紫外分光光度計（日本島津公司）；Tenor 27 紅外光譜儀（德國Brucker 公司）；Bruker DRX-500 MHz 超導核磁共振共振儀（德國Brucker 公司）；Agilent 1100 和1200 HPLC（美國安捷倫科技公司）。

制備柱Waters X-Select CSH Prep RP C18（150 mm×19 mm，5 μm，美國Waters 公司）。硅膠、GF254薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠）；凝膠Sephadex LH-20（40～70 μm，瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB 公司）；反相填充材料Lichroprep RP-18 gel（40～63 μm，德國默克公司）。

藥材大戟脂2016年7月購于新疆藥材市場。由新疆維吾爾醫學專科學校買買提努爾艾合提教授鑒定為多脂大戟E.resiniferaBerg.的樹脂狀分泌物，標本（KUN No.1010725）保存于中國科學院昆明植物研究所標本館。

2 提取與分離

大戟脂10 kg，粉碎后用甲醇回流提取3 次，減壓回收溶劑濃縮得浸膏，將浸膏用水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯萃取。醋酸乙酯層（2.3 kg）經過硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（1∶0～0∶1）梯度洗脫，分為7 個部分A～G。

E 部分（210 g）通過反相C18柱色譜，甲醇-水（3∶7～9∶1）梯度洗脫，得到23 個部分E-1～E-23。E-5 部分（8 g）經過凝膠（甲醇洗脫）純化，分為2 部分E-5a～E-5b，將E-5b 用凝膠（丙酮洗脫）純化，然后用制備HPLC 純化[乙腈-水（66∶34），體積流量10 mL/min]，得到6 個部分E-5b1～E-5b6，其中E-5b6 經過硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（200∶1～50∶1）梯度洗脫，得到化合物2（1 mg）。E-9 部分（5 g）經過凝膠柱色譜（甲醇洗脫），再經制備HPLC 純化[乙腈-水（66∶34），體積流量10 mL/min]，得到化合物1（70 mg，tR＝42 min）。

3 結構鑒定

1H-NMR 數據（表1）顯示了三萜特征的8 個甲基和1 個連氧次甲基氫信號，分別為7 個季碳甲基信號 [δH0.73,0.86,0.95,0.97,1.03,1.27,1.29 (各3H,s)]，1 個仲碳甲基信號 [δH0.84 (3H,d,J= 6.1 Hz)]，和1 個連氧次甲基信號 [δH3.26 (1H,dd,J=11.6,4.5 Hz)]。13C-NMR 結合DEPT 譜（表1）顯示了三萜的30 個碳信號，包括8 個甲基碳信號、9 個亞甲碳信號、5 個次甲基信號（包括1 個連氧的次甲基碳信號）、7 個季碳信號（包括2 個sp2雜化碳信號，1 個連氧的季碳信號）和1 個羰基碳信號。結合從大戟脂中已報道的三萜，化合物1 的四環三萜碳骨架與sooneuphanone D[13]相同，C-17 位側鏈與ganoderitriol M[14]的C-17 位側鏈僅在C-24 位的取代基不同，13C-NMR 中C-24（δC74.5）的化學位移值明顯向高場移動δ5.1，結合質譜顯示相對分子質量m/z492，與ganoderitriol M 結構中C-24 位為羥基取代相對分子質量相差18，所以推斷C-24 位上的羥基被氯原子取代，并且HMBC 譜（圖2）中CH3-26 [δH1.27 (3H,s)]、CH3-27 [δH1.29 (3H,s)] 與C-24 (δC74.5) 相關證明了以上推斷。

化合物1的相對構型與sooneuphanone D一致[13]。H-3 [δH3.26 (1H,dd,J= 11.6,4.5 Hz)] 說明3-OH 為β 構型[15]。ROESY 譜（圖3）顯示的相關信號有H-3/H-5、H-3/CH3-28、CH3-29/CH3-19、CH3-19/H-11β、CH3-18/H-11α、CH3-30/H-17、CH3-30/H-16β，同時缺少CH3-18 和CH3-21 相關，說明化合物1 為大戟烷型三萜[16]。旋光也說明了化合物1 為大戟烷型三萜[13,16]。綜上所述，將化合物1鑒定為大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮，經檢索為新化合物，命名為euphoritriol A。

表1 化合物1 和2 的1H-和13C-NMR 數據 (500/125 MHz,CDCl3)Table 1 1H and 13C NMR spectroscopic data of compounds 1 and 2 (500/125 MHz,CDCl3)

圖2 化合物1 和2 主要的1H-1H COSY 和HMBC 相關圖Fig.2 1H-1H COSY and key HMBC correlations of compounds 1 and 2

圖3 化合物1 和2 主要的ROESY 相關圖Fig.3 Key ROESY correlations of compounds 1 and 2

比較化合物2 和1 的1H-NMR 和13C-NMR 數據，13C-NMR（表1）顯示了24 個碳，說明化合物2 為降三萜，結構中有2 處不同，化合物2 的C-17位側鏈降解了6 個碳，轉化為2-羥基乙基取代基。HMBC 譜（圖2）中CH3-21 [δH1.18 (3H,d,J= 5.1 Hz)] 與C-20 (δC70.9),C-17 (δC51.1) 相關，H-17[δH1.69 (1H,m)]與C-20 (δC70.9),C-21 (δC24.1) 相關證明了2-羥基乙基取代基連在C-17 位。另一不同之處為3-OH 被氧化為羰基，HMBC 譜中諧二甲基CH3-28 [δH1.09 (3H,s)] 和C-29 [δH1.13 (3H,s)]與C-3 (δC214.5) 相關證明了C-3 為羰基。

ROESY 譜（圖 3）顯示的相關信號有H-5/CH3-28 、 CH3-29/CH3-19 、 CH3-19/H-6β 、CH3-19/H-11β 、 CH3-30/H-15β 、 CH3-30/H-17 、CH3-18/H-16α 證明H-5、CH3-28、CH3-18 為α構型，CH3-29、CH3-30 為β構型。由于CH3-21 與H2-16 和H2-12 的相關信號重疊，并缺少20-OH 信號，所以C-20 的構型不能確定[17]。綜上所述，將化合物2 鑒定為22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮，為新化合物，命名為euphoritriol B。

4 討論

從維吾爾藥大戟脂中分離得到2 個新的三萜，其中化合物1 為新的三萜，化合物2 為新的降三萜，并且C-17 側鏈降解了6 個碳，通過核磁數據和質譜數據確定了這2 個化合物的結構及相對構型，可通過計算ECD 進一步確定化合物1 中C-24 位的絕對構構型，以及單晶X-射線衍射確定化合物2 的絕對構型。大戟屬植物白色的乳汁中富有大量的三萜，文獻報道從大戟脂中鑒定的大戟烷型和甘遂烷型三萜具有抗腫瘤活性[8]。本研究從維吾爾藥大戟脂中鑒定的2 個新的三萜在抗腫瘤方面有潛在的研究價值，為后續活性的篩選提供了物質基礎，為藥材大戟脂的化學成分提供了理論依據。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突