35%三環唑·戊唑醇懸浮劑分析方法研究

宋懷挺， 侯 影， 余德勉， 王陳杰， 張常慶

(上海悅聯生物科技有限公司，上海 201215)

關鍵字：三環唑；戊唑醇；高效液相色譜；分析

三環唑是防治稻瘟病專用殺菌劑屬于噻唑類。殺菌作用機理主要是抑制附著孢黑色素的形成，從而抑制孢子萌發和附著孢形成，阻止病菌侵人和減少稻瘟病菌孢子的產生。具有較強的內吸性的保護性殺菌劑，能迅速被水稻各部位吸收，持效期長，藥效穩定，用量低并且抗雨水沖刷。

戊唑醇屬于三唑類殺菌劑，是硫醇脫甲基抑制劑，是用于重要經濟作物的種子處理或葉面噴灑的高效內吸性殺菌劑?？捎行У姆乐魏坦阮愖魑锏亩喾N銹病、白粉病、網斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病及種傳輪斑病、茶樹茶餅病，香蕉葉斑病等。

三環唑和戊唑醇的單劑或其他復配制劑的分析方法已有國標和其他報道[1-8]，但35%三環唑·戊唑醇懸浮劑復配制劑的分析方法還未見報道。本文采用反相高效液相色譜法，采用C18不銹鋼柱和紫外可變波長檢測器，對35%三環唑·戊唑醇懸浮劑(17.5%+17.5%)中有效成分三環唑和戊唑醇同柱分析和定量，此方法快速、簡便、準確、靈敏度高、重現性好的特點，適用于產品質量的檢測和分析。

1 材料儀器

1.1 樣品和試劑 甲醇：色譜純；水：二次重蒸；三環唑標樣：已知含量≥98.0%；戊唑醇標樣：已知含量≥98.0%；流動相：甲醇+水=80+20(V/V)，流動相經0.45um孔徑的濾膜，并在超聲波浴槽中脫氣10min。

1.2 儀器 高效液相色譜儀：具紫外可變波長檢測器；色譜數據處理機；色譜柱：Φ4.6mm×150mm不銹鋼柱，內裝CAPCELL PAK C18/5μm為填充料的不銹鋼柱。

1.3 高效液相色譜操作條件 流量：1.0ml/min；柱溫：室溫(溫差變化≤2℃)；檢測波長：220nm；進樣體積：10μL；保留時間：三環唑約4.0min，戊唑醇約9.6min。

上述操作參數是典型的，可根據儀器的特點，對給定的操作參數做適當調整，以期獲得最佳效果，典型的三環唑(戊唑醇)高效液相色譜圖(圖1)。

圖1 35%三環唑·戊唑醇懸浮劑高效液相色譜圖

2 實驗方法

2.1 標樣溶液的配置 稱取三環唑和戊唑醇標樣各0.05g(精確到0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲冷卻后，用甲醇定容，搖勻；再用移液管準確移取5mL至100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.2 試樣溶液的配置 稱取含有三環唑或戊唑醇0.05g(精確到0.000 2g)試樣，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲冷卻后，加甲醇定容，搖勻，再用移液管準確移取5～100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，備用。

2.3 試樣的測定 在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，計算各針相對響應值的重復性，待相鄰2針的響應值變化<1.0%后，按照標樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標樣溶液的順序進行測定。

2.4 試樣中有效含量的計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中的峰面積分別進行平均，試樣中三環唑(戊唑醇)的質量分數X1(%)按式(1)計算：

(1)

式中：

A1—標樣溶液中三環唑(戊唑醇)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中三環唑(戊唑醇)峰面積的平均值；

m1—三環唑(戊唑醇)標樣的質量，g;

m2—三環唑(戊唑醇)試樣的質量，g；

P—三環唑(戊唑醇)標樣的質量百分數，%。

3 結果與討論

3.1 流動相和波長選擇 首先對35%三環唑·戊唑醇懸浮劑中的有效成分三環唑、戊唑醇在DAD條件下做紫外吸收掃描(圖2～3)，由(圖2～3)并結合分析中助劑雜質干擾因素(圖4)，選定檢測波長為220nm，在甲醇、水中調節比例，將三環唑和戊唑醇進行有效分離，同事避免助劑和雜質干擾，最后確定為甲醇：水=80：20作為流動相，在此條件下對35%三環唑·戊唑醇懸浮劑中三環唑和戊唑醇純度掃描。三環唑、戊唑醇的峰純度均為1，且有效成分出峰位置無明顯物質干擾，符合定量分析要求。

圖2 35%三環唑·戊唑醇懸浮劑中三環唑HPLC-DAD特異性掃描圖

圖3 35%三環唑戊唑醇中戊唑醇HPLC-DAD特異性掃描

圖4 35%三環唑·戊唑醇懸浮劑制劑空白圖

3.2 分析方法的線性相關性實驗 準確配制一系列不同濃度的三環唑和戊唑醇標樣溶液，然后分別按2.3測定步驟進行分析檢測，分別以三環唑和戊唑醇的質量濃度為橫坐標，三環唑和戊唑醇峰面積為縱坐標，計算一元線性回歸方程和作線性相關圖。線性相關性測定試驗數據(表1)。

表1 三環唑和戊唑醇線性相關數據表

三環唑一元線性回歸方程：Y=165X-0.059，相關系數：R2=0.9998。戊唑醇一元線性回歸方程：Y=50.041X+0.0089，相關系數：R2=0.9999。

3.3 分析方法的精密度實驗 任取一批35%三環唑·戊唑醇懸浮劑，按本標準中2.3測定步驟連續測定三環唑、戊唑醇含量10次，分別計算其標準偏差、變異系數。精密度測定試驗數據(表2)。

表2 三環唑、戊唑醇精密度測定試驗數據表

從三環唑、戊唑醇精密度測定數據表中可以看出，三環唑的標準偏差0.027，變異系數為0.15%。戊唑醇的標準偏差為0.035，變異系數為0.20%。

3.4 分析方法的準確度實驗 選取已知含量的35%三環唑·戊唑醇懸浮劑樣品，準確稱取5份，并分別加入定量的三環唑、戊唑醇標樣，然后按本標準中2.3測定步驟測定三環唑、戊唑醇標樣的加入量，同理論值進行比較，計算回收率?；厥章蕼y定試驗數據(表3)。

表3 回收率測定試驗數據表

按照本標準規定的方法進行檢測試驗三環唑、戊唑醇的回收率分別為：99.07%～100.79%、98.57%～100.57%之間，三環唑和戊唑醇的平均回收率分別為100.11%和99.53%。

4 結論

結果表明，本文中建立的同柱分析35%三環唑·戊唑醇懸浮劑中三環唑和戊唑醇的方法在測定該制劑中的三環唑和戊唑醇含量的準確度和精密度較高，線性關系良好。由于一次即可測定三環唑和戊唑醇的含量，使得該方法快速、簡便，適合于產品的質量檢測和控制。