大蒜提取液對丹參根腐病菌的抑制作用

周文杰

（河北衡水學院生命科學系 河北衡水 053000）

丹參在我國人工種植很常見，隨著多年的大規模種植，其連作障礙帶來的丹參根腐病危害日益嚴重，使丹參的生產效益降低，嚴重時會導致大面積死亡。目前對丹參根腐病的防治主要以化學防治為主，化學農藥的種類日漸繁多，效果明顯，價格低廉等優勢在農藥市場中占據主導地位，而病菌的耐藥性也日益提高，有大量的化學農藥殘留危害人類健康，所以迫切需要新型的植物源農藥的研發。

通過超聲波輔助提取方法，研究了不同料液比條件下大蒜水提取物對丹參根腐病菌的抑制效應，為丹參根腐病的生物防治提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料 大蒜于2019 年10 月購買于衡水市超市，取大蒜蒜瓣，用蒸餾水沖洗擦凈，陰涼處晾干，粉碎，稱量10 g 粉末置于干燥箱中保存備用。

供試主要試劑：無菌水、PDA 培養基（瓊脂20 g，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水1 L）。主要菌種：丹參根腐病病原菌。

1.2 主要儀器 高速組織搗碎機（上海標本模型廠）、立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊）、生化培養箱（上海一恒）、微波爐（格蘭仕）、電子天平（上海精科）、冰箱（容聲）、雙人單面凈化工作臺（上海博訊）、電磁爐（美的）等。

1.3 試驗方法 稱取研磨好的大蒜10 g，分別按料液比1∶2，1∶4，1∶6，1∶8，1∶10 比例浸泡蒸餾水，貼標簽，恒溫振蕩器震蕩24 h 后，進行超聲波細胞破碎儀破碎，超聲波破碎時間為20 min，超聲波破碎功率為10%。破碎后，用2 層紗布進行2 次過濾后定容，保存于2～4 ℃冰箱備用。

在超凈工作臺上，分別取出2 mL 大蒜提取液與15 mL融化的PDA培養基，加入90 mm 培養皿中，用玻璃棒攪拌均勻，加入等量無菌水作為對照。待培養基凝固后，用4 mm 的打孔器打取已經活化的丹參根腐病菌餅，然后把菌餅接入到培養基中，每個培養基中接3 個菌餅，每個處理3 個重復。置于26 ℃恒溫培養箱中培養。3 d 后用十字交叉法測量菌落直徑，算出每個平板菌落直徑的平均數，與對照菌落作比較，計算抑菌率。得出最佳提取條件。

抑菌率/%=[（對照菌落生長直徑-提取液處理菌落生長直徑）/對照菌落生長直徑]×100%

2 結果與分析

2.1 不同料液比條件下大蒜提取物對丹參根腐病菌抑制比較 由表1 可知，不同料液比大蒜提取物的抑菌結果差別較大，抑菌率首先隨著料液比的增加而逐漸增大，但在1∶10 時又出現了降低的現象，且小于了1∶6，但大于1∶2 和1∶4，抑菌率最高為1∶8，達到57.72%的抑菌率，抑菌率大小的排列順序為：1∶8＞1∶6＞1∶10＞1∶4＞1∶2。

表1 LED 法不同料液比抑菌率的比較

通過對抑菌率的方差分析可知，F=3.351，p=0.032＜0.05，說明料液比確實有處理效應，進行多重比較見表1，可知，1∶8 料液比下，大蒜提取液對丹參根腐病菌菌絲生長的抑制率最大，且與其他料液比條件相比差異顯著（p＜0.05），而與1∶6 和1∶10 相比差異沒達到極顯著水平。因此1∶8 為最佳提取料液比。

3 結論與討論

本文就大蒜不同料液比提取物對丹參根腐病菌的抑制效應進行了研究，在超聲時間、超聲功率均一定的條件下，以料液比作為單影響因素，確定了不同因素水平抑菌率的差異，通過方差分析和多重比較確定：1∶8 為最佳提取料液比，料液比太高反而降低了抑菌率。本試驗中用超聲波技術輔助提取大蒜的抑菌活性物質，既保持了大蒜內有效物質的活性，節省了提取時間，又增大了提取率。丹參根腐病的病原菌本實驗室已經鑒定是腐皮鐮刀菌，丹參根腐病是由腐皮鐮刀菌浸染所致的一種土傳病害，近年來在田間發病株率達10%～30%，導致丹參產量下降，品質變劣，本試驗結果為生物防治丹參根腐病提供了理論依據，為大蒜的開發利用開辟了新的途徑，表明大蒜防治丹參根腐病具有較好的應用前景。