400例免疫相關性周圍神經病患者抗神經節苷脂抗體檢測結果分析

李云珍，姚少濠，李 玲，蘇坤華，覃莉萍，張 玲，劉 勇△

1.廣州金域醫學檢驗中心有限公司，廣東廣州 510005；2.廣州中醫藥大學金沙洲醫院檢驗中心，廣東廣州 510005

免疫介導的周圍神經病主要侵犯周圍神經或神經節，發病機制目前尚不明確，其臨床特點為：亞急性起病，不對稱性的、多灶性的、選擇性的運動、感覺和自主神經功能異常。臨床常見的免疫相關性周圍神經病主要包括：急性炎癥性脫髓鞘多發性神經病(AIDP)、慢性炎癥性脫髓鞘性多發性神經病(CIDP)、多灶性運動神經病(MMN)、伴有IgM副蛋白脫髓鞘性神經病、POEMS綜合征、各種血管炎(包括系統性和非系統性)相關的周圍神經病等[1]。本研究旨在從體液免疫角度出發，分析免疫相關性周圍神經病患者血清和腦脊液中神經節苷脂抗體(GM1、GM2、GM3、GM4、GD1a、GD1b、GD2、GD3、GT1a、GT1b、GQ1b及硫脂的IgG和IgM抗體)存在情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月1日至2020年3月26日送檢廣州金域醫學檢驗中心的400例由臨床診斷為免疫相關性周圍神經病患者作為研究對象，其中男244例，女156例；年齡1～84歲，中位年齡45歲；格林-巴利綜合征213例，慢性炎癥性脫髓鞘性多發性神經病102例，Miller-Fisher綜合征36例，運動神經元病31例，多灶性運動神經病18例。選取血清和腦脊液進行抗神經節苷脂抗體檢測。

1.2儀器與試劑 SK-R1807-S實驗室翹板搖床(北京龍大科技發展有限公司)，抗神經節苷脂譜抗體(GM1、GM2、GM3、GM4、GD1a、GD1b、GD2、GD3、GT1a、GT1b、GQ1b、硫脂的IgG和IgM抗體)共24項檢測試劑盒(Generic Assays公司)。

1.3方法 第1步，患者標本中的自身免疫抗體與包被在測試條固相上的目標抗原結合。4 ℃震蕩反應120 min后，未結合的標本成分被洗液洗脫；第2步，與抗原結合上的抗體與連接了辣根過氧化物酶的抗IgG或抗IgM連接物特異性反應。4 ℃反應60 min后，多余的連接物在清洗過程中被從固相免疫復合物洗脫；第3步，堿性磷酸酶在膜上將無色底物轉變成暗紫色的沉淀線條，震蕩10 min后，用洗液清洗，反應終止。測試條在干燥后可以讀出結果。

1.4統計學處理 采用Excel表格計算陽性率，采用SPSS18.0統計軟件進行數據分析處理。計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同年齡患者抗神經節苷脂抗體陽性率比較 血清和腦脊液總檢測人數為400例，陽性總例數(血清和腦脊液任一標本陽性或血清和腦脊液同時陽性的數量)為131例，總陽性率為32.75%。血清陽性128例，陽性率為32.00%，腦脊液陽性24例，陽性率為6.00%。>60～70歲患者陽性率最高，為40.82%,其次是>30～40歲(38.30%)。各年齡段陽性率比較，差異無統計學意義(P=0.367)。見表1。

表1 不同年齡組抗神經節苷脂抗體陽性率比較

2.2男、女患者抗神經節苷脂抗體陽性率比較 244例男性患者中陽性84例，陽性率為34.43%；156例女性患者中陽性47例，陽性率為30.13%。男性陽性率雖高于女性，但差異無統計學意義(χ2=0.79,P=0.37)。見表2。

表2 抗神經節苷脂抗體男女性陽性率比較

2.3抗神經節苷脂抗體血清和腦脊液陽性占比情況 在總的131例陽性患者中，單獨血清抗體陽性最多，共107例，占總陽性的81.68%；其次分別是血清陽性抗體包含腦脊液陽性抗體18例，占總陽性的13.74%；單獨腦脊液抗體陽性3例，占總陽性的2.29%；血清和腦脊液抗體陽性不重疊有2例，占總陽性的1.53%；血清和腦脊液陽性抗體有部分重疊、部分不重疊最少，僅有1例，占總陽性的0.76%。

2.4不同抗神經節苷脂抗體陽性在400例患者血清和腦脊液中分布情況 總陽性率最高的是抗硫脂抗體IgG，占12.75%，其次是抗GM1抗體IgG，陽性率為8.50%，第3是抗GT1a抗體IgG，陽性率為7.75%。 24種抗體除抗GD3抗體IgM、抗GD1a抗體IgM和抗GT1b抗體IgM抗體3項未出現陽性外，其他抗體均有陽性情況。血清和腦脊液陽性率前3順序與總體陽性率一致。血清陽性率排序與總陽性率排序一致。腦脊液出現陽性抗體較少，有10種抗體，抗體陽性率排序基本與血清陽性率一致。見表3。

表3 不同抗神經節苷脂抗體陽性在400例患者血清和腦脊液中分布情況[n(%)]

2.5不同模式組合陽性及占總陽性的比例 131例抗體陽性患者共出現了57種抗體組合模式，不同模式中A模式(抗硫脂抗體IgG)陽性例數最多，為25例(19.08%)，其次是N模式(抗GM1抗體IgM)，陽性11例(8.40%)，第3是B模式(抗GM1抗體IgG)，陽性9例(6.87%)。見表4。

表4 不同模式陽性率及占總陽性率的比例

2.6檢測陽性抗體數目比較 單獨1種抗體陽性率最高，為73例(55.73%)，其次是兩種抗體陽性模式34例(25.95%)，第3是3種抗體陽性模式12例(9.16%)。

3 討 論

免疫介導的周圍神經病臨床表現非常多樣,同樣，這些疾病的抗體譜也有很大的差異性，抗周圍神經膜表面糖脂抗體與自身免疫介導的急性和慢性多發性周圍神經病有密切關系，此類抗體包括抗神經節苷脂抗體和抗硫脂抗體。神經節苷脂廣泛分布于全身各組織細胞膜的外表面，以神經系統水平最高，參與神經細胞膜的構成，并維持其穩定性,其分子由2個部分構成，一部分是位于神經細胞膜脂質層內疏水性的神經酰胺，另一部分是暴露于膜表面的親水性的低聚糖基。神經節苷脂種類很多，主要根據其糖基結合唾液酸分子的數目及部位進行分類，含一個分子唾液酸為單唾液酸神經節苷脂(GM)；含2、3、4個唾液酸分子分別為GD、GT和GQ。又根據所含己糖的數目和種類分為GM1、GM2、GM3、GM4。硫脂是髓鞘膜上含硫酸殘基的酸性糖脂，參與神經鞘膜的構成并與神經鞘膜生理功能密切相關。抗神經節苷脂抗體可能通過結合分布于特定部位的相應抗原而致病，并導致出現相應的臨床癥狀。

本研究結果顯示，400例患者抗神經節苷脂抗體總陽性率為32.00%，血清陽性128例，陽性率為32.00%，腦脊液陽性24例，陽性率為6.00%，血清陽性率高于腦脊液。目前，對腦脊液中抗體分析及產生機制的報道甚少，吳德云等[2]對吉蘭-巴雷綜合征(GBS)和CIDP患者血清和腦脊液中硫脂抗體水平的相關性分析表明，無論是IgG型還是IgM型抗硫脂抗體均無相關性，說明患者血清和腦脊液中抗硫脂抗體并非同一來源，腦脊液中的抗硫脂抗體合成部位可能在鞘內。單獨血清抗體陽性最多，共107例，占總陽性的81.68%，其次是血清陽性抗體包含腦脊液陽性抗體，為18例，占總陽性的13.73%，第3是單獨腦脊液抗體陽性(3例)，占總陽性的2.29%。血清和腦脊液抗體陽性不重疊僅占總陽性的1.53%，血清和腦脊液抗體陽性有部分重疊、部分不重疊最少(1例)，占總陽性的0.76%。血清和腦脊液均能檢測到相關抗體，證明二者之間無相關性，這可能提示血清和腦脊液中均存在針對免疫性周圍神經病的免疫反應，并且參與了免疫性周圍神經病的發病機制。抗神經節苷脂抗體大部分在血清中被檢測到，并且腦脊液大多數陽性抗體與血清重疊，也有可能是抗體介導的免疫反應破壞了血腦屏障的完整性，增加其通透性，推測在血清中產生后進入腦脊液。

不同年齡、不同性別患者陽性率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，但與劉玲春等[3]報道的免疫反應介導的周圍神經病多發生于30～50歲的中、青年,其中男女比例約為1.7∶1.0不同；與SEJVAR等[4]報道的GBS男性與女性的比例為3∶2，兒童發病率較成人低，且發病率隨著年齡增長而增加不同；與YEH等[5]報道的多灶性運動神經病常見于男性，男女比例為2.7∶1.0，癥狀發作年齡為20～70歲，平均40歲也不相同。這可能與研究的疾病分類和數據差異有關。

特定抗神經節苷脂抗體和具有某些特異臨床特點的神經系統疾病相關，本研究中血清和腦脊液抗體陽性率排前3位的抗體均為抗硫脂抗體IgG、抗GM1抗體IgG和抗GT1a抗體IgG，順序與總體陽性率一致。血清陽性率排序與總體陽性率排序一致。腦脊液出現陽性抗體較少，有10種抗體，抗體陽性率排序基本與血清陽性率一致。本研究發現，在神經節苷脂抗體譜檢查出現陽性結果患者中，共出現了57種抗體組合模式，不同模式中A模式(抗硫脂抗體IgG)陽性例數最多，為25例(19.08%)，其次是N模式(抗GM1抗體IgM)，其陽性例數為11例(8.40%)，第3是B模式(抗GM1抗體IgG)，其陽性例數為9例(6.87%)。GM1是神經膜最豐富的神經節苷脂抗體之一[6]，而硫脂在周圍神經組織中水平是任何節苷脂的100倍以上[7]。在一些GBS和CIDP患者血清中可檢測到高滴度的抗硫脂抗體，但對于抗硫脂抗體在炎性周圍神經病中的致病機制尚不十分清楚。抗GM1抗體IgG與急性運動性軸索型神經病及AIDP相關[8]，GM1抗體是MMN一個有效的診斷標記[9]。抗GM1和抗硫脂抗體也常見于抗中性粒細胞胞漿抗體相關性血管炎和其他多器官免疫介導疾病患者[10]，抗GT1a抗體IgG的存在和疾病的重疊提示咽-頸-臂-肱變體不僅與GBS密切相關，而且與費雪綜合征和腦干腦炎也密切相關[11]。抗GT1a抗體與GBS的暴發和空腸彎曲菌相關菌株中神經節苷脂模擬關聯[12]。ALPA等[13]報道的復發性GBS中也會出現抗GT1a抗體IgG和抗GQ1b抗體IgG。

單獨1種抗體陽性率最高[73例(55.73%)]，其次是兩種抗體陽性模式[34例(25.95%)]，第3是3種抗體陽性模式[12例(9.16%)]，兩種以上抗體陽性占比44.27%。單獨某個抗神經節苷脂抗體的臨床意義不同，多種抗神經節苷脂抗體同時出現陽性結果，可能具有不同的臨床特點，不同種類神經節苷脂之間具有相似的抗原表位，也可能發生不同抗體之間的交叉反應。

診斷免疫介導的周圍神經病，抗體檢測具有重要性。血清和腦脊液中可檢測到相應的抗神經節苷脂譜抗體,這些抗體的出現對于確定病因及診斷分型有很大的幫助，可為早期診斷、鑒別診斷及有效治療等提供幫助。